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α-羟丁酸脱氢酶与恶性病变的关系
α-羟丁酸脱氢酶与白血病的相关性在慢性粒细胞性白血病研究方面:慢性粒细胞性白血病(CML)有慢性期、加速期、急变期三个病期.
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CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析
目的探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化.方法分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI 1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异.结果总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个).结论全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值.
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尼洛替尼治疗伴V299L突变的慢性髓性白血病二例
本研究提高对尼洛替尼治疗伊马替尼耐药伴V299L突变的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者的临床认识.收集我院2例伴V299L突变的CML患者尼洛替尼治疗前后的骨髓标本,采用巢式PCR扩增并测序的方法检测ABL突变,分析临床特征.结果表明,2例伊马替尼耐药的CML患者均发生V299L突变,1例经尼洛替尼治疗6个月后V299L突变转为阴性,并取得完全血液学缓解;另1例经尼洛替尼治疗7个月后V299L突变转为阴性,并取得明显分子学缓解.结论:尼洛替尼治疗伊马替尼耐药伴V299L突变的CML患者安全性和疗效令人满意.
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SARI基因过表达对K562细胞系生物学影响的研究
目的:通过构建SARI慢病毒表达载体,探讨SARI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响.方法:采用RT-PCR方法获得目的基因并重组pLOV.CMV.GFP质粒,构建pLOV.CMV.GFP-SARI表达载体.通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后,获得阳性病毒颗粒,并以病毒颗粒感染K562细胞系.采用Q-PCR及Western blot方法验证感染后K562细胞SARI基因转录和蛋白水平的表达情况,同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况,以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化.结果:利用RT-PCR方法获得SARI基因并成功构建了含SARI基因的慢病毒表达载体,从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比,过表达SARI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加,而细胞周期无显著变化.结论:SARI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,提示诱导SARI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用.
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急性和慢性髓系白血病患者SALL4基因的表达
本研究旨在探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中SALL4基因的水平状态及其临床意义.应用RQ-PCR方法检测35例AML、12例CML患者和24例缺铁性贫血患者(作为对照)骨髓单个核细胞(BMMNC) SALL4 mRNA表达水平.结果表明,AML患者SALL4表达水平(0%-14%,中位1.43%)明显高于对照组(0%-1%,中位0%)(P<0.001),65.7% (23/35) AML患者中SALL4转录本呈阳性,SALL4表达频率依次为M2(86.7%,13/15)、M3(75.0%,6/8)、M1 (60.0%,3/5)、M4(14.3%,1/7),4组间的差异有显著性(P=0.008);SALL4表达频率与AML患者年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数和染色体异常均无相关性(P>0.05).13例CML患者中SALL4转录本均为阳性表达,相对含量为1%-128%(中位19.39%),明显高于对照组(P <0.001).采用接收者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析显示,AML和CML曲线下面积(AUC)分别为0.983(95%可信区间0.95-1.017)和0.997(95%可信区间0.986-1.007).结论:SALL4基因表达是AML和CML中常见的分子事件并且可考虑作为AML和CML辅助诊断的分子标记.
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β-catenin特异的shRNA干扰对K562细胞作用的初步研究
本研究在探讨β-联蛋白(β-catenin)序列特异的小发夹RNA(shRNA)干扰其表达后对K562细胞生长的影响.采用脂质体介导方法,将含编码β-联蛋白特异的shRNA的质粒转入K562细胞,经G418筛选提高细胞阳性率,用实时定量PCR和Western blot分别检测干扰后β-联蛋白转录水平及蛋白水平的表达变化,通过绘制生长曲线、MIT测定及集落培养等方法观察干扰后细胞生长能力的差别.结果发现:与对照组相比,转染后72小时干扰质粒可有效降低K562细胞β-联蛋白mRNA水平的表达(p<0.05),但短期培养对蛋白水平的表达未发现明显影响.经G418长期筛选后,对照组可见细胞阳性率逐渐提高,并可筛选到几近100%阳性的细胞克隆,而干扰组细胞则逐渐死亡.在G418存在下,干扰组与对照组K562细胞短期增殖曲线及MIT结果显示两组间无明显差异,但集落培养发现,干扰组细胞无论集落形成率(p<0.001)还是形成的集落大小均明显低于对照组,说明干扰质粒可影响细胞的集落形成能力.结论:β-联蛋白特异的shRNA干扰可以有效降低K562细胞中β-catenin基因的表达,降低细胞集落形成能力;K562细胞的生长依赖于β-联蛋白的存在,针对β-联蛋白的RN Ai治疗或其它靶向治疗可能对CML治疗有效.
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CHIP基因稳定转染人慢性髓系白血病K562细胞诱发有丝分裂异常
本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP(carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interacting protein)的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型,以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响.采用脂质体介导的方法,经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U-box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆.对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测相关蛋白表达,瑞氏-姬姆萨染色进行细胞形态学观测.结果表明,过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响,细胞周期中G2/M期细胞比率增加,CHIP对BCR-ABL激酶的稳定性没有影响,但却明显导致细胞形态异常,表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多,出现异常有丝分裂相等,提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用.结论:野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常.
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姜黄素在CML原代细胞STAT5信号途径中的作用
为了研究姜黄素对慢性粒细胞白血病(CML)原代细胞信号转导和转录激活因子5(signal transducers and acttvators of transcription5,STAT5)信号途径的影响,并探讨姜黄素治疗CML的临床意义,将实验分为三组:正常对照组,CML细胞组和姜黄素组.运用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性,运用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞STAT5 mRNA的变化,运用电泳迁移率改变分析法(electrophoretic mobility shift assay.EMSA)检测细胞STAT5活化水平.结果表明:姜黄素组细胞增殖活性(OD值0.640±0.073)低于CML细胞组(0.856±0.083),差异有显著性意义(P<0.01).CML细胞组STAT5 mRNA(光密度积分比值1.782±0.156)较正常对照组(光密度积分比值0 289±0.025)明显增高(P<0.01),姜黄素组细胞STAT5 mRNA(光密度积分比值1.398±0.126)低于CML细胞组,差异有显著性意义(P<0.01).CML细胞组STAT5活化水平(灰度面积值5323.375±515.640)明显高于正常对照组(灰度面积值2943.000±273.377),差异有显著性意义(P<0.01).姜黄素组细胞STAT5活化水平(灰度面积值4331.750±398.035)低于CML细胞组,差异有显著性意义(P<0.01).结论:CML原代细胞增殖、STAT5 mRNA、STAT5活化水平明显增高,STAT5信号途径可能参与了CML细胞的增殖.姜黄素能抑制CML原代细胞增殖和STAT5 mRNA,并使STAT5活化水平下调.姜黄素具有抗白血病的作用.
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慢性粒细胞白血病细胞形态学分析
慢性粒细胞白血病(简称慢粒或CML)是起源于异常多能干细胞的骨髓增殖性疾病,常表现为外周血粒细胞增高和出现各阶段幼稚粒细胞,嗜酸、嗜碱粒细胞增高,是慢性髓细胞白血病中多见的一种类型,占95%左右,其中不典型慢粒占4%~5%[1].笔者从事血液病检验工作以来,总结本院诊断慢性粒细胞白血病病例的细胞学形态特征及血液学改变分析如下.
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慢性粒细胞白血病发病机制及研究进展
慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)是一种常见的造血系统恶性肿瘤,也是我国青少年中常见肿瘤之一,其高度增生和恶性侵袭的生物学特性使其临床防治一直是一个难点.下面我从慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)的发病机制及研究进展等方面进行综述:慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)是一种发生在多能干细胞上的恶性骨髓增生性疾病(获得性造血干细胞恶性克隆性疾病).病程发展缓慢,主要涉及髓系,外周血粒细胞显著增多并有不成熟性,脾大.在受累的细胞中,可找到pH染色体或BCR-ABL融合基因.
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银染技术在白血病诊断中的应用
目的:探讨核仁形成区嗜银蛋白(AgNOR)在白血病中的表达关系。方法用银染技术检测白血病共计64例,其中非何杰金淋巴瘤白血病(AHL-L)24例、急性粒细胞白血病(AML)21例、慢性粒细胞白血病(CML)19例与非恶性白血病15例进行对照。结果三种白血病的 AgNOR 分别与对照相比有显著差异(P<0.01)。结论 AgNOR 在诊断白血病和判断预后有临床意义。
关键词: AgNOR AML CML 非何杰金淋巴瘤白血病 -
慢性髓性白血病cyclin E基因蛋白表达及临床意义
目的探讨CML患者Cyclin E基因蛋白表达特点.方法利用免疫组织化学实验方法检测34例CML患者Cyclin E基因蛋白.结果CML患者Cyclin E基因蛋白表达明显高于对照组,有极显著性差异(P<0.001).CML患者治疗前与治疗后Cyclin E阳性表达率也存在着明显差异(P<0.05),同时还观察了急变期/加速期、慢性期、缓解期Cyclin E基因蛋白表达,在急变期/加速期、慢性期时呈高表达状态与缓解期比较有显著性差异(P<0.05).结论Cyclin E基因蛋白表达与CML患者病情进展程度密切相关,该研究工作揭示CML的分子发病机制,同时对CML的诊断和疗效监测具有十分重要的临床应用价值.
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HAE方案治疗非慢性期慢性粒细胞白血病疗效观察
慢性粒细胞白血病(CML)为临床常见的恶性血液病,是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,临床经过可分为慢性期、加速期、急变期,临床治疗有一定差异.异基因造血干细胞移植及格列卫是根治CML的好办法,由于我国经济水平限制,接受这些治疗的人群有限,因此需要寻找新的治疗CML的方法,以便能解决大多数患者的治疗问题.回顾分析我院自2004~2008年所收治的23例经HAE方案治疗的非慢性期慢粒患者临床资料,现报道如下.
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23例慢性粒细胞白血病用高三尖杉酯碱治疗的临床分析
慢性粒细胞白血病(CML)是累及造血系统干细胞系的恶性肿瘤疾病,临床表现多表现为乏力、低热、多汗或盗汗,体质量减轻,脾脏肿大,少数患者有出血倾向.病程较长,发病年龄在21~40岁的人数多.近年来出现了很多新方案治疗慢性粒细胞白血病,如造血干细胞移植、伊马替尼、α-干扰素(IFN-α)治疗CML,但由于价格及耐药等原因,上述方案的应用受到限制.现对本院自2000~2008年间的23例慢粒白血病用高三尖杉酯碱治疗效果进行分析,发现应用高三尖杉酯碱(HHT)治疗CML有良好的血液学反应.现报告如下.
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干扰素α治疗慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突细胞变化的观察
干扰素α(IFN-α)作为第一个被广泛研究的人类细胞因子[1],不仅对病毒感染性疾病确有疗效,而且对于多种恶性肿瘤也有一定疗效.IFN-α治疗慢性粒细胞白血病(CML)虽缓解率低.但对部分患者可达治愈的效果[2],这是除异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗以外,包括伊马替尼在内的其他一切治疗都无法达到的.
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塞来昔布联合干扰素α对K562/A02细胞增殖的影响及其机制
尽管酪氨酸激酶抑制剂已成为治疗慢性髓系白血病(CML)的一线药物,但干扰素α(IFN-α)在CML治疗中不可或缺,因为IFN-α治疗可使27%的患者获完全细胞遗传学缓解(CCR),约50%获CCR的患者可长期保持CCR,中止IFN-α治疗后仍有部分患者可持续保持CCR,而酪氨酸激酶抑制剂治疗获CCR后一旦停药,几乎所有患者都会复发[1],但IFN-α的临床疗效不高限制了其在CML治疗中的广泛应用.
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塞来昔布对K562细胞BCR-ABL融合蛋白及下游增殖信号转导途径的影响
慢性粒细胞白血病(CML)具有特征性的染色体易位t(9;22)(q34;q11),产生bcr-abl融合基因,编码BCR-ABL融合蛋白(P210),后者通过持续激活蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性,并激活JAK-STATS等信号转导途径,导致细胞增殖调节失控.
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慢性粒细胞白血病突然急变一例报告及文献复习
大多数慢性粒细胞白血病(CML)患者的自然病程是起病于慢性期,其后病情逐步进展进入加速期,继之发生急性变,但约有20%~25%的患者可由慢性期直接进入急变期,其中部分患者是由完全血液学缓解(CHR)状态,甚至是完全细胞遗传学缓解(CCR)状态快速转变进入急变期,相对于大多数缓慢发生急性变(gradual blastic transformation,GBT)的患者而言,这部分患者称为突然急变(sudden blastic transformation,SBT)[1].SBT相对少见,我们报道1例,并对有关文献进行复习.
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一例Ph染色体转阴的慢性粒细胞白血病患者非典型bcr-abl融合基因b2a3分析
慢性粒细胞性白血病(CML)具有特征性的Ph染色体,即t(9;22)(q34;q11),产生bcr-abl融合基因.由于bcr基因的断裂位点不同,导致了bcr-abl融合基因的多种类型.目前文献报道主要有三种类型,M-bcr,包括b3a2和b2a2型编码P210融合蛋白;m-bcr编码P190融合蛋白;e19a2型编码P230融合蛋白.
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脾切除治疗慢性粒细胞白血病造血干细胞移植后全血细胞减少患者三例分析
异基因外周血造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前治愈慢性粒细胞白血病(CML)的方法之一.移植后血细胞减少是常见的并发症,通过二次移植可以治疗血细胞减少,但长期生存率不高.脾脏对移植的影响一直存在争议.动物及临床试验表明,脾脏会影响移植物功能.巨脾与植入的延迟有父.移植前脾区放疗的患者,中性粒细胞恢复较快,但移植前切脾或脾区放射对移植总生存率并无明显影响.我们对3例CML移植后全血细胞减少患者,排除其他影响造血恢复的因素后进行脾切除治疗,取得较好的效果,现报道如下.