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ZD6474衍生物筛选和抗肿瘤活性研究
目的 对自主研发的ZD6474衍生物进行抗肿瘤活性研究,从而为进一步的结构修饰、改造与药理学研究奠定良好的基础.方法 采用均相时间分辨荧光法以VEGFR-2、EGFR为检测靶点评价化合物的抑制活性；采用SRB法检测化合物对细胞的增殖抑制活性；移植人非小细胞肺癌H1299裸鼠模型作为体内抗肿瘤活性评价.结果 从大量化合物中筛选出4个有较好酪氨酸激酶抑制活性的化合物,分别编号为106、113、115、116.体外细胞实验结果显示化合物对肿瘤细胞生长增殖均有抑制作用,其中106对A431、H1975和A549细胞系均表现出良好的抑制活性.体内试验结果表明,106能够剂量依赖性抑制裸鼠肿瘤生长,且作用与ZD6474相当,25、75 mg/kg的106和ZD6474对H1299的相对肿瘤增殖率为57.3％、38.8％和52.5％、29.6％.结论 化合物106具有良好的体内外抗肿瘤作用,有进一步的研究价值.
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SOCS3和Pyk2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究
目的 探讨SOCS3和Pyk2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其相互作用.方法 分别采用免疫组织化学和免疫荧光染色方法检测SOCS3和Pyk2在100例NSCLC组织、人支气管上皮细胞HBE和6个NSCLC细胞系中的表达.采用甲基化特异性PCR方法检测A549细胞中SOCS3基因甲基化状态.A549细胞经蛋白酶体抑制剂β-lactacystin预处理,再加入去甲基化试剂5-aza-2 ’-脱氧胞苷(5-aza),或转染SOCS3突变质粒,检测Pyk2蛋白、Pyk2 Tyr402和ERK1/2磷酸化水平.采用逆转录(RT)-PCR检测Pyk2 mRNA水平.采用Transwell小室测定细胞迁移情况.结果 100例NSCLC组织中,43例(43.0％) SOCS3阳性表达,65例(65.0％) Pyk2高表达.在NSCLC组织和细胞系中均发现SOCS3和Pyk2表达负相关.5-aza能恢复A549细胞中SOCS3的表达.SOCS3依赖于其SH2和KIR功能区与Pyk2相互作用,从而降低Pyk2蛋白、Pyk2 Tyr402和ERK1/2磷酸化水平,抑制A549细胞迁移.结论 NSCLC中,SOCS3可能通过SOCS-box功能区介导的蛋白酶体途径促使Pyk2蛋白降解,阻断A549细胞迁移.
关键词： 癌 非小细胞肺 细胞因子信号转导蛋白抑制因子 蛋白酪氨酸激酶类 -
血管紧张素Ⅱ与其介导的蛋白质酪氨酸激酶JAK2信号通路在缺血再灌注肾损伤时小管上皮细胞逆向分化中的作用
目的 探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ与其介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2信号通路在急性缺血再灌注肾损伤模型中发生的肾小管上皮细胞逆向分化的作用机制.方法 (1)建立Wistar大鼠急性缺血再灌注肾损伤模型,采用放射免疫法检测肾脏局部AngⅡ的水平变化,采用免疫组织化学ABC法和RT-PCR,观察间充质细胞表面标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.(2)模拟高、中、低浓度的肾素-血管紧张素系统(RAS)环境,体外观察培养的肾小管上皮细胞(NRK-52E)逆向分化的情况.(3)先后阻断AngⅡ受体(AT2R)及其介导的Ang Ⅱ信号转导通路的JAK2,研究AngⅡ与JAK2通路对肾小管上皮细胞逆向分化的影响.结果 (1)肾脏缺血再灌注损伤后0、24、48、72、96、120 h,局部AngⅡ含量持续增高,分别为(406.7±106.1)、(463.0±112.9)、(526.6±128.3)、(649.5±131.5)、(875.4±150.2)、(980.8±155.2)ng/L,P<0.05.(2)缺血再灌注后48 h,肾小管上皮细胞开始表达α-SMA mRNA及蛋白质.(3)高浓度(10-7mol/L)Ang Ⅱ刺激可诱导体外培养的肾小管上皮细胞表达α-SMA,且呈剂量和时间依赖性.10-9,mol/L浓度AngⅡ刺激30 min时,α-SMA表达水平高.无论是阻断AT2R抑或JAK2信号通路,肾小管上皮细胞表达α-SMA均明显受到抑制.结论 急性缺血再灌注损伤时肾小管上皮细胞可向间充质细胞逆向分化,局部RAS启动与其密切相关.AngⅡ可能通过AT2R及其介导的JAK2信号通路促发肾小管细胞的逆向分化.
关键词： 再灌注损伤 肾小管 上皮细胞 肾素-血管紧张素系统 蛋白酪氨酸激酶类 -
下调Wnt通路活性对非小细胞肺癌细胞株吉非替尼疗效的影响
目的 探讨下调Wnt通路活性对吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞株增殖的影响及其潜在的作用机制.方法 不同浓度吉非替尼处理PC9细胞株(吉非替尼敏感株)与PC9/AB2细胞株(吉非替尼耐药株),细胞计数检测试剂盒(CCK8)检测两种细胞株的增殖情况.Western blot分别检测PC9与PC9/AB2细胞中Wnt信号通路相关蛋白的表达情况.双荧光素酶报告基因系统(TOP Flash)分别检测PC9和PC9/AB2细胞株Wnt通路的转录活性.采用β-catenin序列特异的siRNA抑制PC9/AB2中Wnt通路的转录活性后,用不同浓度吉非替尼处理,CCK8检测干预后细胞增殖情况.干扰后表皮生长因子受体及其下游通路的表达情况.结果 不同浓度吉非替尼作用下,PC9/AB2细胞对吉非替尼的耐药性明显增高(P＜0.05).PC9/AB2细胞Wnt通路相关蛋白的表达明显高于PC9,差异有统计学意义(t=24.590,P=0.000).TOP Flash结果显示,PC9/AB2细胞株中Wnt通路的转录活性高于PC9细胞株,差异有统计学意义(t=4.983,P=0.008).抑制Wnt通路后,与阴性对照组相比,干扰组细胞凋亡率增加,对药物敏感性增强(P＜0.05).下调Wnt通路活性后p-ERK1/2的表达水平较阴性对照组明显降低,其他蛋白表达无明显差异.结论 抑制Wnt通路活性可部分逆转非小细胞肺癌细胞对吉非替尼的耐药性.
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表观扩散系数在非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂治疗效果评价中的应用
目的 研究扩散加权成像(DWI)技术中表观扩散系数(ADC)值在非小细胞肺癌(NSCLC)应用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗效果评估中的价值.资料与方法 前瞻性收集2 014年5月-2015年12月经病理证实的19例拟接受TKI的晚期NSCLC患者,于靶向治疗前、治疗l周后以及治疗4周后进行3次CT及MRI扫描,比较不同时间点肿瘤长径、平均ADC值的变化;分析不同时间点肿瘤平均ADC值与肿瘤大径及大径变化率的相关性;比较有效组及无效组各个时间点ADC值组内及组间差异.用Bland-Altman分析法分析操作的可重复性.结果 治疗1周后ADC值较治疗前显著增加(t=-6.329,P＜0.05),而治疗1周后肿瘤大径与治疗前差异无统计学意义(P＞0.05).与治疗前相比,治疗4周后ADC值明显升高(t=-4.878,P＜0.05),肿瘤大径与治疗前差异有统计学意义(t=7.054,P＜0.05).靶向治疗前肿瘤ADC值与治疗4周后的大径变化率呈负相关(r2=-0.474,P＜0.05).有效组内靶向治疗前与治疗1周后ADC值差异有统计学意义(P＜0.05),治疗4周后有效组与无效组间ADC值差异有统计学意义(P＜0.05).Bland-Altman分析显示操作者间可重复性好.结论 靶向治疗1周后的ADC值能较肿瘤大径更敏感地反映肿瘤治疗后的改变,并且治疗前的ADC值在预测靶向治疗4周后的大径变化趋势方面有一定的价值,具有可重复性.
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非小细胞肺癌EML4-ALK融合方式的多样性
目的 探讨在非小细胞肺癌( NSCLC)标本中棘皮动物微管相关蛋白样4与间变淋巴瘤激酶融合基因(EML4-ALK)变异的复杂性,分析其酪氨酸激酶(TK)结构域是否存在突变.方法 在用cDNA末端快速扩增联合测序法检出1例NSCLC患者标本存在EML4-ALK的新变体V3c基础上,进一步采用逆转录(RT) -PCR分析39例NSCLC患者标本,针对阳性产物采用T载体克隆测序技术分析潜在的EM L4-ALK序列多样性.同时用RT-PCR和测序分析EML4-ALK酪氨酸激酶结构域序列信息.结果 从40例NSCLC患者肿瘤标本中检出3例NSCLC患者存在EML4-ALK变异.1例患者标本中EML4-ALK存在V3c( 64.6％)、V3d( 25.0％)、V3e(2.1％)、V3f(4.2％)、V3g(2.1％)和V3h(2.1％)6种融合变体,但不存在V3a、V3b 2种常见融合方式；1例为V1变体；1例为V2和V3a、V3b变体共存.3例阳性标本中未发现ALK基因的TK结构域有耐药基因突变.结论 NSCLC患者中可同时共存多种EML4-ALK变体,即EML4-ALK融合方式存在多样性与序列复杂性,临床分子检测中应全面关注EML4-ALK的多种融合变体,以提高检出率.
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用COLD-PCR方法提高BCR-ABL1激酶区耐药突变检测灵敏度
目的 探讨用低变性温度共扩增PCR(COLD-PCR)方法提高BCR-ABL1融合基因激酶区耐药突变检测灵敏度的可行性.方法 本研究为实验诊断研究.设计常规巢式PCR(CN-PCR)和COLD-PCR方案扩增BCR-ABL1激酶区全长,扩增产物纯化后用Sanger测序法检测激酶区突变(KDM).采集32例经伊马替尼(IM)治疗并出现耐药的慢性粒细胞性白血病(CML)患者和20例初诊CML患者外周血或骨髓标本,用上述2种方案检测标本中的KDM.用PCR扩增和基因克隆方法鉴定患者标本中KDM所占比例.制备含不同KDM比例的标准品,对比分析2种方法的检测灵敏度.结果 32例IM耐药患者中,共检出15种KDM.其中用CN-PCR方法检出23例(71.9％) KDM阳性,用COLD-PCR检出28例(87.5％) KDM阳性.在20例初诊CML患者中,用CN-PCR未检出KDM,用COLD-PCR方法检出1例有p.E459K突变,突变型基因比例为3.5％.对于16种不同类型的KDM,COLD-PCR方法可提高检测灵敏度4～12倍.结论 用COLD-PCR方法可有效提高BCR-ABL1激酶区耐药突变的检测灵敏度,有助于早期发现耐药突变.
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FAM167A-BLK和TNFSF4基因多态性与原发性干燥综合征的遗传相关性
目的 探讨中国汉族人群中与其他自身免疫性疾病相关的FAM167A-BLK和TNFSF4基因区域多态性是否与原发性干燥综合征(pSS)存在遗传相关性.方法 临床对照研究.选取2008年11月至2011年12月北京协和医院515例中国汉族pSS患者和567名健康体检者,对所有候选单核苷酸多态性(SNP)位点采用时间飞行质谱生物芯片系统(Sequenom MassArray)进行基因分型.采用x2检验、logistic回归分析对SNP位点的基因型、等位基因、上位效应和单体型进行相关性分析,并在3种遗传模型(加性、显性和隐性)下对各SNP位点进行相关性分析.结果 FAM167A-BLK基因区域的rs7812879和rs2254546位点在pSS组的基因型频率为:TT 6.2％,TC 28.5％,CC 65.2％；AA6.0％,AG 30.0％,GG 64.0％；在健康对照组的基因型频率为:TT 4.7％,TC 38.2％,CC 57.1％；AA5.1％,AG 39.3％,GG 55.6％,差异有统计学意义(x2=11.09、9.91,Pa ＜0.05).且在显性遗传模型下,rs7812879(OR =0.71,Pa =0.044)、rs2254546(OR=0.70,Pa=0.037)和rs2736340(OR =0.71,Pa=0.039)3个SNP位点基因型分布在pSS组和健康对照组之间差异均有统计学意义.rs7812879、rs2254546和rs2736340位点组成的CGT单体型在pSS组和健康对照组的频率分别为75.7％和70.8％,差异有统计学意义(x2=6.36,P=0.012).在各种分析中未发现FAM167A-BLK基因区域的rs2248932和TNFSF4(rs2205960和rs704840)基因多态性与pSS相关(P均＞0.05),且FAM167A-BLK和TNFSF4基因区域内未发现所选SNP位点存在上位效应(P均＞0.05).结论 在汉族人群中FAM167A-BLK基因区域的rs7812879、rs2254546和rs2736340位点与pSS的遗传易感性密切相关,而FAM167A-BLK基因区域的rs2248932以及TNFSF4基因区域的rs2205960和rs704840与pSS的易感性无明确相关性.
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我国210例伊马替尼耐药慢性髓细胞白血病和Ph阳性急性淋巴细胞白血病ABL1基因突变特征
目的 了解伊马替尼治疗后效果不佳的慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)及Ph阳性急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者BCR-ABL1激酶区突变(kinase domain mutation,KDM)的特征.方法 选取2007年9月至2010年12月北京市道培医院177例CML患者和33例Ph(+)ALL患者,均为我国患者.在患者治疗初期有效、后出现耐药时,或者治疗3个月以上疗效不佳时采集骨髓或外周血标本,共计243份.提取标本有核细胞中总RNA,反转录为cDNA.用巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增标本中BCR-ABL1融合基因的激酶区全长(第242～ 493位氨基酸的编码序列),使用AB3130XL型基因测序仪测定ABL1激酶区的基因序列,使用Variant Reporter V1.0软件分析基因突变结果.结果 共检测到32种ABL1基因不同种类的点突变,检出率为34.2％( 83/243).其中T315I占12％ (10/83),检出的突变率高；其余依次为Y253H占11％ (9/83),G250E占7％ (6/83),E255K占7％ (6/83),M351T占6％ (5/83),E459K占5％ (4/83)；Q252H、D276G、F317L、E355G、F359V、H396R均与4％ (3/83).并发现了3例插入突变,2例为357-358insk,1例为V304RfsX17.在7例患者中发现同时存在2种以上的点突变.多种耐药突变可同时存在于1个克隆中,同一个体不仅有常见的耐药突变,也会出现少见的点突变、缺失突变、插入突变甚至导致激酶活性缺失的突变.结论 伊马替尼药物压力下白血病细胞的ABL1基因突变会随机出现,产生不同的耐药克隆；不同的耐药克隆可以在同一个体内并存.耐药克隆不仅有基因突变,还存在插入缺失突变.
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慢性髓细胞白血病BCR/ABL1突变克隆演化和治疗策略
伊马替尼的应用使很多慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者获得了长期生存,但是CML的BCR-ABL1融合基因激酶区突变(kinase domain mutation,KDM)会造成耐药.KDM有多种类型,不同类型是随机出现的.带有不同KDM特征的白血病克隆有一定的演变规律.在伊马替尼用药期间,耐药程度较高的突变细胞容易发展为优势克隆.建议在治疗伊马替尼耐药的CML时,除了努力发展下一代酪氨酸激酶抑制剂以外,还可考虑用传统药物来辅助治疗.
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表皮生长因子受体对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠急慢性气道炎症的作用以及阻断EGFR的激活对气道炎症的影响.方法 将45只sD大鼠按随机数字表法分为对照组(A1、A2、A4组)、哮喘组(B1±、B2、B4组)和治疗组(C1、C2、C4组),每组5只,其中1、2和4分别表示激发1、2和4周.治疗组在每次卵清白蛋白激发前1 h给予酪氨酸激酶抑制剂(TKI)金雀异黄素(genistein)20 mg/kg腹腔注射.末次激发后收集BALF行细胞总数及分类计数.肺组织HE染色并行气道黏膜下炎症评分.免疫组织化学及免疫荧光染色观察气道上皮EGFR表达及其酪氨酸磷酸化(活化的ECFR)程度.两组数据间的比较采用单因索方差分析,多组间比较采用g检验.结果 (1)B组各时段BALF中细胞总数及各类细胞绝对计数均高于A组相应时段组(均P<0.05),嗜酸粒细胞在2周末达高峰;C组各时段BALF中细胞总数[分别为(48±6)、(51±9)和(57±12)×105]及嗜酸粒细胞计数[分别为(2.5±0.5)、(2.7±0.6)和(2.6±0.5)×105]均低于相应B时段组[细胞总数分别为(70±10)、(88±8)和(72±10)×105>,嗜酸粒细胞数分别为(5.6±0.8)×105、(6.6±0.6)×105和(4.3±0.4)×105],差异有统计学意义(均P<0.05);C组各时段BALF中中性粒细胞及淋巴细胞计数与相应时段B组比较差异无统计学意义;C1组BALF中上皮细胞数[(2.5±0.5)×105]低于B1组[(4.9±0.7)×103](q=4.671,P<0.05),C4组BALF中上皮细胞数[(5.7±1.2)×105]高于B4组[(4.3±0.4)×105](q=4.012,P<0.05).(2)C4组气道黏膜下炎症评分(3.6±0.6)低于B4组(5.1±0.6)(q=4.923,P<0.05).(3)B组各时段各级气道EGFR蛋白表达均高于相应时段A组(均P<0.01);气道上皮EGFR活化程度A组分别为(1.84±0.26)、(1.43±0.29)和(1.67±0.32),B组分别为(3.69±0.43)、(3.57±0.29)和(4.46±0.47),C组分别为(3.12±0.24)、(3.00±0.28)和(2.69±0.54),B组各时段气道上皮EGFR活化程度均高于相应时段A组(均P<0.05);C组各时段气道上皮EGFR活化程度均弱于相应时段B组(均P<0.05).(4)相关分析显示气道上皮EGFR表达及其活化程度均与BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞绝对计数,以及气道炎症评分呈明显正相关.结论 哮喘大鼠气道上皮EGFR参与气道炎症,TKI金雀异黄素有一定抑制哮喘大鼠急慢性气道炎症的作用.
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Dyrk1b蛋白在不同程度子宫颈病变组织及子宫颈癌细胞中的表达及意义
目的：探讨双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b（Dyrk1b）蛋白在不同程度子宫颈病变组织及子宫颈癌细胞中的表达及意义。方法（1）组织标本检测：选取2011年1月至2013年12月间就诊于大连医科大学附属第一医院，经病理检查证实的子宫颈鳞癌75例（其中Ⅰ期60例，Ⅱ期15例）、低级别鳞状上皮内病变（LSIL）12例、高级别鳞状上皮内病变（HSIL）40例患者的石蜡组织标本；另取同期经病理检查确诊的28例慢性子宫颈炎患者的子宫颈组织为对照。采用免疫组化SP法检测不同程度子宫颈病变组织中Dyrk1b蛋白的表达情况，并分析子宫颈癌组织中Dyrk1b蛋白的表达与其不同临床病理指标的关系。（2）细胞实验：采用子宫颈癌细胞系HeLa和SiHa细胞，实验分为两组，实验组细胞中加入Dyrk1b抑制剂——AZ191，对照组细胞中不加AZ191。采用蛋白印迹法检测不同浓度（5、10μmol/L）的AZ191作用后两组细胞中Dyrk1b蛋白的表达；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（2.5、5、10、25、50、100μmol/L）的AZ191作用后两组细胞的增殖情况；流式细胞仪检测不同浓度（5、10μmol/L）的AZ191作用后两组细胞的凋亡情况。结果（1）免疫组化SP法检测显示，慢性子宫颈炎、LSIL、HSIL和子宫颈鳞癌组织中Dyrk1b蛋白阳性表达率分别为11%（3/28）、1/12、42%（17/40）、71%（53/75），子宫颈鳞癌明显高于慢性子宫颈炎、LSIL、HSIL（P<0.01）；HSIL明显高于慢性子宫颈炎、LSIL（P<0.05）；而LSIL与慢性子宫颈炎比较，差异无统计学意义（P>0.05）。子宫颈鳞癌组织中Dyrk1b蛋白的表达与子宫颈肌层浸润深度显著相关（P<0.01），而与年龄、临床分期、淋巴结有无转移以及血清鳞状上皮细胞癌抗原（SCC-Ag）水平均无显著相关性（P>0.05）。（2）蛋白印迹法检测显示，不同浓度（5、10μmol/L）的AZ191作用后，实验组HeLa和SiHa细胞中Dyrk1b蛋白的表达强度均随着AZ191浓度的增加而减弱，且均明显弱于对照组。MTT比色法检测显示，不同浓度（2.5、5、10、25、50、100μmol/L）的AZ191作用后，实验组HeLa和SiHa细胞增殖的抑制率随着AZ191浓度的增加均逐渐增高，呈明显的浓度依赖性（P<0.01）；且均明显高于对照组（P<0.05）。但实验组中同一浓度A2191作用后HeLa细胞与SiHa细胞增殖的抑制率分别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。流式细胞仪检测显示，5μmol/L的AZ191作用后，实验组HeLa和SiHa细胞的凋亡率[分别为（12.8±0.7）%、（3.8±1.8）%]分别与对照组[分别为（9.1±0.9）%、（2.2±1.1）%]比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；而10μmol/L的AZ191作用后，实验组HeLa和SiHa细胞的凋亡率[分别为（15.5±1.1）%、（8.4±3.3）%]均明显高于对照组（P<0.05）。但实验组中同一浓度AZ191作用后HeLa细胞与SiHa细胞的凋亡率分别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论随着子宫颈病变程度的进展，Dyrk1b蛋白的表达逐渐增高，子宫颈癌组织和细胞中Dyrk1b蛋白均呈高表达；Dyrk1b抑制剂AZ191下调Dyrk1b蛋白表达后，可抑制子宫颈癌细胞的增殖，诱导细胞发生凋亡。
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脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用
目的 观察在血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺血管平滑肌细胞(VSMC)中,脾酪氨酸激酶(syk)的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组(不作任何处理)、对照组(PDGF-BB培养)和药物干预组(PDGF-BB和piceatannol培养).[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)及平滑肌22α蛋白(SM22α)表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高(2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P<0.01);细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA(1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P<0.05)和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin(0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P<0.01)和SM22α(0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P<0.01)的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低(263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P<0.01).piceatannol可明显抑制这些生物学效应(药物干预组).结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.
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抗血管生成酪氨酸激酶抑制剂在晚期乳腺癌中的应用
晚期乳腺癌不可治愈,而抗血管生成治疗可以抑制肿瘤生长.小分子酪氨酸激酶抑制剂可以在多个靶点抗血管生成,在多种恶性肿瘤中体现出有效的抗肿瘤作用.笔者针对抗血管生成酪氨酸激酶抑制剂在晚期乳腺癌中单药及联合化疗的应用疗效进行概述.
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大肠癌hTERT、SYK分子边界的临床研究
目的 探讨大肠癌及其切缘组织中hTERT、SYK活性表达、存在的分子边界及其与手术切缘的安全性关系.方法 采用SABC、Supervion二步免疫组织化学法分别检测20例大肠癌标本及其远近端癌旁各1、2、3、4、5 cm组织中hTERT、SYK活性的表达.结果 hTERT在大肠癌的阳性表达率为80.00%,癌旁3、4、5 cm组织中其阳性表达率为0;hTERT的阳性表达从癌中心向癌旁1、2、3 cm组织逐渐递减(P<0.01).SYK在大肠癌的阳性表达率为10.00%,SYK的阳性表达从癌中心向癌旁1、2、3 cm组织逐渐递增(P<0.05).结论 在大肠癌周边组织中存在着分子边界,根据hTERT和SYK的表达情况,3 cm可以定义为大肠癌根治手术安全切除的分子边界.
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伴肌萎缩重症肌无力4例分析并文献复习
目的 探讨伴肌萎缩重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者的临床特征、抗体及电生理特点,提高对此少见疾病的认识.方法 回顾性分析作者医院2003—2016年收治的伴肌萎缩M G患者4例的临床资料,分析其临床特征、抗体、神经电生理检查、治疗及预后特点.结果 4例患者病程中出现不同程度的肌肉萎缩,1例为手肌(左侧大鱼际肌、小鱼际肌及第一骨间肌)萎缩,3例为舌肌萎缩(其中1例同时伴面肌萎缩);抗体检查显示乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)阳性3例,1例为抗骨骼肌特异性受体酪氨酸激酶抗体(MuSK-Ab)阳性.4例患者低频重复神经刺激波幅均可递减,高频刺激波幅未见明显递增.伴手肌萎缩MG患者针极肌电图检查结果提示神经源性损害.结论 伴肌肉萎缩MG较罕见,MuSK-Ab、AChR-Ab阳性MG患者均可出现肌肉萎缩,其机制有待进一步明确;早期行神经电生理检查、AChR-Ab及 MuSK-Ab测定有助于明确诊断.
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神经生长因子对脑缺血再灌注后大鼠内耳毛细胞凋亡的抑制作用研究
目的：观察脑缺血再灌注大鼠内耳细胞损伤与内源性耳蜗干细胞的激活状态以及神经生长因子（N GF ）对内耳毛细胞凋亡的抑制作用及其发生机制。方法采用四动脉闭塞法制作大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，将72只SD大鼠随机分为3组：A组：假手术组，B组：生理盐水组和C组：NGF组，每组再分24 h和72 h 2个时间段。在C组，我们用人NGF对脑缺血再灌注大鼠进行干预，用免疫荧光染色法检测耳蜗细胞巢蛋白（nestin）、酪氨酸激酶A（trkA）和NGF的表达，用原位末端标记法（TUNEL法）检测耳蜗毛细胞凋亡。用均数±标准差（x珋±s）表示计量资料，用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。结果（1）与假手术组相比，生理盐水组内耳nestin阳性细胞数在再灌注24 h后增加，再灌注72 h后，耳蜗细胞nestin表达明显增强（t＝6.030、12.516，均P＜0.05），但trkA和NGF表达减低（t＝-6.667、-2.415，均P＜0.05），再灌注72 h后的耳蜗毛细胞凋亡率升高（t＝40.836，P＜0.05）。（2）与生理盐水组相比，NGF组在再灌注24 h和72 h后，耳蜗细胞nestin表达明显减低（t＝-4.732、-11.272，均P＜0.05），再灌注72 h后的trkA和NGF表达均显著增强（t＝15.663、17.932，均P＜0.05），再灌注72 h后毛细胞凋亡率明显下降（t＝-35.284，P＜0.05）。（3）与假手术组相比，NGF组在再灌注24 h和72 h后，nestin表达水平与假手术组接近（P＞0.05），但在再灌注72 h后的trkA和NGF表达均显著增强（t＝8.996、15.517，均P＜0.05）。结论脑缺血再灌注可引起大鼠耳蜗毛细胞凋亡，促进成熟大鼠内耳细胞nestin阳性表达，诱导内源性耳蜗干细胞的激活；给予NGF可下调nestin表达，明显抑制耳蜗毛细胞的凋亡，其机制可能与上调trkA和NGF的表达有关。
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以c-met为靶点的酪氨酸激酶抑制剂的研究进展
c-met作为受体酪氨酸激酶,与肿瘤的发生、发展及转移密切相关,c-met激酶是治疗肿瘤的重要靶点.本文主要综述了c-met激酶的作用机制及近年来报道的一系列不同类型的c-met激酶抑制剂,并详细阐述了小分子c-met激酶抑制剂的构效关系.
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Syk、VEGF-C在非小细胞肺癌中表达及意义
目的 观察Syk和VEGF-C在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达,探讨二者在NSCLC发生发展中的意义.方法 分别构建含人VEGF-C和Syk基因的真核表达载体,转染至A549细胞中,用RT-PCR的方法检测两组中VEGF-C mRNA和Syk mRNA的表达;建立体外侵袭模型,计算侵袭细胞数目;免疫组化法检测VEGF-C在A549细胞的表达;VEGF-C和Syk在81例NSCLC组织标本中的表达.结果 RT-PCR扩增产物电泳证实,VEGF-C mRNA在转染组及空载组均有表达,免疫组化结果显示VEGF-C阳性表达主要定位于细胞胞质,细胞侵袭试验示转染组侵袭细胞数为50.3± 7.6、空载组为20.1±1.5,差异有统计学意义(P＜0.05);而Syk基因在mRNA水平转染组有转录,空载组没有转录,细胞侵袭试验示转染组侵袭细胞数为2.3±2.7、空载组为5.0±1.7,差异有统计学意义(P＜0.05);Syk在非小细胞肺癌肺癌组织中的表达显著低于正常肺组织(P＜0.05),VEGF-C在NSCLC组织中的表达显著高于正常肺组织(P＜0.05),Syk与VEGF-C的表达呈现负相关(r=-1.000,P=0.019).结论 NSCLC中Syk与VEGF-C的表达呈负相关,转染VEGF-C的细胞侵袭力明显高于转染Syk的肿瘤细胞,Syk与VEGF-CNSCLC发生与转移中有重要意义.
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核心结合因子相关性急性髓系白血病中酪氨酸激酶突变分析及其临床意义
目的 研究酪氨酸激酶(TK)相关基因c-Kit、FLT3、JAK2 V617F突变在核心结合因子相关性急性髓系白血病(CBF-AML)中的发生情况及其对患者临床特征及预后的影响.方法 采用基因组DNA-PCR法结合碱基测序,检测58例CBF-AML患者[其中30例为伴t(8;21)异常,28例为伴inv(16)异常]初诊时c-Kit、FLT3基因内部串联重复(ITD)突变和FLT3第二酪氨酸激酶结构域(TKD)的点突变发生情况；JAK2 V617F突变应用等位基因特异性PCR方法检测.随访观察各种突变对患者临床特征及预后的影响.结果 58例CBF-AML患者中19例出现c-Kit错义突变,其中包括6例8号外显子突变(mutKIT8)和13例17号外显子突变(mutKIT17).mutKIT8在伴inv(16)患者中更多见.2例患者FLT3-ITD突变阳性(FLT3-ITD+),7例(12.1％)患者FLT3-TKD突变阳性(FLT3-TKD+).58例初治CBF-AML患者均未检出JAK2 V617F.受体酪氨酸激酶(RTK)突变的累计发生率达46.6％(58例中27例),仅有1例患者同时发生2种错义突变(FLT3-TKD+和mutKIT8).和c-Kit基因野生型患者相比,mutKIT17患者中位发病年龄明显升高(分别为31岁和55岁,P=0.003).c-Kit突变导致患者总生存(OS)率及持续完全缓解(CCR)率降低(P=0.053和P=0.048)；其中存在mutKIT17的患者OS率及CCR率降低更为明显(P=0.005和P=0.013).FLT3-TKD突变对CBF-AML患者的预后无明显影响.结论 在CBF-AML中RTK突变常见,但同属一类的两种基因突变极少存在于同一患者.在CBF-AML中c-Kit基因突变发生频繁；JAK2 V617F突变罕见.c-Kit突变患者,尤其是mutKIT17患者发病年龄明显增高、易复发、预后差.
