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  • 子宫颈脱落细胞中DAPK1、 RAR-β和MGMT基因启动子的甲基化水平及其临床意义

    作者:仲肇基;杨佳欣;曹冬焱;孙崟;孙璐璐;程雪梅;陈杰;郎景和;沈铿

    目的 检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化水平,探讨其筛查高级别宫颈病变[包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ]及宫颈鳞癌的价值.方法 采用简单随机法选取2010年3-10月间北京协和医院临床使用后剩余的宫颈脱落细胞标本共103份,其中,细胞学诊断包括正常宫颈细胞12份、不典型鳞状上皮细胞(ASC)17份、低度鳞状上皮内病变(LSIL) 30份、高度鳞状上皮内病变( HSIL)30份、宫颈鳞癌14份;组织学诊断包括正常宫颈组织27份、CIN Ⅰ19份、CIN Ⅱ 17份、CIN Ⅲ 25份、宫颈鳞癌15份.采用甲基化特异性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)法检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率,并评价MS-HRM法检测的敏感性;采用第二代杂交捕获技术( HCⅡ)检测宫颈脱落细胞中高危型HPV载量(以HPV-HCⅡ值表示);评价DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化和HCⅡ单独或联合检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的价值.结果MS-HRM法可以检测出标准样本中的1%DNA甲基化率.在不同细胞学病变中,DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.011、0.002);在不同组织学病变中,DAPK1和RAR-β基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.021).高级别宫颈病变+宫颈鳞癌与正常宫颈+CINI组织中DAPK1基因启动子的甲基化率分别为1.47%和20.98%,两者比较,差异有统计学意义(P =0.000).DAPK1基因启动子的甲基化检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的灵敏度为0.571、特异度为0.791,曲线下面积(AUC)为0.709;DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测的灵敏度为0.825、特异度为0.565,AUC为0.695.结论 MS-HRM法检测宫颈脱落细胞的甲基化水平是可行的.DAPK1、RAR-β基因启动子甲基化可以作为筛查宫颈病变的分子标记.DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测有助于筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌.

  • RAS相关区域家族1A和死亡相关蛋白激酶基因启动子在视网膜母细胞瘤中的甲基化状态

    作者:刘茹;高玲;卢光琇;唐罗生;朱小华;王建

    目的 研究肿瘤抑制基因RAS相关区域家族1A(RASSFIA)和死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子在视网膜母细胞瘤(RB)组织和外周血的甲基化状态.方法 对RB石蜡组织切片进行实验研究,对RB患者和正常人进行病例对照研究,应用甲基化特异性聚合酶链式反应技术检测28例RB组织、9例RB患者外周血中RASSF1A和DAPK基因启动子的甲基化状态,分别收集年龄、性别相匹配的5例角膜捐赠者死亡后获取的正常视网膜、5例健康志愿者的血清作为对照,采用Fisher确切概率法比较两组间甲基化率的差异.结果 RB组织中RASSF1A基因启动子的甲基化率为60.7%(17/28),高于正常人视网膜组织0%(0/5)或瘤旁组织17.9%(5/28),差异有统计学意义(P<0.01),且单侧RB组织的甲基化率(72.7%)高于双侧(16.7%).另外在2例(2/9)RB患者外周血中检测到RASSF1A基因启动子的高甲基化.而DAPK基因启动子在RB组织及患者外周血中均未发生甲基化.结论 RASSF1A基因启动子高甲基化是RB中一种常见频发的表观遗传修饰.(中华眼科杂志,2009,45:631-635)

  • 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓NR2B与CaMKⅡα的关系

    作者:徐如彬;王春艳;李依泽;张麟临;贾韡;赵亓;郭素倩;王国林

    目的 评价瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓含2B亚基的NMDA受体(NR2B)与钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)的关系.方法 取尾静脉置管及鞘内置管成功的雄性SD大鼠40只,体重260~280 g,2~3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)鞘内注射生理盐水0.1 ml,10 min后经尾静脉输注生理盐水0.1ml·kg-1·min-1,持续60 min;瑞芬太尼+切口痛组(RI组)鞘内注射生理盐水0.1 ml,10 min后尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg· kg-1·min-1,持续60 min,输注开始即刻建立切口痛模型;NR2B拮抗剂Ro 25-6981组(Ro组)鞘内注射Ro 25-6981(0.1 ml) 10 μg,10 min后尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg-1 ·min-1,持续60min;瑞芬太尼+切口痛+Ro 25-6981组(RI+Ro组)鞘内注射Ro 25-6981(0.1 ml)10 μg,10 min后尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg· kg-1·min-1,持续60 min,输注开始即刻制备切口痛模型.于静脉输注生理盐水或瑞芬太尼前24 h、输注完毕后2、6、24和48 h(T0-4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).后一次行为学测试后处死大鼠,取L4-6脊髓节段,采用Western blot法测定脊髓总蛋白和膜蛋白NR2B(tNR2B和mNR2B)及总蛋白CaMKⅡα(tCaMKⅡα)和磷酸化CaMKⅡα(pCaMKⅡα)的表达水平,计算mNR2B/tNR2B比值及pCaMKⅡα/tCaMKⅡα比值.结果 与C组比较,RI组MWT降低,TWL缩短,脊髓tNR2B、mNR2B,tCaMKⅡα及pCaMKⅡα表达上调,mNR2B/tNR2B比值、pCaMKⅡα/tCaMKⅡα比值升高(P<0.05或0.01).与RI组比较,RI+Ro组MWT升高,TWL延长,脊髓tNR2B、mNR2B和tCaMKⅡα及pCaMKⅡα表达下调,mNR2B/tNR2B比值、pCaMKⅡα/tCaMKⅡα比值降低(P<0.05或0.01).结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓NR2B功能增强可激活CaMKⅡα,该过程可能参与了瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏形成的机制.

  • 细胞外信号调节激酶通路抑制剂对完全弗氏佐剂致痛大鼠背根神经结中谷氨酸转运蛋白表达的影响

    作者:苏小军;郝建华;郭正刚;李萌萌

    目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制剂PD98059时完全弗氏佐剂(CFA)致痛大鼠脊髓背根神经结(DRG)中谷氨酸转运蛋白表达的影响.方法:24只大鼠随机分为对照组、单纯致痛组、PD1组和PD10组.疼痛模型采用大鼠足底注射CFA 100μL.对照组及单纯致痛组经椎管内给予二甲基亚砜(DMSO)10μL,每日2次.PD1组和PD10组分别经椎管内给予PD98059 1μg或10μg,每日2次.测定大鼠每日痛阈变化,3 d后RT-PCR法检测大鼠DRG内谷氨酸转运蛋白表达的变化.结果:注射CFA致痛后各组大鼠痛阈均显著降低,PD1组与PD10组大鼠痛阈均较单纯致痛组显著升高,PD1组与PD10组痛阈升高差异无显著性.单纯致痛组DRG中谷氨酸转运体1(GLT-1)和兴奋性氨基酸载体1(EAAC1)表达显著高于对照组、PD1组、PD10组.除PD1组DRG中GLT-1表达高于对照组外,PD1组、PD10组及对照组DRG中GLT-1与EAAC1表达差异无显著性.结论:鞘内给予PD98059可减轻大鼠足底注射CFA引起的疼痛反应并减低致痛侧DRG中谷氨酸转运蛋白表达.

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