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EV71和Cox A16型肠道病毒RT-PCR检测方法的研究
目的 建立咽拭子标本中EV71和Cox A16型肠道病毒逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法.方法 根据GENBANK数据库中EV71和Cox A16型肠道病毒的基因序列,利用CLUSTAL软件进行序列比对分析,选择基因组的保守序列,并借助引物设计生物信息学软件,设计筛选出一套针对EV71和Cox A16型肠道病毒的RT-PCR扩增的引物.从特异性、低检测限、重复性等方面进行评估,建立了EV71和Cox A16型肠道病毒RT-PCR检测方法.结果 RT-PCR方法对EV71和COXA16病毒的低检测量分别为63 TCID50/ml和32 TCID50/ml.其他病原微生物及人类基因组在该系统无反应信号,显示方法特异性良好.结论 RT-PCR对手足口病病原体检测准确性高、特异性强,具有快速、经济等特点,适合手足口病的早期诊断.
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2007-2014年浙东某沿海地区手足口病流行病学及病原学特征分析
目的:分析2007-2014年浙东沿海地区北仑区手足口病流行特征.方法:从国家疾病监测信息报告管理系统获取北仑区2007-2014年手足口病资料,运用描述流行病学方法进行分析.对咽拭子标本采用RT-PCR扩增基因序列测定,并进行分析.结果:2007-2014年北仑区共报告7 522例,报告重症25例,无死亡病例,年均发病率为249.08/10万.2007-2014年年均发病率呈指数增长.＜5岁占所有发病人数的94.30％,年龄分布呈现双峰模式,1岁～组为好发年龄段,在3岁～组发病率出现一个次高峰.男性患者多于女性,散居儿童多,占63.25％,成人的手足口病发病例数逐渐上升.发病具有明显的季节性.2007年-2010年发病呈单峰分布,即5-7月份为高峰.2011年-2014年,发病呈双峰分布,5-7月份为第一个高峰,在9月-11月又迎来第二个高峰.重症病例患者均为M小于5岁的儿童,EV 71阳性者占84.00％.2008年-2011年手足口病优势病原菌以EV 71为主(62.28％),2012年-2013年以肠道通用性病毒及柯萨奇A16型占主要比例(80.72％),2014年则以EV 71和柯萨奇A6型病毒为主(71.95％).结论:北仑区手足口病疫情处于高流行态势,＜5岁的散居儿童是主要发病人群,季节呈双峰分布,非EV71病毒与EV71病毒交替成为手足口病的优势病原菌,但EV71病毒仍是重症手足口病的优势病原菌.
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2014-2016年度乌鲁木齐市手足口病疫情的调查分析
目的:分析手足口病流行特征,为综合防治手足口病提供依据.方法:利用国家疾病监测信息系统收集病例信息,采用描述性流行病学方法对乌鲁木齐市2014至2016年手足口病监测资料进行分析,采用荧光定量PCR检测法对部分标本进行病原学检测.结果:2014至2016年乌鲁木齐市累计报告手足口病8676例,其中死亡2例,年平均发病率为83.31/10万.头屯河区发病率高为132.22/10万,男性高于女性.每年5至7月为发病高峰期.≤5岁儿童发病占87.25％.结论:乌鲁木齐市手足口病流行呈现明显的季节性、地区性和人群性,应加强幼托机构和小学的疫情监测和卫生宣传教育工作,防止手足口病的暴发和流行.
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2011年南京儿童手足口病病原学特征分析
目的 分析2011年南京儿童手足口病病原学特征,为手足口病的临床治疗提供科学的参考依据.方法 对2011年3-7月流行季节南京地区186例手足口病患儿进行肠道病毒E71型(EV71)、卡萨奇病毒A16型(CoxA16)和其他肠道病毒的监测,监测所得资料采用流行病学方法进行分析.结果 在186例手足口病患儿中普通病例以肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型共同主导,重症病例及死亡病例以肠道病毒71型为主要病原体.结论 2011年南京儿童手足口病普通病例中肠道病毒71和柯萨奇病毒A16均可见,重症病例和死亡病例中以肠道病毒71型为主.
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杭州市萧山区2013-2015年手足口病病原谱分析
目的 了解2013-2015年杭州市萧山区手足口病的病原体型别及分布特征,为进一步掌握疫情动态提供依据.方法 采用实时荧光逆转录PCR(RT-PCR)方法对辖区内232例手足口病临床诊断病例标本进行病原体检测,并结合患儿临床资料分析检测结果.结果 232份标本中共检出肠道病毒(EV)阳性结果150份,阳性率为64.66％;其中肠道病毒71 (EV71)阳性结果32份,柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)阳性结果26份,分别占EV阳性标本的21.33％、17.33％;非典型肠道病毒阳性结果92份,所占比例为61.33％,已占据主导地位;5岁及其以下儿童EV感染占所有感染者的98.00％;不同性别患儿EV、EV71和CoxA16阳性率差异无统计学意义(P＞0.05);患儿的主要临床症状是发热伴随疱疹.结论 引起萧山区手足口病的病原谱出现较为明显的变化,应加强对非典型肠道病毒的监测.5岁及其以下儿童是EV感染的高危人群,需要加强对该类人群的防控力度,做到早发现、早隔离、早治疗.
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临海市2010-2011年手足口病病原学监测结果分析
目的 了解浙江省临海市2010-2011年手足口病主要病原体型别及分布特征,为手足口病的防控提供病原学依据.方法 采用实时荧光RT-PCR方法,对哨点医院定期采集的临床诊断病例样本进行肠道病毒(EV)核酸检测和型别鉴定.结果 共采集咽拭子样本157份,检出112例EV阳性病例,阳性率为71.34％;其中EV71阳性病例28例,CoxA16阳性病例33例,分别占EV阳性病例的25.00％、29.46％；5岁以下儿童EV感染占所有感染者的95.54％；2010年和2011年儿童EV71和CoxA16阳性率分别为17.44％、24.42％和18.31％、16.90％,差异无统计学意义(P＞0.05)；男性病例EV阳性检出率高于女性病例(P＜0.05)；重症病例EV71阳性检出率为100％.2010-2011年病原构成呈动态变化特征.结论 引起临海市手足口病的主要病原体为EV71和CoxA16;5岁以下儿童是EV感染的高危人群；EV71是引起重症病例的主要病原体.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A16型 实时荧光RT-PCR -
2012年长沙市手足口病病原学分析
目的 了解2012年长沙市手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的病原构成.方法 采集HFMD患者咽拭子或粪便样本,提取病毒核酸,实时荧光RT-PCR检测人肠道病毒(human enterovirus,HEV)、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)核酸;兼并引物扩增非EV71、非CVA16型肠道病毒VP1区,序列测定和BLAST比对确定其型别.结果 2012年共采集HFMD病例样本746例,实时荧光RT-PCR检测201例EV核酸阴性,545例阳性,核酸阳性率为73.06％;EV核酸阳性样本中,364例为EV71阳性,占66.79％;84例为CVA16阳性,占15.41％; 97例为非EV71、非CVA16型肠道病毒,占17.80％.2012年全年均可检测到阳性病例,主要集中在4～6月,共检出阳性样本220例,占EV阳性的40.37％;其中,有498例患者为年龄5岁以下的婴幼儿,占91.38％,为主要感染人群.非EV71、非CVA16型肠道病毒经普通RT PCR扩增,44例样本扩增出目的片段,BLAST比对确定病毒型别分别为:CVA6 22例,CVA10 19例,分别占阳性样本的4.04％和3.49％;而CVA12、CVB3、ECH016目前各检出1例.结论 2012年引起长沙市HFMD的病原型别多样,但以EV71为优势型别.
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4起手足口病疫情病原检测与基因特征分析
目的 明确4起手足口病暴发疫情的病原体并对其进行基因特征分析.方法 收集4起手足口病疫情部分病例的粪便,用RT-PCR的方法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16),选择4个代表性样品进行VP1基因的扩增和核苷酸序列测定,测定结果利用DNAstar和Blast软件进行比对分析.结果 4次手足口病疫情的样品CA16检测均为阳性,EV71检测均为阴性.4个代表株与标准株Tainan5079-98的VP1基因核苷酸同源性波动于95.2%～95.6%,4个毒株之间的核苷酸同源性波动于93.9%～99.4%.在基因系统发生树上,这4个毒株均属于C基因型,但是处于3个不同的进化分支上.结论 引起这4起手足口病疫情的病原为CA16,4个毒株均属于C基因型.
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北京市2007年手足口病暴发疫情的病原学分析
目的 对北京市2007年5-7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定.方法 采用RT-PCR技术,对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本,直接进行肠道病毒(EV)分型;采用RD传代细胞,对标本进行病毒分离培养,再对其阳性培养物进行EV分型.对其中部分原始标本和阳性分离物中的EV VP1区进行核苷酸序列及预测的氨基酸序列分析.结果 北京市2007年发生在大兴区的2起疫情由EV71引起,其他4个区的6起疫情均由柯萨奇病毒A16型(Cox A16)引起.大兴区2起疫情的EV71都属于C基因型的C4亚型,但分别处于VP1基因亲缘性系统发生树的不同分支,其核苷酸和氨基酸分别存在3.7%和0.8%的差异;来源于顺义区的Cox A16与其他病毒分别处于不同分支,其核苷酸和氨基酸分别存在3.7%和0%的差异.结论 北京市2007年手足口病疫情主要由EV71和Cox A16两种病原引起,而每种病原都存在2个或2个以上流行株病毒;且Cox A16的传播似乎较EV71更为广泛.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A16型 反转录-聚合酶链反应 -
广东省健康人群手足口病病原隐性感染状况调查
目的 了解广东省健康人群手足口病病原隐性感染情况.方法 在广东省7个市随机抽取7个年龄组健康儿童及成年人,采集粪便标本进行手足口病病原检测.结果 7个市共采集1285份样本,肠道病毒71型(EV71)阳性率为0.39％(5/1285),柯萨奇病毒A组16(CA16)阳性率为0.23％(3/1285),其他肠道病毒阳性率为7.00％ (90/1285).4～6岁年龄组EV71阳性率高,为1.79％ (4/223),其次为0～3岁年龄组,为0.67％(1/223),其余年龄组均未检出EV71；只有4～6岁年龄组检出CA16,阳性率为1.35％ (3/223).所有EV71阳性标本均在本地户籍人群中检出,阳性率为0.47％(5/1063)；CA16在本地户籍人群(0.19％)和外地户籍(0.85％)中均有检出,差异无统计学意义(P＞0.05).农村和城市EV71的阳性率分别为0.36％和0.54％,差异无统计学意义(P＞0.05)；所有CA16阳性标本均在城市儿童中检出.结论 广东省健康人群中仅6岁以下年龄组检出EV71和CA16阳性,健康成年人中未检出EV71和CA16阳性,应重点对儿童尤其是学龄前儿童采取有效防控措施.
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济南市2009-2011年手足口病病原学及基因特征分析
手足口病(HFMD)是由多种肠道病毒(EV)引起的一种急性传染病.2008年5月我国将其纳入法定报告丙类传染病管理.2009年卫生部进一步要求提高其病原学检测比例.2010年山东省开始进行全年监测.本研究采用RT-PCR对2009-2011年济南地区发生的2066例HFMD患者标本进行分析,阐明重症病例其病原及基因特征.
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浙江省宁波市2008-2011年手足口病流行病学及病原学特征分析
目的 分析2008-2011年宁波市手足口病流行特征.方法 从疾病监测信息报告管理系统获取宁波市2008-2011年手足口病资料,运用描述流行病学方法进行分析.对粪便标本采用RT-PCR扩增基因序列测定,并利用生物学软件分析.结果 2008-2011年宁波市共报告手足口病病例37 524例,其中重症196例,死亡12例,年均发病率为145.26/10万,病死率为0.03％.＜5岁儿童占报告病例的95.89％,散居儿童占64.10％；各地区发病均处于较高水平,其中宁海、象山县为发病率高的地区,发病高峰在4-7月,男性多于女性.实验室确诊2394例,肠道病毒(EV)71型是主要的病毒株,进化树分析表明宁波市手足口病EV71分离株属于C4a进化分支,其流行和传播存在多个传播链.Cox A16株同时包含Bla和Bib两条进化分支共同流行.健康儿童EV71中和抗体阳性率为53.48％,GMT为11.23(8.33 ～ 14.98)；Cox A16中和抗体阳性率为63.18％,GMT为12.61(6.70 ～ 16.52).结论 宁波市手足口病疫情处于高流行态势,＜5岁散居儿童是主要发病人群,EV71为优势株；EV71毒株为C4a亚群,CoxA16毒株为B1基因亚型,与中国大陆优势株流行趋势一致.
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2013年临沂市健康人群肠道病毒流行病学调查
目的 调查临沂市健康人群肠道病毒隐性感染状况和动态变化,并分析健康人群肠道病毒隐性感染情况与地区流行情况的关系. 方法 以≤6岁儿童及其监护人425人为调查对象,分别于4、6和9月进行调查,共调查1 275人次.对被调查者粪便标本进行肠道病毒通用型(PE)、肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A16型(CA16)的Real-time PCR检测,对检测结果进行分析. 结果 1)在兰山区与平邑县健康人群粪便标本中检出 111人次PE与12人次CA16,阳性率分别为8.71％和0.94％,未检出EV71;2)兰山区0～、1～、2～、3～、4～、5～和21～岁年龄组人群肠道病毒核酸阳性率分别为16.67％、23.33％、13.33％ 、25.83％、12.38％ 、3.81％和5.00％,平邑县分别为3.33％ 、20.00％、10.00％、17.50％、2.86％、5.83％和3.33％.除5～6岁年龄组外,在其他年龄组兰山区阳性率均高于平邑县;3)兰山区4、6和9月健康人群肠道病毒阳性率分别为9.93％、24.82％和9.29％,平邑县分别为6.21％、19.31％和6.89％;两县区肠道病毒阳性率均呈现先升高后降低的趋势;4)肠道病毒隐性感染者比例与该地区本年度流行型别呈正相关. 结论 健康人群肠道病毒隐性感染者比例随季节变化呈先升高后降低的钟形或半钟形的有规律变化;健康人群肠道病毒隐性感染与该地区流行情况密切相关.
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2011-2012年深圳市手足口病疫情流行病学和病原学特征分析
目的 了解深圳市2011-2012年手足口病聚集性疫情的流行病及病原学特征,为进一步开展防控工作提供依据.方法 应用描述流行病学方法对手足口病疫情资料进行分析,同时对各起疫情采集的标本,采用荧光PCR方法进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)和其他肠道病毒的核酸检测.结果 2011-2012年实验室共收到160起手足口病疫情的标本501份,其中EV71引起的疫情36起,占22.50％;由CA16引起的疫情52起,占32.50％;由其他肠道病毒引起的疫情40起,占25％.各区均有疫情发生,其中南山区84起,占52.50％;罗湖区36起,占22.5％.除8月份以外,其他月份均有疫情发生,3-7月份为发病高峰,9-11月份出现第2个小高峰.男性阳性率72.3％,女性阳性率73.4％.结论 2011-2012年深圳市手足口病聚集性疫情有地区和月份差异;不同性别间的阳性率没有显著性差异;病原体2011年以CA16为主,2012年则是非EV71、非CA16的其他肠道病毒占主导地位.
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2011-2015年苏州市手足口病相关病原监测
目的 对苏州市2010-2015年的手足口病相关病毒进行病原学监测分析,为苏州市预防和控制手足口病提供科学依据.方法 以苏州每个区为单位,每月采集至少五个轻症病例标本,重症病例均采样,采用实时荧光PCR方法进行病毒核酸检测,并对结果信息进行描述分析.结果苏州市2011-2015年共采集手足口病标本4 552份,检测结果为阳性的手足口标本2 818份(总阳性率为61.90%),相邻年份阳性率差异有统计学意义(x2=186.09,P<0.0001).手足口病主要感染1~5岁的儿童,其中66.17%是1~3岁儿童.EV71和CVA16是苏州市2011、2012年和2014年手足口病主要的病原;重症病例主要与EV71感染有关,2013年的肠道病毒其他亚型占主导地位,重症患者显著减少.结论 EV71和CVA16仍然是苏州市手足口病的重要病原体,但其他亚型的肠道病毒也占有一定比例,建议从肠道病毒的非EV71和CVA16中选择个别优势手足口病病原纳入手足口病监测.
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2014年某医院6224例手足口病病原学分析
目的：了解我院手足口病（hand－foot－and－mouth disease， HFMD）病原学特征，为本地区的HFMD防治提供数据支持。方法收集我院HFMD病区6224例HFMD患儿的血液标本，采用酶联免疫吸附法检测肠道病毒71型（enterovirus 71， EV71）和柯萨奇病毒A16型（coxsackie virus A16， Cox A16），并对数据进行统计学分析。结果6224例HFMD患儿中，各病毒型别比例由高到低依次为非EV71非Cox A16型 （41.29％，2570／6224）、EV71型（38.77％，2413／6224），Cox A16型 （13.54％，843／6224）、EV71＋Cox A16型（6.39％，398／6224）。2014年全年，我院HFMD病毒各型别感染高峰随时间变迁，其中非EV71非Cox A16型感染高峰时间长（6月－12月），其次为EV71型（1－5月），Cox A16型全年患病率均较低，无高发月份。6224例HFMD患儿中，病毒各型别男女患病率差异均无统计学意义（P均＞0.05）。各年龄段不同病毒型别患病率比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05），其中，1～岁组患病率高（39.59％，2464／6224），其次为2～岁组（24.42％，1520／6224）。结论我院婴幼儿HFMD主要以5岁以下感染为主，建议进一步加强高发年龄段HFMD病原监测，并对非EV71非Cox A16型进一步鉴定型别。
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柯萨奇病毒A16型VP1区基因变异和进化分析
目的 分析2010~2011年本院分离的2株柯萨奇病毒A16(Cox16)VP1区核苷酸(氨基酸)变异和进化特征,探讨CoxA16基因变异与临床特征的相关性.方法 选取CoxA16所导致的手足口病患儿的咽拭子标本,采用RT-PCR法扩增其VP1区3'-端核苷酸序列(约400 bp),所得序列与近几年中国内地和1951~2010年世界范围流行的CoxA16分离株进行核苷酸序列比对,并分析VP1区氨基酸的变异.结果 本研究中2例患儿均有典型的手足口病表现:发热,双手、足红色皮疹和口腔黏膜散在的疱疹,其中分离出JN2011-B11的患儿有轻微肝功能损害.此2株CoxA16均属于B1b基因型,与2008年中国株(QH0549T)的同源性高,核苷酸和氨基酸的同源性分别为96.0%和99.1%.近11年中国内地CoxA16 VP1区C-端氨基酸序列变异很小,仅在225、235和266三个位点出现.资料显示世界范围内2001年后的流行株以B1a和B1b为主.结论 近11年来,中国内地CoxA16毒株VP1区基因的变异程度较低,核苷酸变异率为4%~12.7%.本研究所分离的2株CoxA16毒株核苷酸和氨基酸同源性均较高,达97.7%和96.8%.该病毒基因变异与临床特征的相关性尚有待于进一步验证.
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手足口病感染病毒分布及感染趋势评估
目的 了解2010-2012年医院手足口病病毒感染状况和感染趋势,为临床制定有效的干预措施提供参考依据.方法 分别用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对肠道病毒普通型(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoXA16)进行检测.结果 2010-2012年共检测260份疑似手足口病患儿的送检标本,阳性69例,阳性率为26.5％,3年阳性率分别为17.7％、25.0％35.9％,呈逐年增长趋势;混合感染率为78.3％,单一感染率为21.7％,混合感染远高于单一感染,以EV71型混合感染多,占72.5％;手足口病发生率男性患儿为31.5％,女性患儿为20.5％,＜3岁患儿发生率高,为35.9％.结论 近年该地区手足口病逐年递增,发病率呈上升趋势,应加大防治力度.
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江苏省2008至2010年手足口病流行病学及病原学特征分析
目的 分析江苏省2008至2010年手足口病的流行病学和病原学特征,为手足口病的防治提供科学依据.方法 利用国家疾病监测信息管理系统开展手足口病监测,采用描述性流行病学方法对江苏省2008至2010年手足口病监测资料和部分患者病原学监测结果进行统计和分析,采用荧光定量RT-PCR方法对部分手足口病例进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测.结果 江苏省2008至2010年手足口病平均发病率为86.70/10万,发病高峰集中在4至7月份；苏南地区的发病率高于苏中地区,苏中地区发病率高于苏北地区,且差异有统计学意义,例如,2010年的发病率苏南为188.990/10万,苏中为109.040/10万,苏北为55.155/10万；以5岁以下的散居儿童或幼托儿童为主,男性发病高于女性(男:女2008年为1.76∶1,2009年为1.67∶1,2010年为1.64∶1),普通病例以肠道病毒71型( EV71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16)共同主导流行,重症病例和死亡病例以EV71为流行优势株.结论 江苏省手足口病流行具有明显的季节性、人群性以及地区性,引起手足口病普通病例流行的病原体主要为EV71和Cox A16,且不同年份间流行优势株有所差别,重症病例和死亡病例的流行优势毒株均为EV71.
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手足口病的解读与预防控制
手足口病是一个病情温和、病程自限,但有高度传染性的发疹性感染病,主要由柯萨奇病毒A16型或肠道病毒71型感染引起.接触传播为主要传播方式,人类普遍易感.呈世界性流行,有显著的夏秋季高峰,丰要见于5岁以下儿童.临床表现以痛性口腔溃疡和手、足无痛性皮疹为特征.目前尚没有公认的特效治疗,对症和支持治疗为主要处理措施.培养良好的卫生习惯可减少发病的危险性.
