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急性髓系白血病中FIP1L1-PDGFRA基因突变的检测及临床价值
目的：探讨急性髓系白血病患者FIP1L1-PDGFRA基因突变的检测情况及临床意义。方法：应用巢式PCR检测86例急性髓系白血病患者外周血中 FIP1L1-PDGFRA 基因突变情况。结果：共6例急性髓系白血病患者检测到FIP1L1-PDGFRA基因突变，其中M4EO 3例，M22例，M51例。结论：FIP1L1-PDGFRA基因突变可在急性髓系白血病患者检测出，以M4EO多见。
关键词： FIP1L1-PDGFRA 急性 髓系 白血病 -
DNA甲基转移酶在慢性髓系白血病患者的表达及临床意义
目的:探讨慢性髓系白血病(CML)患者骨髓或外周血单个核细胞DNA甲基转移酶(DNMT)的表达水平及临床意义.方法:应用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测94例3个不同时期CML患者及10例正常对照者骨髓或外周血单个核细胞中DNMT mRNA的表达水平.结果:正常对照(NC)组、CML慢性期(CML-CP)、加速期(CML-AP)、急变期(CML-BP)组DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为1.45±0.22、1.83 ±0.63、2.95±0.87、3.24±1.39,CML-CP组患者与NC组比较表达水平差异统计学意义(P=0.28);CML疾病进展期包括(CML-AP和CML-BP)较NC和CML-CP组表达水平显著增高(P ＜0.01);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P=0.336).NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3a mRNA的相对表达水平分别为1.29±0.34、1.34±0.46、2.33±1.05、3.18 ±1.23.CML-CP组患者与NC组比较表达水平无统计学差异(P=0.844);CML疾病进展期较NC组和CML-CP组表达水平显著增高(P＜0.05);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P =0.304).NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3b mRNA的相对表达水平分别为1.37 ±0.31、16.41 ±22.50、9.36 ±5.50、12.17±13.44,在CML患者较在NC组表达水平显著增高(P＜0.05).CML患者各期之间比较无统计学差异(P＞0.05).结论:疾病进展期CML患者中DNMT mRNA表达增高,DNMTmRNA表达水平与CML疾病进展相关.
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类风湿性关节炎动物模型中HIF-1α的表达
类风湿性关节炎(RA)属自身免疫性疾病,其发病机制迄今没有完全阐明,临床上尚缺乏根治RA的方案和预防的措施.缺氧诱导因子-1(HIF-1)是近年来发现的一种机体适应缺氧的重要转录调节因子,由α和β两个亚基构成,其中β亚基为组成性表达.在缺氧条件下,HIF-1α蛋白及其靶基因表达增加.2003年Cramer等发现HIF-1α和髓系细胞介导的机体炎症反应密切相关.
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高三尖杉酯碱在慢性髓性白血病治疗中的作用机制
酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）的出现，通过降低疾病进展的风险，大大提高了慢性髓性白血病（CML）患者的疗效，延长了患者的生存期，但对于进入疾病进展期患者疗效仍较差。而高三尖杉酯碱（HHT）在治疗进展/耐药的CML患者疗效显著。该文就HHT在CML治疗中的作用机制作一简要综述，旨在为CML的治疗提供实验依据和临床参考。
关键词： 白血病 髓系 慢性 BCR-ABL 阳性 药理作用分子作用机制 高三尖杉酯碱 -
用COLD-PCR方法提高BCR-ABL1激酶区耐药突变检测灵敏度
目的 探讨用低变性温度共扩增PCR(COLD-PCR)方法提高BCR-ABL1融合基因激酶区耐药突变检测灵敏度的可行性.方法 本研究为实验诊断研究.设计常规巢式PCR(CN-PCR)和COLD-PCR方案扩增BCR-ABL1激酶区全长,扩增产物纯化后用Sanger测序法检测激酶区突变(KDM).采集32例经伊马替尼(IM)治疗并出现耐药的慢性粒细胞性白血病(CML)患者和20例初诊CML患者外周血或骨髓标本,用上述2种方案检测标本中的KDM.用PCR扩增和基因克隆方法鉴定患者标本中KDM所占比例.制备含不同KDM比例的标准品,对比分析2种方法的检测灵敏度.结果 32例IM耐药患者中,共检出15种KDM.其中用CN-PCR方法检出23例(71.9％) KDM阳性,用COLD-PCR检出28例(87.5％) KDM阳性.在20例初诊CML患者中,用CN-PCR未检出KDM,用COLD-PCR方法检出1例有p.E459K突变,突变型基因比例为3.5％.对于16种不同类型的KDM,COLD-PCR方法可提高检测灵敏度4～12倍.结论 用COLD-PCR方法可有效提高BCR-ABL1激酶区耐药突变的检测灵敏度,有助于早期发现耐药突变.
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早幼粒细胞白血病蛋白在髓系白血病细胞中的表达及对细胞增殖的影响
目的 探讨早幼粒细胞白血病(promyelocyte leukemia,PML)蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异.构建PML的真核表达载体,转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株,以稳定表达空载体的细胞为对照.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响,并进一步用反转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)检测增殖相关因子c-myc和p27kip1(p27) mRNA水平以及蛋白表达水平的改变.后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异.结果 CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平(△Ct=9.02±0.74)明显低于健康对照组(△Ct =7.91 ±0.34),差异有统计学意义(t =5.07,P＜0.001).PML过表达能明显抑制K562细胞增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞.PML稳定表达的K562细胞中,c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低,p27的mRNA和蛋白表达水平升高.CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平(△Ct =7.13 ±0.43)显著高于健康对照组(△Ct =9.35 ±0.82),差异有统计学意义(t=6.78,P＜0.001),而p27的mRNA表达水平(△Ct =4.56±0.58)则显著低于健康对照组(△Ct=3.29±0.92),差异有统计学意义(t=2.93,P＜0.01).结论 PML在CML患者中低表达,PML可能通过调节c-myc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖.
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我国210例伊马替尼耐药慢性髓细胞白血病和Ph阳性急性淋巴细胞白血病ABL1基因突变特征
目的 了解伊马替尼治疗后效果不佳的慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)及Ph阳性急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者BCR-ABL1激酶区突变(kinase domain mutation,KDM)的特征.方法 选取2007年9月至2010年12月北京市道培医院177例CML患者和33例Ph(+)ALL患者,均为我国患者.在患者治疗初期有效、后出现耐药时,或者治疗3个月以上疗效不佳时采集骨髓或外周血标本,共计243份.提取标本有核细胞中总RNA,反转录为cDNA.用巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增标本中BCR-ABL1融合基因的激酶区全长(第242～ 493位氨基酸的编码序列),使用AB3130XL型基因测序仪测定ABL1激酶区的基因序列,使用Variant Reporter V1.0软件分析基因突变结果.结果 共检测到32种ABL1基因不同种类的点突变,检出率为34.2％( 83/243).其中T315I占12％ (10/83),检出的突变率高；其余依次为Y253H占11％ (9/83),G250E占7％ (6/83),E255K占7％ (6/83),M351T占6％ (5/83),E459K占5％ (4/83)；Q252H、D276G、F317L、E355G、F359V、H396R均与4％ (3/83).并发现了3例插入突变,2例为357-358insk,1例为V304RfsX17.在7例患者中发现同时存在2种以上的点突变.多种耐药突变可同时存在于1个克隆中,同一个体不仅有常见的耐药突变,也会出现少见的点突变、缺失突变、插入突变甚至导致激酶活性缺失的突变.结论 伊马替尼药物压力下白血病细胞的ABL1基因突变会随机出现,产生不同的耐药克隆；不同的耐药克隆可以在同一个体内并存.耐药克隆不仅有基因突变,还存在插入缺失突变.
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IKZF1突变在慢性粒细胞白血病急变成急性淋巴细胞白血病中的作用
目的 探讨IKZF1基因变异与慢性髓细胞白血病急变的关系.方法 选取北京大学第一医院及陆道培血液肿瘤中心2009年6月至2011年10月就诊的212例白血病[156例急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、20例急性髓性白血病(AML)、36例慢性髓细胞白血病(CML)]患者及10名健康对照者为研究对象.采用巢式PCR方法扩增患者初治或急变期标本中IKZF1基因cDNA,PCR后的产物进行电泳检测,对异常扩增片段进行基因测序分析,以确定IKZF1基因的不同亚型.结果 BALL中常有IKZFI异常表达,156例B-ALL中43例(27.6％)出现IKZF1异常表达.20例AML和10名健康对照者标本中均未检测到IKZF1异常表达.BCR-ABL1阳性B-ALL有IKZF1异常表达,38例中有30例(79.0％)增高,其中25例表达Ik6、2例表达Ik9、1例表达Ik7,2例IKZF1表达缺失.BCR-ABL1阴性的118例B-AL中,仅有13例(11.0％) IKZF1异常表达(均为Ik6).CML初治和慢性期标本中均未检测到IKZF1异常表达.CML发生B-ALL急变的12例患者中,7例(58.3％)有Ik6表达；而发生AML急变的CML标本中均无IKZFI异常表达.结论 IKZF1基因变异所致的2次打击是CML急变为B-ALL的一个重要因素.
关键词： 白血病 髓系 慢性 前体B细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤 Ikaros转录因子 突变 -
慢性髓细胞白血病BCR/ABL1突变克隆演化和治疗策略
伊马替尼的应用使很多慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者获得了长期生存,但是CML的BCR-ABL1融合基因激酶区突变(kinase domain mutation,KDM)会造成耐药.KDM有多种类型,不同类型是随机出现的.带有不同KDM特征的白血病克隆有一定的演变规律.在伊马替尼用药期间,耐药程度较高的突变细胞容易发展为优势克隆.建议在治疗伊马替尼耐药的CML时,除了努力发展下一代酪氨酸激酶抑制剂以外,还可考虑用传统药物来辅助治疗.
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采用多功能流式细胞术分析分选造血干细胞和髓系定向分化祖细胞
目的 探讨富集纯化造血干细胞(HSC)和髓系定向分化祖细胞的新实验方案.方法 根据造血干细胞和定向分化祖细胞在发育过程中表达某些特异性分化抗原的特性,通过免疫磁珠分选技术结合四色和六色流式细胞术分析14只健康小鼠的骨髓造血干细胞、造血祖细胞及定向分化祖细胞系列的表达,并对其进行分选,以进一步通过集落细胞培养和传代试验对分选后细胞的活性进行检测.结果 经上述实验方案分析,14只健康小鼠骨髓造血祖细胞(HPC)的表达率约为HSC的10倍;但其牛成活性远不如造血干细胞,共同髓系祖细胞(CMP)的传代能力仅为HSC的1/2,且次级分化的粒系单核系祖细胞(GMP)和红系巨核系祖细胞(MEP)的生成活性更弱,其传代次数为零.结论 通过多色流式细胞术实验方案可以分析纯化HSC和髓系定向分化祖细胞的表达,并精确计数HSC和祖细胞.
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老年人急性白血病的治疗与生存分析
近年来急性白血病(AL)发生率在老年人群有上升趋势,急性髓系白血病(AML)占成人AL的80％.据报道老年人AML发病的中位年龄为67岁,75岁以上占35％[1].老年患者的治疗完全缓解率和总生存率与中青年患者比较明显下降.目前,尚无适合老年AML患者的佳治疗方案,对初诊老年白血病的治疗方法主要有,采用非老年人标准诱导方案化疗,根据老年人自身脏器功能情况选择减低剂量诱导治疗及维持治疗.现将我院治疗30例65岁以上老年白血病患者病情及采取的治疗方式和生存情况进行了分析.
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国产与原研伊马替尼治疗初发慢性髓性白血病慢性期患者有效性和安全性比较的单中心、前瞻性队列研究
目的 评价原研甲磺酸伊马替尼和国产仿制品治疗新诊断慢性髓性白血病慢性期(CML-CP)患者的有效性和安全性.方法 新诊断的CML-CP患者根据经济承担能力分别接受原研甲磺酸伊马替尼(格列卫)或国产仿制品(昕维)治疗,药物起始剂量均为400 mg/d,定期评价有效性和安全性.结果 从2014年1月至2015年9月,共纳入145例患者,其中国产药组89例,原研药组56例,疗程均≥3个月.3个月时,国产药组和原研药组的完全血液学反应率分别为95.5％ (85/89)和100％(56/56),主要细胞遗传学反应率分别为74.2％(66/89)和80.4％ (45/56),国际标准化BCR-ABL融合基因转录本水平(BCR-ABLIS)≤10％的比例分别为76.1％(67/88)和82.1％(46/56),两组间差异均无统计学意义(P值均＞0.05).在6、12和18个月时可评估病例中,两组治疗反应率相似(P值均＞0.1).中位追踪随访期约为1年,国产药组和原研药组各有2例患者疾病进展至加速期或急变期.两组血液学和非血液学不良反应发生率相似.结论 初发CML-CP患者采用原研伊马替尼或国产仿制品昕维治疗的早期治疗反应、疾病进展及不良反应无明显差异.
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2-甲氧基雌二醇对白血病细胞周期的影响及其机制
2-甲氧基雌二醇(2-ME2)是17β-雌二醇在体内的生理代谢产物.近来研究发现诱导肿瘤细胞发生周期阻滞是2-ME2发挥其抗肿瘤作用的重要机制.但目前关于2-ME2对白血病细胞周期影响的报道尚少.我们以淋系白血病细胞株CEM和髓系白血病细胞株K562作为研究对象,初步探讨2-ME2对白血病细胞周期的影响及可能的作用机制.
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慢性粒细胞白血病发病机制及研究进展
慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)是一种常见的造血系统恶性肿瘤,也是我国青少年中常见肿瘤之一,其高度增生和恶性侵袭的生物学特性使其临床防治一直是一个难点.下面我从慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)的发病机制及研究进展等方面进行综述:慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia CML)是一种发生在多能干细胞上的恶性骨髓增生性疾病（获得性造血干细胞恶性克隆性疾病）.病程发展缓慢,主要涉及髓系,外周血粒细胞显著增多并有不成熟性,脾大.在受累的细胞中,可找到pH染色体或BCR-ABL融合基因.
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伴髓系抗原表达的高危儿童急淋白血病临床生物学特征及长期预后分析
My-ALL患儿在临床特点以及疗效等方面两组之间差异无显著性意义.结论 高危ALL无论有无髓系抗原的表达其疗效无显著性差异,髓系抗原阳性表达在高危儿童ALL时不能作为预后不良的因素.
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伴t(8;21)/AML1-ETO的儿童急性髓系白血病的临床研究
目的探讨伴t(8;21)/AML1-ETO的儿童急性髓系白血病(AML)的临床及生物学特征.方法52例初治患儿,男34例,女18例,中位年龄12(4～18)岁,均进行了遗传学和/或AML1-ETO融合基因检测.诱导缓解治疗采用HA/DA/HAD方案,缓解后进行异基因造血干细胞移植或7～12疗程的联合化疗.结果 24%的儿童AML伴t(8;21)/AML1-ETO,男女比例1.9,FAB分型为M250例(96%);初诊时伴中枢神经系统浸润7.7%(4/52);WBC17.2(1.8～146.3)×10 9/L,初诊时WBC大于10×10 9/L者50.0%(26/52),大于50×10 9/L者3.8%(2/52),血清乳酸脱氢酶升高者85.7%(36/42);细胞免疫分型CD19(44.4%),CD56(58.9%);单独为t(8;21)异常的13例(28.9%),Y染色体丢失22例,占男性患儿的64.7%;X染色体丢失3例,占女性患儿的16.7%,del(9q)6例;1疗程及2疗程完全缓解(CR)率分别为71.8%(28/39)和94.4%(34/36),4年的EFS率、DFS率和OS率分别为(25.4±9.6)%、(28.4±10.4)%和37.9±10.3)%.结论近1/4的儿童AML伴t(8;21)/AML-ETO,多见于FAB分型的M2型,男性居多,年长儿多发,易发生髓外浸润;高白细胞者少见,血清乳酸脱氢酶增高,细胞免疫分型较多表达CD19和CD56;细胞遗传学检查常伴有性染色体丢失和del(9q);诱导缓解治疗完全缓解率高,应用联合化疗进行巩固强化远期疗效好.
关键词： 白血病 髓系 急性 儿童 t(8 21) AML1-ETO -
婴儿慢性髓系细胞白血病3例报告
目的加深对婴儿慢性髓系白血病临床特点的认识.方法回顾1989-2004的我科收治的3例婴儿慢性髓系细胞白血病的临床表现,实验室检查并复习相关文献.结果3例均为男婴,表现为发病较急,贫血,出血,肝脾中等程度增大,外周血象及骨髓异常改变.2例进行了染色体及免疫分型检查.3例中有2例为幼儿型慢性粒细胞白血病,且1例发生了慢粒急淋变,1例为慢性粒一单细胞白血病.结论婴儿慢性髓系白血病罕见,临床特点与成人型显著不同,避免漏诊、误诊.
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儿童正常核型急性髓系白血病核仁磷酸蛋白和髓系转录因子CCAAT增强子结合蛋白A基因突变的临床研究
目的 探讨儿童正常核型急性髓系白血病(CN-AML)中核仁磷酸蛋白(NPM1)和髓系转录因子CCAAT增强子结合蛋白A(CEBPA)基因突变的发生率,并初步了解其临床特征及对预后的影响.方法 收集2009年8月至2012年12月在中国医学科学院血液病医院儿童血液病诊疗中心住院的CN-AML患儿初诊时骨髓单个核细胞,采用基因组DNA-PCR方法分别扩增其NPM1、CEBPA基因,对PCR产物进行测序分析NPM1第12外显子突变、CEBPA基因外显子.回顾性分析这组患儿的临床资料,并研究NPM1突变、CEBPA突变与临床特征、治疗反应之间的关系.结果 本组30例,3例(10％)NPM1突变者均为A型突变,2例(6.7％) CEBPA突变者均为双位点突变,另有3例FLT3/ITD突变患儿.伴NPM1突变或FLT3/ITD突变患儿初诊白细胞计数为102.80×109/L(24.40×109～252.10×109/L),骨髓幼稚细胞比例为94.0％(88.0％～97.5％),高于无突变患儿[18.56×109/L(0.77×109 ～ 388.80×109/L)、80.0％ (16.0％ ～98.0％)](t=2.353,P=0.043;t=3.804,P=0.002).NPM1或CEBPA突变患儿第1疗程均完全缓解,2年无事件生存率及总生存率均为100％;其余CN-AML患儿2年无事件生存率及总生存率分别为(40.1±11.2)％及(51.8±10.9)％,低于NPM1或CEBPA突变患儿(P值分别为0.044,0.091).结论 伴NPM1及CEBPA双位点突变CN-AML患儿具有预后良好的趋势.
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急性髓系白血病MDR1和BAALC基因表达水平及其预后意义的探讨
目的:探讨联合检测初治急性髓系白血病(AML)组织多药耐药基因1(MDR1)及脑和急性白血病胞质( BAALC)的表达量以及在预后判断中的作用.方法:荧光定量PCR检测并分析160例初治AML组织MDR1和BAALC基因的表达量及其与临床疗效和预后的关系.结果:初治AML组织MDR1和BAALC基因表达水平呈正相关性,P＜0.001.MDR1高表达的AML患者同低表达组相比完全缓解(CR)率低,复发率高,总生存率低,P值均-＜0.05；而BAALC高低表达的差异均无统计学意义.MDR1和BAALC均低表达组疗效及预后好,均高表达组差.MDR1和BAALC均低表达组和MDR1低表达且BAALC高表达组的CR率均显著高于均高表达组,P值分别为0.004和0 034；前2组复发率(21.6％和25.9％)也显著低于后者(56.0％),P值分别为0.006和0.029；而均低表达组总生存率(62.2％)也显著高于均高表达组(28.3％)和MDR1高表达且BAALC低表达组(38.2％),P值分别为0.002和0.048.结论:MDR1高表达对初治AML患者的预后意义高于BAALC基因,只要检测到MDR1基因的高表达,无论BAALC高表达或者低表达,均提示较差的预后.联合检测初治AML患者MDR1和BAALC基因表达水平可进一步提高预测价值.
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地西他滨治疗急性髓系白血病M2b伴t(8;21)(q22;q22)一例并文献复习
1 病例报告患者女,54岁.因上腹部疼痛于2006-03-22收住我院消化科,行胃镜检查取病检示胃低中分化腺癌.2006-03-30行胃大部切除术后给予DF方案(紫杉醇+氟尿嘧啶)化疗2次,希罗达加顺铂化疗4个周期,1年后化疗结束.2008-02开始渐出现肩背部疼痛,骨扫描提示,全身多处骨质破坏,胸腰椎明显.进行胸腰椎部位放疗2个周期(3 Gy/次,15次,总剂量90 Gy)后,骨痛稍缓解.后于2008-05、2009-02和2009-09分别进行了3次89Sr治疗,2个月后发现血小板减少,PLT 45×109 L-1.2010-07出现明显乏力,血常规示WBC 13.58×109 L-1,Hb63 g/L,PLT 45×109 L-1.骨髓涂片示,原粒+早幼粒23.5％(图1);免疫分型:CD34(+),CD117(+),CD33(+),MPO(+),融合基因AML-ETO(+);染色体47,XX,t(8;21)(q22;q22),del(11)(q23),+21[8];诊断为急性髓系白血病(acutemyelocytic leukemia,AML) M2b.于2010-01-05开始予以地西他滨(西安杨森制药有限公司,批号:8IBS100,50mg)33mg×5 d[20mg/(m2·d)]化疗,28 d为1个周期,共化疗4个周期,化疗结束后复查骨髓涂片示完全缓解,2个月后复查骨髓涂片示复发,原粒占27.5％.
