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支气管灌洗液抑癌基因过甲基化对肺癌诊断价值的研究
目的 探讨支气管灌洗液抑癌基因过甲基化对肺癌诊断的应用价值.方法 选取北京市结核病胸部肿瘤研究所收治怀疑肺癌患者78例,包括肺癌51例和良性病变患者27例,从支气管灌洗液上清和细胞提取DNA,对上清游离DNA进行定量分析,并采用NMSP完成对支气管灌洗液上清和细胞的过甲基化分析,所选择的靶基因包括p16,MGMT以及RASSF1A基因.将NMSP结果与临床诊断比较,计算敏感性和特异性.结果 中心型肺癌、周围型肺癌和肺部良性病变支气管灌洗液上清游离DNA含量没有显著差异.支气管灌洗液细胞抑癌基因过甲基化诊断中心型肺癌的敏感性和特异性分别为85.2%和81.5%,诊断周围型肺癌的敏感性和特异性分别为54.2%和81.5%.支气管灌洗液上清和细胞抑癌基因过甲基化诊断中心型肺癌的敏感性和特异性为88.9%和70.4%,诊断周围型肺癌的敏感性和特异性为75.0%和70.4%.结论 支气管灌洗液抑癌基因的过甲基化可为肺癌诊断提供帮助.
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HIF-1α、MGMT和CD133在人胶质母细胞瘤中的表达及相关性研究
目的：通过免疫组化S-P法及RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在胶质母细胞瘤细胞中的表达，探讨三者在胶质母细胞瘤中的表达相关性。方法收集自2010年12月至2012年12月手术切除病理证实的胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）33例，同期收集低级别胶质瘤25例（WHOⅠ～Ⅱ级）作为对照组，收集脑深部肿瘤皮层造瘘正常脑组织5例，作为阴性对照组。采用免疫组织化学S-P法检测HIF-1α、MGMT、CD133在人脑胶质母细胞瘤、低级别胶质瘤及正常脑组织中的表达；应用RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在胶质母细胞瘤细胞、低级别胶质瘤中的mRNA的表达，统计软件选用SPSS 13.0，计量资料采用卡方检验。相关统计分析采用Spearman等级相关分析。以α=0.05为检验水准，当P<0.05时具有统计学意义。结果免疫组织化学S-P法检测33例胶质母细胞瘤，其中HIF-1α阳性表达32例（96.7%）， MGMT阳性表达23例（69.7%），CD133阳性表达33例（100%），均阳性表达23例（69.7%）。对照组25例低级别胶质瘤中HIF-1α阳性表达9例（36.0%），MGMT阳性表达8例（32.0%），CD133阳性表达8例（32.0%），均阳性表达4例（16.0%）。在正常脑组织中HIF-1α、MGMT、CD133均阴性表达。可见随肿瘤级别升高，HIF-1α、MGMT、CD133表达显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤中mRNA的表达，其中HIF-1αmRNA 在低级别胶质瘤中相对定量0.23±0.05，在胶质母细胞瘤中相对定量0.87±0.12；MGMT mRNA 在低级别胶质瘤中相对定量0.27±0.07，在胶质母细胞瘤中相对定量0.67±0.09；CD133 mRNA在低级别胶质瘤中相对定量0.16±0.05，在胶质母细胞瘤中相对定量0.57±0.08。相关性分析发现 HIF-1α与 MGMT 的 r=0.91、P<0.05，HIF-1α与CD133的r=0.85、P<0.05，MGMT与CD133的r=0.802、P<0.05，提示三者均存在正相关性。结论随肿瘤级别升高，HIF-1α、MGMT、CD133阳性表达率升高。三者的相关性研究提示HIF-1α与MGMT、HIF-1α与 CD133、MGMT 与 CD133均存在正相关性。提示在胶质母细胞瘤的发生、发展、复发、预后中三者存在协同作用，通过干预不同因子的表达，为胶质母细胞瘤的治疗提供新的思路及方向。
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MGMT 基因启动子甲基化与 MGMT 蛋白和 NF-κB 在脑胶质瘤的表达及意义
目的探讨MGMT和NF-κB在脑胶质瘤中的表达及两者的相关性和MGMT基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性分析。方法采用免疫组化EnVision法检测MGMT和NF-κB在42例不同级别脑胶质瘤石蜡标本中的表达，运用MSP方法检测MGMT基因启动子甲基化状况。结果（1） MGMT在低级别组胶质瘤中的表达率为73.7％；在高级别组中其表达率为21.7％。（2） NF-κB在低级别组胶质瘤中的表达率为52.6％，在高级别组中的表达率为60.9％。（3）42例胶质瘤中MGMT基因启动子甲基化发生率为50％，其中MGMT蛋白阳性的胶质瘤，启动子甲基化发生率为26.3％；MGMT蛋白表达阴性的胶质瘤，启动子甲基化发生率为69.6％；MGMT蛋白表达阳性率与其基因启动子甲基化呈负相关。（4） MGMT与NF-κB两者表达无相关性。结论 MGMT蛋白表达随胶质瘤的级别增高而下降，NF-κB与MGMT与胶质瘤级别无相关性。
关键词： 神经胶质瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 NF-κB 甲基化 -
尿中O6-甲基鸟嘌呤与恶性肿瘤关系的研究
目的:探讨尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)水平与肿瘤关系.方法:利用高效毛细管区带电泳法,检测了正常人和恶性肿瘤患者尿中O6-MeG水平.结果:呼吸系统恶性肿瘤患者尿中O6-MeG水平为(2.58±1.23)μmol/L,消化系统恶性肿瘤患者尿中O6-MeG水平为(2.89±1.11)μmol/L,正常者尿中O6-MeG水平为(1.38±0.99)μmol/L.两恶性肿瘤组与正常人组比较,差异有显著性(P<0.05).结论:恶性肿瘤患者尿中O6-MeG水平显著高于正常人,在恶性肿瘤诊断中具有重要的意义.
关键词： O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 电泳 毛细管/方法 肿瘤 -
胃癌组织中MDR和MGMT基因表达及其相关意义
目的:检测胃癌组织多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因和O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanin-e-DNA-meyhyltransferase,MGMT )基因的表达,探讨MDR、MGMT基因表达的相关性及其在胃癌组织中的临床病理学意义.方法:应用加强型原位杂交技术通过核酸探针对76例胃癌组织进行MDR、MGMT基因检测,同时应用自动图像分析系统进行定量分析.结果:76例胃癌组织中MDR基因阳性表达率为68.4%,积分吸光度为351.5±121.4,分别高于正常组织(40.0%,168.4±68.8);MGMT阳性表达率为40.8%,积分吸光度为161.4±78.84,分别低于正常组织(60.4%,332.9±118.2).生存时间5年以下组 MDR和MGMT基因表达分别高于5年以上组,rs分别为0.250和0.287,P值分别为0.010和0.008;白细胞计数＞3×109 L-1组MGMT基因表达高于＜3×109 L-1组,rs=0.354,P=0.001;有淋巴结转移组MDR基因表达高于无淋巴结转移组,rs=0.280,P=0.004;术前化疗组MDR表达明显高于未化疗组,rs=0.300,P=0.002.结论:胃癌组织存在原发性和获得性MDR基因耐药的双重性,而MGMT基因主要是原发性,两种基因表达可能是2个相互独立的事件,在胃癌预后和骨髓抑制的判断上有一定意义.
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胶质母细胞瘤的磁共振征象与免疫组化的关系
目的 研究胶质母细胞瘤(GBM)的磁共振(MRI)征象与异柠檬酸盐脱氢酶(IDH)1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)免疫组化的关系.方法 收集2008年1月至2013年12月病理诊断为GBM的病例,分析术前MRI与IDH1、MGMT免疫组化之间的关系.结果 111例患者,术后病理均行IDH1、MGMT免疫组化检查,IDH1阳性29例(26.1％),MGMT阳性60例(54.1％).单因素分析显示,肿瘤大直径(x2=9.400,P=0.009)、MRI增强(t=2.204,P=0.030)、瘤周水肿(PTE)分度(x2=6.411,P=0.041)和主要侵袭部位(=2.788,P =0.006)与IDH1的阳性表达存在相关性.Logistic多因素回归分析显示,肿瘤大直径(P=0.015)、MRI增强(P =0.037)和主要侵袭部位(P =0.024)是预测IDH1阳性表达的主要因子,其中肿瘤大直径是重要的预测因子(P＜0.05);MGMT的阳性表达与病变个数(x2 =6.678,P=0.010)、磁共振扩散加权成像(DWI)(t=-4.320,P=0.000)、囊变(x2=16.185,P=0.000)、坏死(x2=8.325,P=0.004)和主要侵袭部位(t=2.612,P=0.010)相关.Logistic多因素回归分析显示,病变数量(P =0.008)、囊变(P=0.000)和DWI(P =0.000)是预测MGMT阳性表达的主要因子,其中DWI高信号是重要的预测因子(P＜0.05).结论 IDH1、MGMT免疫组化结果与常规MRI上肿瘤表现具有一定相关性.通过分析影像和病理的相关性,有利于筛选和初步判断肿瘤的生物学行为和判断其预后.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对涎腺腺样囊性癌细胞系细胞MGMT和hMLH1基因表达的影响
目的 观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对体外培养人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞系细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT)和人类mutL同源物1(homo sapiens mutL homolog 1,hMLH1)基因表达的影响,探讨DNA甲基转移酶抑制剂应用于SACC治疗的可行性及机制.方法 用不同浓度5-Aza-CdR分别处理体外培养SACC-83和SACC-LM细胞作为药物处理组,以药物处理浓度0 μmol/L为对照组.甲基噻唑基四唑法确定5-Aza-CdR的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration of a substance,IC50)；实时聚合酶链反应和反转录聚合酶链反应检测用药后细胞中MGMT和hMLH1 mRNA表达水平.结果 药物处理细胞24 h后细胞形态发生变化,并且随时间延长变化愈加显著.5-Aza-CdR对SACC-83和SACC-LM细胞的IC50分别为(11.816±0.023)、(5.751± 0.049) μmol/L.经5-Aza-CdR处理后,SACC-83和SACC-LM细胞中MGMT和hMLH1 mRNA表达增高1～5倍,MGMT和hMLH1在药物处理组与对照组之间的表达差异有统计学意义(P＜0.01).结论 5-Aza-CdR可改变细胞形态,上调MGMT和hMLH1 mRNA的表达,其机制可能与5-Aza-CdR反转MGMT、hMLH1基因DNA启动子区高甲基化状态有关.
关键词： 癌 腺样囊性 脱氧胞苷 半数抑制浓度 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 -
替莫唑胺在垂体腺瘤治疗中的应用及进展
垂体腺瘤是临床常见的原发性中枢神经系统肿瘤,其中侵袭性腺瘤和垂体腺癌因其侵袭性生长的病理生理学特点仍是目前神经外科治疗之难点,需手术切除病灶辅助放射治疗和药物化疗.近年来,由于替莫唑胺对功能性垂体腺瘤、侵袭性垂体腺瘤和垂体腺癌的治疗取得进展,使其颇受临床关注,尤其是O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶可否作为判断替莫唑胺疗效的指标,成为烷化剂化疗药物之研究热点.
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胶质瘤MGMT基因启动子甲基化研究及应用进展
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是一种DNA修复酶,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是近年研究较多的胶质瘤相关分子标志,既是评价胶质瘤对烷化剂是否敏感的重要分子标志,也是胶质瘤患者预后评价及复发与假性进展鉴别的重要参考指标.尤其是老年恶性胶质瘤患者,MGMT基因启动子CpG岛甲基化是指导其分子分型和制定个性化治疗方案的重要参考依据.本文对MGMT蛋白功能,以及MGMT基因启动子CpG岛甲基化在指导胶质瘤治疗、判断预后及鉴别复发与假性进展中的应用进行概述.
关键词： 神经胶质瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 CpG岛 甲基化 综述 -
人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2放射耐受及其相关机制的初步研究
目的 研究胶质瘤干细胞在胶质瘤耐受放射中的作用,为克服恶性胶质瘤放射耐受寻找新的干预靶点.方法干细胞培养条件下培养自建人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2,以及人脑胶质瘤细胞系U251和SHG-44,观察不同剂量直线加速器照射前后细胞形态变化、Hoechst 33342-细胞和CD133+细胞比例、肿瘤细胞存活率和裸小鼠致瘤率等项指标,并以实时荧光定量PCR方法检测人脑胶质瘤细胞系U251和人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2照射前后MGMT基因表达水平.结果 当照射剂量为1～15Gy时.人脑胶质瘤干/祖细胞系SU-2中的Hoechst 33342-细胞和CD133+细胞比例明显增加,高达18.73%和13.70%,细胞存活率升高、致瘤率(8/8)增加、侵袭性增强,MGMT基因表达水平轻度升高.结论 经一定剂量的X线照射后,胶质瘤干细胞因具有强于其他肿瘤细胞的放射耐受性而出现选择性存活且细胞比例升高,其生物学特性如细胞存活率、体内致瘤率增加,侵袭性增强.可能与胶质瘤干细胞DNA损伤修复能力提高有关,确切的分子学机制值得进一步深入研究.
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影响替莫唑胺治疗脑胶质瘤效果的非病理级别因素初步探讨
目的 探讨影响替荧唑胺治疗脑胶质瘤效果的非病理级别因素.方法 31例恶性胶质瘤患者符合纳入与排除标准,手术完全切除者17例,非完全切除者14例.依纳入时间分为前期组(10例)和后期组(21例),前期组施行替莫唑胺常规剂量[150～200mg/(m2·d)]化疗方案;后期组根据O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)检测结果 分别采用替莫唑胺常规剂量和小剂量[50mg/(m2·d)]化疗方案.结果 31例患者随访6～27个月,17例肿瘤完全切除者均存活,其手术后放射治疗及药物化疗效果与MGMT表达水平无明显相关性(P＞0.05).14例非完全切除患者,治疗客观有效率为42.86%(6/14,3例完全缓解、3例部分缓解),疾病控制率为57.14%(8/14,3例完全缓解、3例部分缓解,2例病情稳定);另有5例肿瘤进展,1例肿瘤假性进展.肿瘤进展和假性进展者MGMT表达均呈阳性,MRS分析提示肿瘤进展者手术部位存在高水肿区和高乳酸代谢区,结论 腩胶质瘤的组织病理学类型是影响替莫唑胺化疗效果的主要凶素,在非完伞切除患者中,化疗后达到完伞缓懈者以间变性少突胶质细胞瘤为主;而近期肿瘤进展者以胶质母细胞瘤为主.于替莫唑胺化疗之前对非完全切除者进行MGMT检测和手术部位局部水肿程度及乳酸水平评估,有利于提高治疗效果.
关键词： 达卡巴嗪 神经胶质瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 病理学 -
B3型胸腺瘤和胸腺癌中MGMT蛋白表达缺失的意义及预后分析
目的 探讨B3型胸腺瘤和胸腺癌的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白表达缺失的意义以及对预后的影响.方法 选取河北医科大学附属第四医院2008年1月—2015年1月行根治性手术切除的胸腺上皮肿瘤标本蜡块60例,按照WHO组织学分型分为B3型胸腺瘤组(20例)、胸腺癌组(28例)、瘤旁组织组(12例);按照Masaoka临床分期分为Ⅰ/Ⅱ组和Ⅲ/Ⅳ组.术后随访截止日期2018年4月.比较B3型胸腺瘤和胸腺癌中MGMT蛋白表达缺失的情况.结果 胸腺癌组MGMT蛋白表达缺失高于B3型胸腺瘤组和瘤旁组织组(P<0.05),B3型胸腺瘤组MGMT蛋白缺失高于瘤旁组织组(P<0.05).Ⅲ/Ⅳ期B3型胸腺瘤和胸腺癌发生蛋白表达缺失的比例高于Ⅰ/Ⅱ期(P<0.05).MGMT蛋白表达缺失病例5年生存率低于表达正常病例(P<0.05).Ⅲ/Ⅳ5年生存率低于Ⅰ/Ⅱ(P<0.05).结论 MGMT蛋白表达缺失提示B3型胸腺瘤和胸腺癌恶性程度高,预后差.
关键词： 胸腺肿瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 甲基化 生存率 -
胃癌组织中MGMT基因甲基化与DNMT1蛋白表达的关系
背景:研究表明MGMT基因启动子区甲基化与包括胃癌在内的多种恶性肿瘤密切相关.DNA甲基转移酶1(DNMT1)在多种肿瘤组织中的表达上调.但目前关于胃癌组织中MGMT基因甲基化状态与DNMT1表达关系的研究少见.目的:探讨MGMT基因甲基化、DNMT1蛋白表达与胃癌的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃腺癌组织及其相应癌旁组织中MGMT基因启动子区甲基化状态,RT-PCR、免疫组化法分别检测MGMT、DNMT1 mRNA和蛋白表达.结果:胃癌组织中MGMT基因启动子区甲基化率明显高于癌旁组织(45.0%对13.3%,P<0.001).胃癌组织中MGMT mRNA阳性表达率显著低于癌旁组织(41.7%对93.3%,P<0.001),而DNMT1 mRNA阳性率明显升高(76.7%对18.3%,P<0.001).MGMT mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因启动子甲基化率较阳性表达者升高(57.1%对28.0%,P<0.05).胃癌组织中MGMT蛋白表达与DNMT1蛋白表达呈负相关(r=-0.795,P<0.01).结论:MGMT基因启动子区高甲基化和DNMT1高表达可能与胃癌的发生、发展有关.DNMT1可能调控MGMT基因的甲基化过程.
关键词： 胃肿瘤 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 甲基化 DNMT1 -
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与胃癌遗传易感性的关系
目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因第3外显子上第84和第53密码子上的多态性改变与胃癌易感性的关系以及与环境因素在胃癌发生中的交互作用.方法应用以人群为基础的病例对照研究,采用PCR-RFLP技术检测191例胃癌病例组与251例健康对照组MGMT-Leu53Leu和MGMT-Leu84Phe多态改变的频率.结果 MGMT-Leu84Phe各基因型在胃癌病例组(CC 74.3%,CT 23.6%,TT 2.1%)和对照组(CC 74.1%,CT 23.5%,TT 2.4%)的分布情况与MGMT-Leu53Leu基因型相似,差异无显著性;MGMT-Leu53Leu各基因型在胃癌病例组中的分布分别为CC型(75.4%)、CT型(21.5%)、TT型(3.1%),对照组分布为CC型(72.1%)、CT型(24.7%)、TT型(3.2%),两组比较差异无显著性;分别按年龄、性别、吸烟、饮酒、H.pylori感染以及胃癌家族史等因素分层分析也没有发现两个位点的突变基因型与胃癌遗传易感性的相关性.结论结果显示MGMT-Leu53Leu、Leu84Phe与胃癌的发生没有显著关联.
关键词： O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 基因 胃肿瘤 -
DNA甲基转移酶1和张力蛋白肿瘤抑癌基因在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和张力蛋白肿瘤抑癌基因(PTEN)在胃癌中的表达及其临床病理意义.方法 应用免疫组化检测85例胃癌组织、81例胃癌癌旁组织及98例正常胃组织中DNMT1和PTEN的表达情况,分析两者与临床病理特征之间的关系.结果 DNMT1在胃癌组织中的阳性表达率(85.88％)明显高于癌旁组织(72.84％)和正常胃组织(72.84％),差异有统计学意义(x2=4.33,P＜0.05;x2 =99.23,P＜0.01)；PTEN在胃癌组织中的阳性表达率(21.18％)明显低于癌旁组织(51.85％)和正常胃组织(90.82％),差异有统计学意义(x2=16.91,P＜0.01;x2 =90.91,P＜0.01).DNMT1和PTEN与胃癌的病理分化类型、肿瘤大小及胃液的幽门螺杆菌(Hp)阳性有显著的相关性(P＜0.05).结论 DNMT1和PTEN的异常表达与胃癌的发生发展有紧密的关系.
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燃煤污染型地方性氟中毒患者血细胞hMLH1与MGMT mRNA表达改变
目的 探讨燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型地氟病)对血液中错配修复基因(hMLH1)及O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT) mRNA表达水平的影响.方法 在贵州省毕节地区燃煤型地氟病区抽取45例患者,按其氟斑牙和氟骨症严重程度分为轻、中、重度组各15例.在毕节地区非病区抽取15名村民作为对照组.实时荧光定量PCR技术检测各组血样本MGMT、hMLH1 mRNA水平.结果 燃煤型氟中毒轻、中、重度3个组中hMLH1及MGMT mRNA水平与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着氟中毒程度的加重,其降低程度更加明显.组间两两比较,随着中毒程度加重,表达水平明显降低(P＜0.05).结论 MGMT与hMLH1 mRNA水平在燃煤型氟中毒所造成的DNA损伤及修复机制中可能有负面作用.
关键词： O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 错配修复基因 氟中毒
