首页 > 文献资料
-
TRPC1/ORAI1复合体调节HUVECs SOC和ROC介导的Ca2+内流和NO生成
目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 钙池操纵性钙通道(SOC) 和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca2+内流和NO生成中的作用.方法 取2~3代HUVECs,将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs.用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,real-time PCR和Western blot检测TRPC1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达及抑制效率.细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组及空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂、ROC模拟剂TPA+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法 同步检测[Ca2+]i和NO.随后将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVEC,与CaR激动剂孵育后检测[Ca2+]i和NO,用免疫共沉淀法检测TRPC1和ORAI1的相互作用.结果 1)与对照组相比,TRPC1及ORAI1组,mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);2)在4种不同处理作用下,TRPC1及ORAI1转染组中细胞内Ca2+浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);3)与对照组及单转染TRPC1及ORAI1组比,共转染组细胞内Ca2+浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);4)TRPC1与ORAI1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强.结论 TRPC1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成.
-
在神经系统中TRPC1的研究进展
经典瞬时感受器电位通道1 (classical transient receptor potential channel 1,TRPC1)是具有六次跨膜结构的非选择性阳离子通道,能通透钙离子和钠离子.它是哺乳类动物中第一个被发现的TRP蛋白,隶属于TRPC亚家族.TRPC1可因受体,细胞内钙库清空或机械刺激激活而开放,引起细胞内钙离子浓度的升高和细胞膜的去极化.TRPC1在神经系统内的分布较为广泛,近年来的研究显示该分子激活后引发的效应与神经系统许多生理病理过程密切相关,因此本文就目前TRPC1在神经系统中的研究进展进行综述.
-
TRPC1在儿童肝母细胞瘤中的表达与临床病理特征及预后的关系
目的 检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达,分析其与临床病理特征及预后的关系.方法 收集湖南省儿童医院普外科自2008年1月至2015年12月行肝脏肿块切除的16例肝母细胞瘤患儿的病理资料和临床资料,采用免疫组织化学法检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征(肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤的大小)的关系,随访3～5年分析其与预后的关系.结果 TRPC1在16例肝母细胞瘤患儿癌组织中表达程度不同,高表达占62.5％(10/16),低表达占37.5％(6/16).TRPC1高表达与肝母细胞瘤临床病理特征中的肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤大小比较差异有统计学意义(P＜0.05);患儿3年生存率为72.73％(8/11),5年生存率为50％(3/6).TRPC1表达与3年、5年生存率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TRPC1表达可能与儿童肝母细胞瘤的发生、发展有关,但不一定与预后有关.
-
TRPC1在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮层内的表达及头孢曲松钠的干预作用
目的 研究TRPC1在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮层内的表达,初步探讨头孢曲松钠(CTX)对其影响及可能机制.方法 将7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(S组)、生理盐水组(C组)及头孢曲松钠治疗组(CTX组).C组、CTX组按照Rice法制备HIBD模型,每组均依术后观察时间点不同分为6h、12h、24h、3d、5d、7d共6个亚组,每个亚组5只,在相应时间点断头取脑采用Western印迹和免疫组化法检测各组病变侧脑组织TRPC1蛋白的表达变化.结果 Western印迹结果:C组TRPC1蛋白的表达水平在各时间点均较S组明显升高(P＜0.05),TRPC1在HIBD后1d达到高峰,随后开始下降.CTX组在每个观察时间点TRPC1的水平均低于C组(P＜0.05),但高于S组(P＜0.05).免疫组化染色结果:S组在各时间点脑皮质中可见少量棕黄色颗粒阳性细胞,C组在HIBD后阳性细胞数明显高于S组,且在第1天达高峰,随后逐渐下降(P＜0.05);CTX组表达趋势与C组类似(P＜0.05),各时间点的阳性细胞数较S组高但均低于C组(P＜0.05).结论 新生大鼠HIBD后病变侧大脑皮层TRPC1的表达水平明显升高,并具有时间差异性,表明其参与了HIBD的病理过程,可能在HIBD诱导的细胞凋亡中发挥重要作用.头孢曲松钠能够下调TRPC1的表达,从而起到对HIBD新生大鼠的脑保护作用.
-
实时定量PCR检测镉对人肝癌细胞SMMC-7721中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的影响
目的:观察氯化镉(CdCl2)处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响.方法:以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40μmol·L-1的培养液中24 h.采用SYBR荧光实时定量PCR法检测TRPC1和TRPC4 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法.结果:随着剂量的增加,TRPCI mRNA表达有降低的趋势,除20μmol·L-0组外,各组mRNA表达均高于对照组(P<0.01);TRPC4 mRNA表达有先增高后降低的趋势,5、10和30μmol·L-1组mRNA表达均高于对照组(P<0.01).2个基因均在低剂量(5和10 μmol·L-1)组表达增加幅度较大(P<0.01).结论:低剂量镉可显著增加人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4的表达,镉可在mRNA水平对SMMC-7721细胞钙通道产生影响.
-
MiR-135a与糖尿病肾病肾脏纤维化的相关性研究
目的：探讨miR-135a与糖尿病肾病肾脏纤维化关系及其具体作用机制。方法通过RT-PCR技术测定糖尿病肾病患者血清及肾脏组织中miRNA-135a（miR-135a）的含量。采用荧光素酶报告基因实验验证miRNA-135a的靶基因。构建miR-135a过表达质粒，上调肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞中miR-135a的表达，通过蛋白印记及免疫荧光法检测与肾脏纤维化相关蛋白的表达，运用荧光素报告基因及免疫印记的方法寻找、确定miR-135a。结果从糖尿病肾病患者以及db/db小鼠的血清和肾组织的miR-135a水平来看，miR-135a表达显著上调。我们证实了瞬时受体电位阳离子通道，亚家族C，成员1（Tran-sient receptor potential channel，subfamily C，member 1，TRPC1）是miR-135a的靶基因。 TRPC1的过度表达能够逆转miR-135a对促进肾小球系膜细胞增殖以及增加胞外基质蛋白合成的病理效应。在糖尿病患者肾组织中miR-135a的减少使得TRPC1回到正常水平，并减少了纤维连接蛋白和胶原蛋白I在人体内的合成。抑制TRPC1水平可能是miR-135a在糖尿病肾损伤中促肾纤维化的一种机制。结论 miR-135a可通过靶向调节TRPC1参与糖尿病肾病肾脏纤维化的发生，这些发现表明miR-135a在肾脏纤维化中有重要作用，抑制miR-135a的表达可能成为治疗糖尿病肾病的一种有效方法。
关键词： 糖尿病肾病 纤维化 microRNA-135a TRPC1 -
人TRPC1基因真核表达载体的构建及肝细胞表达
目的 构建人TRPC1基因真核表达载体,并观察其在人肝细胞株(HL-7702)中的表达.方法 提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)得到TRPC1基因的编码序列,经纯化回收后克隆入表达载体pGM-T中,酶切及琼脂糖凝胶电泳分析鉴定,后转染HL-7702细胞,通过电泳和噻唑蓝(MTY)比色法检测基因表达与细胞生长.结果 扩增片段长度为455 bp,重组质粒pGM-T-TRPC1经酶切鉴定条带位置正确,证明表达载体成功构建.电泳结果显示转染重组质粒后的HL-7702细胞表达TRPC1增强.MTF检测发现转染前后肝细胞生长未受到明显影响(t值分别为0.43、-0.40、-2.01、-1.60、-0.41和-0.72,P值均0.05).结论 成功构建人TRPC1基因的真核表达载体pGM-T-TRPC1,并在人肝细胞株HL-7702中稳定表达.
-
食管癌中TRPC1蛋白的表达与临床病理特征的关系及其与Ki-67的相关性分析
目的:探讨瞬时受体电位通道1 (transient receptor potential canonical 1,TRPC1)在食管癌中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化法检测71例食管癌手术切除标本癌组织及11例切缘中TRPC1、Ki-67蛋白表达水平,分析TRPC1与食管癌临床病理特征的关系以及TRPC1、Ki-67的相互关系.结果:(1)在随机抽取的11例切缘中,TRPC1蛋白表达弱阳性3例(27％),阴性8例;在71例食管癌癌组织中,TRPC1蛋白表达阳性38例(53.5％),阴性33例.(2)TRPC1蛋白的表达与患者的性别、年龄、病理T分期、淋巴结有无转移、神经束是否浸润、食管癌的分化程度无相关性(P＞0.05),而与患者肿瘤类型有相关性(P＜0.05).(3)TRPC1与Ki-67在食管癌组织中的表达呈负相关(P＜0.05).结论:TRPC1蛋白在食管鳞癌组织中高表达.通过Ki-67染色评估细胞增殖,TRPC1与Ki-67呈负相关,提示TRPC1在食管癌中可能具有保护作用.
-
鼻咽癌中TRPC1的表达及其临床意义
目的:研究TRPC1蛋白在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义.方法:收集鼻咽癌组织213例,鼻咽慢性炎症组织24例.应用免疫组化技术(Envision二步法)检测鼻咽癌和鼻咽慢性炎症组织中TRPC1蛋白的表达.采用SPSS 13.0软件对实验数据进行分析.结果:TRPC1蛋白在鼻咽癌组和时照组织表达率分别为78.87%、40.74%,两者差异具有统计学意义(P<0.001);NPC组织中,TRPC1蛋白的表达与患者的年龄、性别、病理类型、EBV-IgG状态、颅底侵犯、远处转移无关,而与T分期、N分期、临床分期相关(P<0.05).结论:TRPC1蛋白在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用,TRPC1高表达可能参与和促进鼻咽癌的增殖和迁移
-
血管平滑肌细胞中钙库操纵性钙通道的作用研究进展
Ca2+是细胞信号传导过程中常见的第二信使,许多蛋白质直接或间接与之结合后被活化,对机体正常生理功能有十分重要的意义.机体有一套周密的调节机制用于严格控制细胞内、外钙离子浓度的瞬间变化.
-
胸腺五肽联合常规药物治疗对老年慢性阻塞性肺疾病患者血清白细胞介素-17A、CXCL12水平及TRPC1表达的影响
目的 探讨胸腺五肽联合常规药物对老年慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者血清IL-17A、CXCL12水平及TRPC1表达的影响.方法 我院2014年5月至2016年5月就诊的156例COPD患者,按随机数字表法分为两组各78例,对照组进行常规治疗,观察组在此基础上进行胸腺五肽皮下注射.比较两组免疫功能、肺通气功能及外周血IL-17A、CXCL12水平及肺泡灌洗液中TRPC1水平.结果 治疗后,观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及FEV1、FEV1/FVC、PEF均高于对照组,CD8+、外周血IL-17A、CXCL12水平及BALF中TRPC1水平均低于对照组(P＜0.05).两组不良反应的总发生率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胸腺五肽联合常规药物治疗能显著提高老年COPD患者的免疫功能,改善肺通气功能,降低炎症因子,缓解炎症反应,安全有效.
