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支气管灌洗液抑癌基因过甲基化对肺癌诊断价值的研究
目的 探讨支气管灌洗液抑癌基因过甲基化对肺癌诊断的应用价值.方法 选取北京市结核病胸部肿瘤研究所收治怀疑肺癌患者78例,包括肺癌51例和良性病变患者27例,从支气管灌洗液上清和细胞提取DNA,对上清游离DNA进行定量分析,并采用NMSP完成对支气管灌洗液上清和细胞的过甲基化分析,所选择的靶基因包括p16,MGMT以及RASSF1A基因.将NMSP结果与临床诊断比较,计算敏感性和特异性.结果 中心型肺癌、周围型肺癌和肺部良性病变支气管灌洗液上清游离DNA含量没有显著差异.支气管灌洗液细胞抑癌基因过甲基化诊断中心型肺癌的敏感性和特异性分别为85.2%和81.5%,诊断周围型肺癌的敏感性和特异性分别为54.2%和81.5%.支气管灌洗液上清和细胞抑癌基因过甲基化诊断中心型肺癌的敏感性和特异性为88.9%和70.4%,诊断周围型肺癌的敏感性和特异性为75.0%和70.4%.结论 支气管灌洗液抑癌基因的过甲基化可为肺癌诊断提供帮助.
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p73在大肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨p73表达与大肠癌生物学行为、预后的关系.方法 研究对象为60例术前未经放疗、化疗的大肠癌患者的癌组织标本及其中23例患者的癌旁组织标本.60例患者中高分化腺癌21例,中分化22例,低分化17例;侵及浆膜者36例;有淋巴结转移者21例.应用原位杂交技术检测p73 mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测p73蛋白的表达,利用Smartscape图像分析系统进行定量分析,结果以平均灰度值表示,平均灰度值低示表达量高.结果 p73 mRNA及p73蛋白平均灰度值在大肠癌组织分别为0.549±0.080及0.481±0.091,在癌旁组织中分别为0.703±0.081和0.701±0.068,二者在癌组织中的表达量均高于癌旁组织(P＜0.05).将患者按肿瘤分化程度、是否侵及浆膜及有无淋巴结转移分组,p73 mRNA及p73蛋白平均灰度值在低中分化组分别为0.463±0.082和0.472±0.099,高分化组分别为0.549±0.088及0.535±0.0584;在侵及浆膜组分别为0.517±0.106和0.528±0.100,未侵及浆膜组分别为0.602±0.079和0.560±0.058;在淋巴结转移组分别为0.513±0.083及0.462±0.105,无淋巴结转移组分别为0.607±0.083及0.595±0.080.各组间p73 mRNA及p73蛋白平均灰度值的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 p73在大肠癌组织中的表达增强,并与肿瘤的生物学行为相关,可作为判断大肠癌进展和预后的指标.
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miR-23a与转移抑制因子1在结肠癌中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-23a( Homo sapiens miR-23a)与转移抑制因子1(metastasis suppressor 1,MTSS1)在结肠癌中的表达情况及其临床意义.方法 运用荧光素报告载体系统检测miR-23a直接调控的靶基因并采用Transwell侵袭实验检测miR-23a对人结肠癌SW620细胞的侵袭能力.收集结肠癌患者手术标本92例,癌旁组织作为正常对照,分别运用原位杂交、免疫组织化学EliVision法检测结肠癌组织及癌旁组织中miR-23a、MTSS1的表达水平,并对二者进行相关性分析.结果 MTSS1是miR-23a直接调控的靶基因,miR-23a下调MTSS1蛋白的表达,增强结肠癌细胞侵袭能力.在92例结肠癌组织中miR-23a阳性表达率为87.0％( 80/92),MTSS1蛋白阳性表达率为17.4％(16/92),分别与癌旁对照组比,差异有统计学意义(P ＜0.01)；miR-23a的表达随着结肠癌临床分期演进(P =0.029)和浸润深度增加而增加(P=0.000),且有淋巴结转移的miR-23a的表达显著高于无淋巴结转移组(P=0.041)；MTSS1的表达随着结肠癌临床分期演进(P=0.027)和浸润深度增加而下调(P=0.017),且有淋巴结转移的MTSS1的表达显著低于无淋巴结转移组(P=0.009)；相关性分析表明,miR-23a表达与MTSS1的表达呈显著负相关(r=-0.594,P=0.013).结论 miR-23a通过靶向抑制MTSS1促进结肠癌SW620细胞生长、侵袭转移；miR-23a的高表达和MTSS1蛋白低表达可能是肠黏膜恶性转变以及结肠癌发生浸润转移的重要生物学标志,检测二者对预测结肠癌浸润转移有重要意义.
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白细胞介素33及其受体肿瘤抑制素2的生物学作用及其在疾病中的研究进展
白细胞介素33及其受体肿瘤抑制素2近年来受到越来越多的关注,在自身免疫性疾病、感染性疾病、超敏反应性疾病等方面均发挥着相应作用,其不同程度的激活对疾病产生不同调节作用,影响着疾病的发展及转归.本文对其生物学作用及近年来在多种疾病中的研究进展作相关综述.
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WWOX和p73基因在急性淋巴细胞白血病中表达的研究
目的 研究含有氧化还原酶的WW域(WW domain containing oxidoreductase,WWOX)和p73基因在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)中异常表达的临床意义及其机制.方法 采用病例对照研究,收集2010-2011年广西医科大学第一附属医院收治的ALL患者骨髓样本48份,其中包括初诊患者32例、缓解患者11例、复发患者5例；收集同期非白血病患者骨髓样本31份作为对照组.抽取骨髓3 ml,EDTA抗凝,1 ml骨髓样本采用离心柱法立即提取RNA,取纯度在1.8～2.0范围内的产物逆转录后进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况；2 ml骨髓样本采用离心柱法提取DNA,取纯度在1.7 ～1.9范围内的产物进行甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR),检测WWOX基因启动子区和p73基因第1外显子的甲基化情况.不同组别间甲基化状态的比较采用x2检验或Fisher确切概率法.结果 31份对照组标本中,WWOX与p73基因mRNA阳性表达率均为94.00％(29/31).48份ALL标本中,WWOX mRNA阳性表达率为48.00％(23/48),低于对照组,差异有统计学意义(x2=17.434,P =0.000)；其中初诊组为34.38％(11/32),低于缓解组的90.91％(10/11),差异有统计学意义(x2=10.471,P=0.001).p73基因mRNA阳性表达率为56.00％( 27/48),低于对照组,差异有统计学意义(x2=12.697,P=0.000)；其中初诊组为43.75％( 14/32),低于缓解组的90.91％(10/11),差异有统计学意义(P=0.012).31份对照组标本中,WWOX与p73基因均未见甲基化现象(0/31).48份ALL标本中,WWOX基因甲基化率为44.00％( 21/48),明显高于对照组,差异有统计学意义(x2=18.473,P=0.000)；其中初诊组为56.25％ (18/32),高于缓解组的9.09％ (1/11),差异有统计学意义(P=0.012);p73基因甲基化率为35.00％(17/48),明显高于对照组,差异有统计学意义(x2=13.990,P=0.000),其中初诊组为46.88％( 15/32),高于缓解组的9.09％ (1/11),差异有统计学意义(P=0.033).WWOX与p73基因mRNA阳性表达率均与各自基因甲基化状态呈负相关(r=-0.678、-0.577,P=0.000).结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致基因的沉默,使其mRNA减少或缺失；WWOX与p73基因甲基化的检测可能对ALL的诊断和疗效评估有一定意义.
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早幼粒细胞白血病蛋白在髓系白血病细胞中的表达及对细胞增殖的影响
目的 探讨早幼粒细胞白血病(promyelocyte leukemia,PML)蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异.构建PML的真核表达载体,转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株,以稳定表达空载体的细胞为对照.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响,并进一步用反转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)检测增殖相关因子c-myc和p27kip1(p27) mRNA水平以及蛋白表达水平的改变.后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异.结果 CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平(△Ct=9.02±0.74)明显低于健康对照组(△Ct =7.91 ±0.34),差异有统计学意义(t =5.07,P＜0.001).PML过表达能明显抑制K562细胞增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞.PML稳定表达的K562细胞中,c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低,p27的mRNA和蛋白表达水平升高.CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平(△Ct =7.13 ±0.43)显著高于健康对照组(△Ct =9.35 ±0.82),差异有统计学意义(t=6.78,P＜0.001),而p27的mRNA表达水平(△Ct =4.56±0.58)则显著低于健康对照组(△Ct=3.29±0.92),差异有统计学意义(t=2.93,P＜0.01).结论 PML在CML患者中低表达,PML可能通过调节c-myc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖.
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前列腺癌组织中DLC-1启动子甲基化定量检测的HRM方法建立及其应用意义
目的 建立HRM技术定量检测DLC-1启动子甲基化的方法 ,并分析探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌病理参数的相关性.方法 选取89份前列腺癌组织以及10份匹配癌旁组织标本,采用LCM收集肿瘤细胞群,抽提DNA后进行甲基化修饰.以CpGenome Universal Methylated DNA作为100%甲基化样本,以100%非甲基化的健康人外周血DNA作为稀释剂,分别制成100%、80%、50%、30%、10%、0%系列浓度的标准曲线,并进行重复性和灵敏性评价.同时用HRM技术定量检测前列腺癌细胞中DLC-1甲基化水平,探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌患者年龄、PSA水平与前列腺癌TNM的关系.结果 100%、80%、50%、30%、10%、0%甲基化标准品的HRM熔解曲线从右往左依次排列,10份癌旁组织标本、35份前列腺癌组织标本重叠在0%标准曲线上;5份前列腺癌组织标本位于0%～30%区域内,29份位于31%～80%区域内,20份位于81%～100%区域内.HRM技术低检测限可达10%的甲基化水平,优于MSP检测(30%甲基化水平).DLC-1甲基化水平与前列腺癌患者年龄无明显相关(X~2=3.29,P=0.19),与PSA水平也无相关性(X~2=2.04,P=0.36),但DLC-1甲基化水平与TNM分期显著相关(X~2=9.04,P=0.01),且随TNM分期增高而增高.结论 成功建立的HRM技术定量检测DLC-1甲基化水平的方法 稳定、灵敏、操作简单,DLC-1启动子甲基化有望成为评估前列腺癌TNM的分子指标.
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△Np73基因沉默对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)调节导致的△Np73抑制对结肠癌细胞SW620 5-氟尿嘧啶(5-FU)药物敏感性的影响,为结肠癌治疗提供新途径.方法 将△Np73 siRNA转染人SW620结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞△Np73表达的影响.并与5-FU联合使用,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞凋亡.分别将转染△Np73 siRNA和阴性对照siRNA的SW620细胞注射裸鼠成瘤,瘤中注射5-FU观察体内肿瘤的生长情况.结果 △Np73 siRNA可显著抑制SW620结肠癌细胞△Np73的表达,但本身均不能抑制SW620结肠癌细胞的生长.同时应用△Np73 siRNA和5-FU共同处理的SW620细胞的凋亡率达到42.9%,显著高于单纯5-FU处理组(18.9%)和单纯△Np73处理组(8.8%).在转染△Np73 siRNA的成瘤小鼠的瘤中注射5-FU,能明显抑制癌细胞体外生长(t=15.32,P<0.05).结论 △Np73 siRNA可通过抑制△Np73的表达,从而增强对化疗药物的敏感性.
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儿童急性淋巴细胞白血病患者肝癌缺失基因1启动子的异常甲基化
目的 分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子的甲基化水平,探讨DLC-1启动子甲基化用于判断儿童ALL预后的临床价值.方法 选择34例ALL患者骨髓,5例正常骨髓和T淋巴细胞白血病细胞系6T-CEM,分别采用MSP和焦磷酸测序法检测DLC-1启动子甲基化,并采用荧光定量PCR检测5-aza-2'-deoxycytidine处理6T-CEM细胞前后DLC-1的表达.结果 经MSP检测,21例ALL患者骨髓中存在DLC-1甲基化,而在正常骨髓中未发现该基因甲基化.采用焦磷酸测序法检测的结果与MSP法完全一致,而焦磷酸测序法能对DLC-1启动子上的CG位点甲基化进行定量,DLC-1基因的甲基化与年龄、性别、WBC计数、FAB分类、免疫学分型、临床分型等临床病理学参数无显著相关性(P＞0.05).DLC-1基因甲基化阳性的18例获得完全缓解的ALL患者中有14例在12个月内复发,而甲基化阴性的12例获得完全缓解的ALL患者仅4例复发.采用5-aza-2'-deoxycytidine在体外处理DLC-1甲基化细胞6T-CET后,可使DLC-1恢复表达,且呈剂量依赖性.结论 从儿童ALL患者中检测到DLC-1启动子存在高频率的异常甲基化,DLC-1甲基化对预测儿童ALL复发具有一定意义.同时证明焦磷酸测序法是一种敏感、简单,并能对DLC-1启动子甲基化进行定量检测的新方法.
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微小核糖核酸-31对大肿瘤抑制因子2及心肌细胞肥大的调控作用
目的:通过下调肥大心肌细胞中微小核糖核酸(miR)-31的表达,观察miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)及心肌细胞肥大的调控作用.方法:体外分离大鼠心肌细胞并连续培养10天,按干预条件不同将心肌细胞分为4组:空白对照组、单纯血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预组、miR-31抑制物慢病毒感染组、阴性病毒感染组.培养第8天实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组心肌细胞miR-31、LATS2及肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达.培养第10天心肌细胞荧光探针染色观察心肌细胞形态变化.蛋白免疫印迹(Western blot)检测LATS2蛋白表达变化.双荧光素酶报告基因质粒转染293T细胞并检测荧光素酶活性,鉴定miR-3l对LATS2的靶向作用.结果:与空白对照组相比,单纯AngⅡ干预组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达水平均显著上升(P<0.05),心肌细胞相对表面积明显增大(P<0.05),而LATS2基因及蛋白表达明显下调(P<0.05);与单纯AngⅡ干预组比较,miR-31抑制物慢病毒感染组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达明显下调(P<0.05),心肌细胞相对表面积减小(P<0.05),而LATS2在基因水平略有上升,蛋白水平则显著上调(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测显示TRAF6-3'UTR+miR-146b相对荧光素酶活性较TRAF6-3'UTR+miR-NC显著性下降(P<0.01),LATS2-3'UTR+miR-31相对荧光素酶活性较LATS2-3'UTR-NC+miR-31显著性降低(P<0.01),差异均有统计学意义.结论:下调肥大心肌细胞miR-31表达水平可一定程度逆转心肌细胞肥大,miR-31靶向作用LATS2参与调控心肌细胞的肥大.
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肿瘤抑制蛋白CYLD在急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用
目的 研究肿瘤抑制蛋白CYLD在急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的表达状况及其对核转录因子-κB(NF-κB)的影响,探讨其在肺损伤中的作用.方法 72只成年SD大鼠随机分成假手术组、ANP组及氯化钆(GdC13)治疗组,每组24只.采用逆行胰胆管注射5％牛磺酸钠的方法建立ANP大鼠模型.各组术后1、3、6、12 h分批处死动物.经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平,同时行肺组织病理学检查.蛋白免疫印迹法测定各组AM中CYLD及NF-κB活性水平.结果 ANP大鼠肺损伤随着病情进展而逐渐加重.AM分泌TNF-α、IL-1β水平逐渐升高,至6h达到高峰,分别为(491.3±20.3)ng/L和(178.83±11.32) ng/L,12 h又回落.ANP组TNF-α及IL-1β含量较假手术组明显升高(P＜0.05),而GdCl3治疗组较ANP组明显降低(P＜0.05).NF-κB蛋白在假手术组表达呈低水平,而CYLD蛋白表达呈高水平.ANP组NF-κB蛋白表达从3h开始与假手术组相比已有上升,差异有统计学意义(P＜0.05),并随时间进行,表达逐渐增高.ANP组CYLD蛋白表达则相反,与假手术组相比从3h开始已有下降(P＜0.05),随时间进行,表达逐渐减少.GdCl3治疗组CYLD及NF-κB蛋白表达变化趋势与ANP组趋势相近,CYLD蛋白表达与ANP组相比,从6h起表达量开始增加(P＜0.05)；NF-κB蛋白表达则从1h起表达量明显下调,与ANP组相比差异有统计学意义(P＜0.05).ANP组、GdCl3治疗组AM中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r分别为-0.918,-0.723,P＜0.01).结论 CYLD在ANP肺损伤中呈低度表达,且具有明显时相,从3h起表达逐渐减低；而NF-κB则相反,随时间进展,表达逐渐增高.经GdCl3处理后,CYLD表达增强,NF-κB表达降低,表明在ANP时CYLD的表达对NF-κB表达也有负性调控作用,进而使肺损伤减轻.
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FN及PTEN在肝细胞肝癌中的表达和临床相关性研究
目的 探讨抑癌基因纤黏连蛋白(FN)、张力蛋白同源基因蛋白(PTEN)在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义.方法 收集215例HCC、癌旁组织和19例正常肝组织,用qRT-PCR、免疫组织化学SP法检测FN、PTEN mRNA和蛋白表达,采用SPSS 13.0统计软件进行数据统计处理,FN及PTEN蛋白计量资料以x±s表示,采用t检验;阳性率及与HCC临床病理特征采用x2检验.以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 肝癌组织中FN mRNA和蛋白表达均明显高于癌旁组织及正常肝组织;而PTEN低于癌旁组织及正常肝组织(F=142.334,P＜0.05),且在癌旁组织中的表达亦明显低于正常肝组织(F=80.861,P＜0.05).免疫组织化学检测,FN蛋白表达阳性率:HCC中为85.11％明显高于癌旁组织及正常肝组织(66.05％和10.53％),三者比较差异有统计学意义(x2 =58.671,P=0.000);PTEN蛋白表达阳性率:正常肝组织中(100％)明显高于HCC及癌旁组织(18.14％和46.97％),三者比较亦有统计学意义(x=75.271,P=0.000).FN和PTEN与患者生存密切相关,术后12个月及24个月,FN表达阳性患者生存率明显低于阴性患者(89.77％与100％,83.52％与97.44％);而PTEN表达阳性患者的生存率高于阴性患者(98.39％与90.20％,96.77％与86.93％),两者之间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 FN及PTEN在肝癌组织中存在异常表达,FN表达提示患者预后不良,PTEN表达提示患者预后较好.
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肿瘤转移抑制蛋白1在结直肠癌组织中的表达及意义研究进展
肿瘤转移抑制蛋白1(MTSS1)是近年来被发现的与肿瘤转移抑制相关的候选基因之一,在胃肠道肿瘤的发生发展及临床诊治中起着重要的作用.本文主要从MTSS1蛋白的概况、表达与调控机制、在不同肿瘤中的研究进展等方面进行了概述,并着重对MTSS1蛋白在结直肠癌中的研究进展进行了分析,发现了由于MTSS1蛋白一抗厂家的不同,研究者得出了两种截然不同的结论.MTSS1蛋白在结直肠癌中的具体调控机制,有待于进一步研究.
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BARD1剪切变异体的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值
目的 评价1个新的卵巢恶性肿瘤抗原--乳腺癌易感基因1(BRCA1)相关的具有环状结构域的蛋白(BARD1)剪切变异体(OV-142)的自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的价值.方法 RT-PCR技术克隆OV-142基因的开放阅读框,构建OV-142的原核表达质粒,表达、纯化OV-142重组融合蛋白;用间接酶联免疫吸附试验检测126例卵巢恶性肿瘤患者、15例卵巢交界性肿瘤患者、42例卵巢良性肿瘤患者血清中OV-142的IgG、IgM型自身抗体的相对含量,并分析自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中的临床价值.结果 成功构建了OV-142的原核表达质粒,并获得了OV-142重组融合蛋白.当联合分析OV-142 IgG型自身抗体与CA125时,在卵巢恶性肿瘤诊断中的敏感性为71.4%,高于单独分析IgG(41.3%)或CA125(61.1%);特异性为89.1%,高于单独分析IgG(84.2%)或CA125(88.0%);准确性为81.9%,高于单独分析IgG(66.8%)或CA125(77.1%).结论 OV-142是BARD1的1个剪切变异体,其有可能成为卵巢恶性肿瘤免疫治疗的新靶点.OV-142抗原的IgG型自身抗体在卵巢恶性肿瘤诊断中有可能成为CA125的1个重要的补充血清学标志物.
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轴突导向因子netrin-1在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与胎盘新生血管形成的关系
目的 探讨轴突导向因子netrin-1在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其对胎盘新生血管形成中的作用.方法 采用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测正常妊娠妇女20例(正常妊娠组)和子痫前期孕妇20例(子痫前期组,其中轻度12例,重度8例)的胎盘组织中轴突导向因子netrin-1 mRNA和蛋白的表达;采用免疫组化并通过抗F8因子抗体检测两组孕妇胎盘组织中的血管密度.结果 (1)正常妊娠组及子痫前期组孕妇胎盘组织中netrin-1 mRNA相对吸光度(A)值分别为0.51±0.08和0.41±0.06,netrin-1蛋白A值分别为26.4±1.8和20.5±1.3.两组分别比较,差异有统计学意义(P＜0.01).子痫前期组轻度和重度孕妇netrin-1 mRNA A值分别为0.48±0.08和0.34±0.07,netrin-1蛋白A值分别为22.8±1.3和18.2±1.0.两者分别比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)子痫前期组孕妇胎盘血管密度为(54±8)个,正常妊娠组孕妇为(65±10)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);子痫前期组中重度孕妇血管密度为(48±7)个,轻度孕妇为(60±9)个,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)正常妊娠组孕妇胎盘组织中netrin-1 mRNA及其蛋白表达与血管密度呈正相关关系,相关系数(r)分别为0.67和0.71(P均＜0.01);子痫前期组孕妇胎盘组织中netrin-1 mRNA及其蛋白表达与血管密度呈正相关关系,r分别为0.61和0.70(P均＜0.01);子痫前期组轻度孕妇胎盘组织中netrin-1 mRNA及其蛋白表达与血管密度呈正相关关系,r分别为0.69和0.73(P均＜0.01);重度孕妇胎盘组织中netrin-1 mRNA及其蛋白表达与血管密度呈正相关关系,r分别为0.71和0.75(P均＜0.01).结论 子痫前期孕妇胎盘组织中netrin-1表达下降,可能是胎盘血管密度降低的原因之一.
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多基因蛋白联合检测判断卵巢上皮性癌患者预后的初步探讨
目的 初步探讨多基因蛋白联合检测判断卵巢上皮性癌(卵巢癌)预后的价值.方法 选择广西医科大学附属肿瘤医院1991-2001 年间确诊为卵巢癌Ⅱ～Ⅲ期的患者共80例,患者均接受理想的肿瘤细胞减灭术和以铂类为主的化疗,其中预后好组(指存活期≥2年)46例,预后差组(指存活期＜2年)34例.采用组织芯片与免疫组化法对两组患者癌组织进行多个基因蛋白(共17个,即ToPo-Ⅱ、Ki-67、MGMT、PCNA、p27、p53、p16、P-gp、LRP、GST-π、bcl-2、C-myc、Fas、bax、MSH2、MRP、BCRP蛋白)表达的检测,并分析其与卵巢癌患者预后的关系;对两组中表达有差异的6个蛋白(即P-gp、BCRP、MGMT、MSH2、p27和p16蛋白)进行多基因蛋白联合检测,并对据此判断的卵巢癌患者预后的价值进行分析.结果 (1)预后差组P-gp、BCRP、MSH2蛋白阳性表达率(分别为62%、50%和50%)明显高于预后好组(分别为33%、28%和28%,P＜0.05);而预后好组MGMT、p27、p16蛋白阳性表达率(分别为43%、54%和43%)明显高于预后差组(分别为18%、29%和24%,P＜0.05).(2)Cox模型分析显示,MRP、C-myc、LRP、p16、p27、MGMT、ToPo-Ⅱ、P-gp、GST-π蛋白表达与卵巢癌患者的预后有关(P＜0.01).其中,MRP、C-myc、LRP、ToPo-Ⅱ、P-gp、GST-π蛋白阳性表达者预后差,而MGMT、p27、p16蛋白阳性表达者预后好.(3)多基因蛋白联合检测结果显示,P-gp+MGMT蛋白联合检测呈阳性表达者与预后密切相关(P＜0.01),两者联合检测对卵巢癌患者预后总的预测准确率达70%.结论 P-gp、MGMT、p27、p16蛋白可作为预测卵巢癌患者预后的标志物,而多基因蛋白联合检测则能更好地预测卵巢癌患者的预后.
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p63蛋白、芳香酶P450及类固醇生成因子1在子宫内膜息肉中的表达及意义
目的 探讨p63蛋白、芳香酶P450 (P450arom)及类固醇生成因子1(SF-1)在子宫内膜息肉中的表达变化及其在子宫内膜息肉发病机制中的作用.方法 选择2012年6月至10月在复旦大学附属妇产科医院就诊、因异常阴道流血或宫腔占位等行宫腔镜手术、术后病理诊断为子宫内膜息肉的患者30例;同时经患者及医院伦理委员会同意,取息肉周围内膜组织20例及正常子宫内膜组织25例.采用免疫组化SP法及实时荧光定量PCR技术检测p63、P450arom及SF-1蛋白和mRNA的表达情况(蛋白的表达以组织化学评分表示).结果 (1)蛋白表达:p63、P450arom及SF-1蛋白在子宫内膜息肉组织中的表达均显著升高(P＜0.05),评分分别为(0.8±0.5)、(1.2±1.1)、(1.1±0.8)分,正常子宫内膜组织中均无3种蛋白的表达(评分均为0).(2)mRNA表达:P450arom mRNA的表达水平在子宫内膜息肉组织中高于息肉周围内膜、正常子宫内膜组织,分别为0.274±0.082、0.105±0.052、0.105±0.065,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);而SF-1 mRNA(分别为0.105±0.049、0.053±0.043)及p63mRNA(分别为0.261±0.052、0.180±0.018)的表达水平在子宫内膜息肉与息肉周围内膜之间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 p63、P450arom及SF-1可能是促进子宫内膜息肉形成的重要因子.
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青少年多囊卵巢综合征患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性
目的 探讨青少年多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性.方法 收集2006年1-6月于中山大学附属第二医院妇科内分泌门诊就诊的PCOS患者42例,按年龄分为青少年组(17～19岁)19例、成年组(20～38岁)23例;同期选择16～19岁、月经正常的青春期女性20例为对照组.于月经周期第1～5天或孕激素治疗撤退性出血第1～5天(闭经者日期不限)测定3组妇女血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮、游离睾酮(FT)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)、性激素结合球蛋白(SHBG)和转移抑制素水平,并计算游离雄激素指数(FAI).次日对3组妇女行75 g口服葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验,分别测定空腹、服糖后1 h、服糖后2 h的血糖及胰岛素水平,并分别计算曲线下面积(AUC)、空腹血糖与宅腹胰岛素比值(GIR)和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果 (1)内分泌激素水平比较:各组妇女的LH水平,青少年组[(12±8)U/L]和成年组[(12±7)U/L]均高于对照组[(6±4)U/L],差异均有统计学意义(P＜0.05);成年组的FT水平[(2.3±1.2)pmol/L]高于青少年组[(1.3±0.8)pmol/L]和对照组[(1.1±0.5)pmol/L],青少年组的FT水平也高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);青少年组的DHEAS水平[(3.1±2.7)μmol/L]低于对照组[(6.3±2.7)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.05);成年组的FAI(5.6±4.1)高于对照组(3.0±1.3),差异也有统计学意义(P＜0.05).FSH、睾酮和SHBG水平在3组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)代谢水平及转移抑制素水平比较:青少年组的空腹、服糖后2 h胰岛素水平及胰岛素AUC分别为(13±7)mU/L、(88±59)mU/L和(133±80)mU·L~(-1)·min~(-1),均高于对照组[分别为(7±3)mU/L、(57±29)mU/L和(82±34)mU·L~(-1)·min~(-1)],且空腹胰岛素水平高于成年组[(9±5)mU/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).成年组空腹、服糖后2 h血糖水平分别为(5.01±0.44)mmol/L和(6.48±1.16)mmol/L,均分别高于对照组[分别为(4.68±0.29)mmol/L和(5.44±0.83)mmol/L]和青少年组[分别为(4.67±0.30)mmol/L和(5.93±1.44)mmol/L],成年组血糖AUC[(9.99±1.85)mmol·L~(-1)·min~(-1)]高于对照组[(8.42±1.53)mmol·L~(-1)·min~(-1)],差均有统计学意义(P＜0.05).青少年组HOMA-IR为2.6±2.0,高于对照组(1.4±0.7);GIR为10±8,低于对照组(16±10),差异均有统计学意义(P＜0.05).青少年组和成年组的转移抑制素水平分别为(0.25±0.19)、(0.29±0.29)pmol/L,均高于对照组[(0.18±0.23)pmol/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)转移抑制素水平与各项指标的相关性:血清转移抑制素水平与LH、睾酮及服糖后2 h血糖水平呈正相关关系(r分别为0.256、0.286、0.267,P分别为0.044,0.025、0.043).结论 青少年PCOS患者血清转移抑制素水平显著高于正常青春期女性,转移抑制素高表达所致的青春期发育亢进与青少年PCOS患者的发病可能存在一定关系.
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节律基因Period2在人卵巢上皮性癌组织中表达的意义及在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用
目的：探讨节律基因Period2在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者癌组织中表达的意义，并探讨Period2基因在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用及可能机制。方法选择2010年1月至2013年12月山西医科大学第一医院存档的卵巢癌石蜡标本22份（卵巢癌组），其中Ⅰ期8份、Ⅱ期8份、Ⅲ期6份，另选取同期卵巢良性上皮性肿瘤石蜡标本6份（良性肿瘤组），采用实时定量PCR技术和蛋白印迹（western blot）法分别检测两组患者肿瘤组织中Period2 mRNA和蛋白的表达。使用卵巢癌细胞株SKOV3细胞构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，实验分为3组，即重组质粒组、空质粒组、对照组，每组8只裸鼠；利用基因转染技术转染Period2基因，采用实时定量PCR技术检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中Period2 mRNA的表达，监测裸鼠移植瘤的生长情况，并计算其抑瘤率；采用实时定量PCR技术和western blot法分别检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中抗凋亡基因BRE、促凋亡基因TNFR1、抑癌基因NIX mRNA和蛋白的表达。结果（1）患者肿瘤组织中Period2 mRNA的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为2.59±0.50、0.47±0.08、0.42±0.08，良性肿瘤组为6.59±1.05；患者肿瘤组织中Period2蛋白的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为0.835±0.087、0.412±0.035、0.199±0.031，良性肿瘤组为0.874±0.094。除良性肿瘤组Period2蛋白与Ⅰ期卵巢癌比较差异无统计学意义（P＞0.05）外，良性肿瘤组Period2 mRNA和蛋白的表达水平均明显高于卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P<0.01）；且随着卵巢癌期别的升高，Period2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P<0.05）。（2）转染后2周，重组质粒组裸鼠移植瘤组织中Period2 mRNA的表达水平为6.11±0.56，明显高于空质粒组、对照组（分别为0.50±0.09、0.44±0.08；P<0.01）；重组质粒组移植瘤体积为（486±70）mm3，明显小于空质粒组、对照组[分别为（835±106）、（846±110）mm3；P<0.01]；重组质粒组抑瘤率高达42.9%，明显高于空质粒组、对照组（分别为3.8%和0；P<0.05）。（3）重组质粒组移植瘤组织中BRE mRNA和蛋白的表达水平分别为0.48±0.16、0.432±0.010，均明显低于空质粒组（分别为12.69±0.86、0.730±0.019）、对照组（分别为13.48±0.98、0.703±0.022；P<0.05），TNFR1、NIX mRNA和蛋白的表达水平均明显高于空质粒组、对照组（P<0.05）。结论晚期卵巢癌组织中Period2 mRNA和蛋白表达缺失。转染并稳定表达Period2基因后可使卵巢癌细胞的生长速度减慢，抑瘤率明显提高。Period2基因可能通过抑制BRE基因，促进TNFR1、NIX基因的表达而促进卵巢癌细胞的凋亡，从而发挥抑瘤作用。
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子宫颈脱落细胞中DAPK1、 RAR-β和MGMT基因启动子的甲基化水平及其临床意义
目的 检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化水平,探讨其筛查高级别宫颈病变[包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ]及宫颈鳞癌的价值.方法 采用简单随机法选取2010年3-10月间北京协和医院临床使用后剩余的宫颈脱落细胞标本共103份,其中,细胞学诊断包括正常宫颈细胞12份、不典型鳞状上皮细胞(ASC)17份、低度鳞状上皮内病变(LSIL) 30份、高度鳞状上皮内病变( HSIL)30份、宫颈鳞癌14份；组织学诊断包括正常宫颈组织27份、CIN Ⅰ19份、CIN Ⅱ 17份、CIN Ⅲ 25份、宫颈鳞癌15份.采用甲基化特异性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)法检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率,并评价MS-HRM法检测的敏感性；采用第二代杂交捕获技术( HCⅡ)检测宫颈脱落细胞中高危型HPV载量(以HPV-HCⅡ值表示)；评价DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化和HCⅡ单独或联合检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的价值.结果MS-HRM法可以检测出标准样本中的1％DNA甲基化率.在不同细胞学病变中,DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.011、0.002)；在不同组织学病变中,DAPK1和RAR-β基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.021).高级别宫颈病变+宫颈鳞癌与正常宫颈+CINI组织中DAPK1基因启动子的甲基化率分别为1.47％和20.98％,两者比较,差异有统计学意义(P =0.000).DAPK1基因启动子的甲基化检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的灵敏度为0.571、特异度为0.791,曲线下面积(AUC)为0.709；DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测的灵敏度为0.825、特异度为0.565,AUC为0.695.结论 MS-HRM法检测宫颈脱落细胞的甲基化水平是可行的.DAPK1、RAR-β基因启动子甲基化可以作为筛查宫颈病变的分子标记.DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测有助于筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌.
