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HIV-1感染过程B细胞免疫应答的研究现状及展望
在大部分未接受抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染患者中,其体内病毒持续复制,CD4+T细胞减少,免疫系统呈高度活化状态,病程持续进展.尽管CD4+T细胞是HIV感染的主要靶细胞,但HIV感染是一个系统性的疾病,其他淋巴细胞亚群亦均存在不同程度的异常.在艾滋病(AIDS)患者中,B细胞是第一个被报道的功能受损的淋巴细胞,其表现出多克隆的高活化状态,但B细胞对新的外来抗原反应性很低,在体外进行刺激也表现出很弱的反应性.结果提示,尽管HIV感染过程中B细胞是多克隆活化的,但其特异性免疫应答功能却是受损的.
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应用丈夫或无关个体淋巴细胞对原因不明性习惯性流产的主动免疫治疗
习惯性流产,尤其是原因不明的习惯性流产的治疗是当今产科难题,国内报道原因不明习惯性流产占流产的56%,国外报道占72%[1,2].随着生殖免疫学的发展,认为原因不明性习惯性流产疾病,可能与患者对胚胎、半同种抗原反应性低下,无法产生适当的封闭抗体而致胚胎被排斥而流产有关,并出现了采用患者丈夫或无关个体的淋巴细胞等主动免疫疗法[3].我们自2000年以来,对原因不明性习惯性流产病例进行主动免疫治疗,同时对治疗前后机体免疫反应性变化进行观察.
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SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析
目的:SARS冠状病毒( SARS-CoV)核衣壳蛋白( N蛋白)在杆状病毒-昆虫系统的表达,研究其抗原性。方法:利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因,使用BamHⅠ和Sal Ⅰ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体,构建重组质粒转化DH10 Bac细胞,获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞,在High Five细胞中表达SARS-NP;表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果:成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒,并在High Five细胞高效表达,获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证,重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗(8E1A17)和兔免疫血清识别,能与SARS患者血清反应,与健康人血清、人冠状病毒229 E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应,具良好抗原反应性。结论:SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统,具较强抗原反应性,初步认为其与229 E型和OC43型感染血清无交叉反应性。
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抗原特异性T细胞的检测方法及其应用
抗原特异性T细胞(antigen specific T cell,AST)在防御病毒感染,肿瘤发生以及自身免疫性疾病方面都具有重要作用,检测细胞的活动以鉴别淋巴细胞对特异刺激的反应,在研究这些疾病的发病机制及治疗方面都有重要意义.在单细胞水平同时检测相关功能分子的活性状态将有助于更全面的分析细胞的活性状态[1].一些新方法已经建立,这使得抗原反应性T细胞可直接检测而无需通过体外扩增[2],新一代的T细胞分析使得直接定量或鉴定特异性T细胞反应更为方便.本文主要就有关抗原特异性T细胞检测方法及应用状况综述如下.
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纯红再障引起B型血抗原减弱1例报道
人类的ABO血型是通过父母遗传给后代,由遗传因子所决定,一般终生不会改变,但在一些特殊条件下,红细胞抗原反应性变弱或消灭,可产生"血型变异".现将我市中心医院儿科所见B型血抗原减弱1例,报道如下.
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柯萨奇病毒A16型VP1~VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析
目的 克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性.方法 抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒7 1型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性.结果 成功构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应.结论 在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性.
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人转铁蛋白纯化制备及其抗原活性验证
目的 采用非亲和纯化方法从人血清中制备获得高纯度转铁蛋白(T RF),并用此为免疫抗原免疫新西兰大白兔,验证T RF蛋白的免疫原性.方法 首先采用两步硫酸铵沉淀法从血清中粗纯 T RF蛋白,再用两步阴离子交换层析柱进行纯化,终得到 TRF.结果 TRF蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)纯度与外购纯品相当,且高效液相色谱(HPLC)纯度达到96.8%,纯化回收率为78.6%.对于同一批TRF样品, T RF检测试剂盒(免疫法)测得的活性浓度与紫外分光光度计法测得的蛋白浓度比值(Rc)约为0.95,说明制备的T RF与免疫检测试剂盒中的T RF抗体具有良好的抗原反应性.后用纯化样品免疫新西兰大白兔,经过4次免疫后的抗血清效价滴度达到1:128000,说明制备的 T RF具有良好的免疫原性.结论 制备的高纯度T RF具有良好的抗原反应性及免疫原性,可用于动物免疫以制备抗T RF抗体,为配制T RF检测试剂(免疫法)提供良好的原料基础.
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不同狂犬病毒株抗原反应性的比较研究
应用ELISA法对285份免疫前及健康人血清和742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗(aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测.结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均能达到90%以上,且与SNT效价的相关性较好;而aG株抗原对除aG株以外其它毒株狂犬病疫苗免疫后血清的阳性检出率仅为50%左右.因此不同毒株狂犬病毒抗原的反应性存在明显差异,选用纯度高、活性好的CTN株病毒或两株病毒以不同比例混合作为ELISA检测用抗原,测定疫苗免疫后人群的抗体水平,可获得满意的结果.