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不同剂量卵蛋白诱发幼年大鼠支气管哮喘模型的比较
目的:利用不同剂量的卵清蛋白(OVA)诱导大鼠,探索建立一个稳定、理想的大鼠支气管哮喘模型.方法:用低、中、高剂量卵清蛋白致敏大鼠后再雾化吸入同一致敏原从而诱发大鼠哮喘发作,分别观察各组大鼠肺组织病理切片、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数和分类以及双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测BALF中OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及外周血和BALF白细胞介素(IL-4)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平.结果:3个模型组大鼠较正常对照组均出现哮喘异常症状,但高剂量组有明显的腹式呼吸和呼吸短促,且高剂量组肺组织病理显示气道炎症较低、中剂量组明显严重,3个模型组的BALF中细胞总数较对照组均有不同程度增高,且高剂量组增高有显著性(P<0.05);中、高剂量组的嗜酸粒细胞较对照组增高,且3个剂量组之间差异均有显著性(分别为P<0.05和P<0.01).中、高剂量组的淋巴细胞较对照组增高均有显著性(分别为P<0.05和P<0.01).中、高剂量组较低剂量组显著升高(P均<0.05).高剂量组大鼠血清中IL-4和BALF中OVA-IgE较对照组和低、中剂量组增高有显著性(P<0.05),中剂量组BALF中OVA IgE较对照组增高有显著性(P<0.05).高、中剂量组较低剂量组和对照组IFN-γ下降,差异均有显著性(P分别<0.01和<0.05).结论:幼年大鼠哮喘模型中的致敏原剂量的大小与哮喘气道变应性炎症的程度有关,大剂量腹腔注射OVA是一种操作简便的诱发大鼠哮喘模型的方法,成功率高,重复性好,值得动物实验推广使用.
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补肺汤对豚鼠哮喘模型前列腺素及血栓素的影响
支气管哮喘(Bronchial asthma)是在支气管高反应状态下,由于变应原或其他因素引起的广泛气道痉挛的疾病.本文就补肺汤对豚鼠哮喘模型的治疗作用,开展了初步研究,现将结果报告如下.
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五虎汤对病毒诱发哮喘幼年大鼠气道重塑的影响
探讨五虎汤对病毒诱发幼年SD大鼠哮喘模型气道重塑的影响.方法:将48只大鼠随机分为6组,分别为空白对照组,哮喘模型组,五虎汤高、中、低剂量组,阳性对照组,以RSV联合OVA致敏激发方法建立哮喘模型,各给药组分别予以五虎汤高、中、低剂量灌胃,空白对照组、哮喘模型组予以0.9%氯化钠溶液、阳性对照组予以地塞米松灌胃,持续2周后取右肺组织.行HE染色观察气道变化、Masson染色观察胶原纤维沉积并测定其表达量,Western blot法测定肺组织白细胞介素13(IL-13)表达量,并对二者相关性进行分析.结果:与空白对照组比较,哮喘模型组炎性细胞浸润增多、上皮下胶原沉积及平滑肌细胞层增厚等气道重塑结构改变,与哮喘模型组比较,五虎汤高、中剂量组及阳性对照组气道重塑程度明显减轻;与空白对照组比较,哮喘模型组胶原沉积IOD值及IL-13的表达值均显著升高(P<0.01),五虎汤高、中剂量组及阳性对照组组明显低于哮喘模型组(P<0.01);胶原沉积IOD值与肺组织IL-13表达量呈显著正相关.结论:五虎汤高、中剂量能够通过下调肺组织IL-13的表达而减少胶原纤维沉积,从而抑制哮喘气道重塑.
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穴位贴敷联合穴位注射乌体林斯对OVA哮喘模型大鼠气道炎症和气道高反应的影响
目的:使用穴位贴敷及穴位注射乌体林斯治疗慢性持续期OVA哮喘大鼠并探讨其作用机制.方法:卵蛋白(OVA)致敏并连续激发制作哮喘Wistar大鼠模型,大鼠按随机数字表法分为正常组、哮喘组、贴注组、布地奈德雾化组、联合组5组,治疗1个月后ELISA法测定血清中lgE,放射免疫法测定肺组织中IL-4、IL-5、ET-1,免疫组化法测定肺组织NF-κB表达,并分析NF-κB的IOD值.结果:模型组血清lgE,肺组织IL-4、IL-5、ET-1水平,肺组织NF-κB/p65活化情况、IOD值均高于正常组,各治疗组以上指标均低于模型组,联合组较2单独治疗组降低明显.结论:穴位贴敷联合穴位注射可能通过两方面作用抑制NF-κB的活化,进而抑制下游细胞因子IL-4、IL-5的活性来抑制哮喘炎症的发生,降低ET-1的产生来降低气道高反应性.
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苏子降气汤对哮喘大鼠气道重塑与肿瘤坏死因子、内皮素含量关系的影响
目的研究苏子降气汤对哮喘大鼠气道重塑的作用及其与肿瘤坏死因子(TNF)、内皮素(ET)含量的变化关系,以探讨苏子降气汤对哮喘大鼠气道重塑的作用机理.方法以卵白蛋白注射雾化吸入法复制哮喘大鼠模型,观察苏子降气汤对哮喘大鼠肺组织形态学,血清(浆)/肺泡灌洗液(BALF)中TNF、ET含量的影响.结果苏子降气汤对哮喘大鼠肺组织形态学具有明显的改善作用,能明显降低TNF、ET含量.结论苏子降气汤对哮喘模型气道重塑具有抑制作用,与降低哮喘模型血清(浆)/BALF中TNF、ET含量有关.
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地塞米松抑制哮喘模型大鼠肺组织血管内皮生长因子表达
哮喘是一种由多种细胞和细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病,反复炎症刺激可导致气道高反应性和气道重塑,气道细胞合成和分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)参与了哮喘气道重塑过程,但对哮喘急性发作期VEGF的变化及影响因素的研究却鲜见报道.本实验研究VEGF蛋白和mRNA在哮喘急性模型中的表达并观察地塞米松干预的影响.
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大鼠哮喘模型外周血和支气管肺泡灌洗液中γδ T细胞明显活化
T淋巴细胞依据其表面的细胞抗原受体(TCR)的不同,分为αβ T细胞和γδ T细胞.气道淋巴细胞和嗜酸粒细胞的浸润是支气管哮喘的主要病理特征,但尚未见有关γδ T细胞在哮喘中变化的研究报道.我们探讨了大鼠哮喘模型外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF) 中γδ T细胞亚群的数量变化和活性改变.
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IL-4RA基因转染对哮喘模型的干预性作用研究
目的 IL-4RA基因转染对哮喘模型过敏性炎症的干预性研究.方法 选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,随机分为5组(每组10只):空白对照组、哮喘模型组、空载体(104 CFU/ml pLNC-laz)干预组、激素治疗组、目的基因(104 CFU/ml pLNC-IL-4RA)干预组.各组在后一次激发后24 h放血杀死小鼠,检测血中嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)计数,用ELISA检测支气管肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中的各种细胞因子水平,并对BALF中各种炎症细胞计数,肺组织切片做HE染色.结果 哮喘模型鼠BALF中有大量嗜酸性粒细胞浸润,肺组织病理切片可见大量炎症细胞浸润、杯状细胞增生、黏膜壁破坏.哮喘模型的这些改变在激素和基因干预后明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01),而在空载体干预后则无明显的变化(P>0.05).空白对照组的BALF中IL-5、IL-13低于检测水平,哮喘模型组BALF中IL-5、IL-13水平明显增高,而基因治疗组和激素治疗组IL-5、IL-13水平明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),空载体干预组BALF中细胞因子水平与哮喘模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 通过逆转录病毒转染的IL-4RA的基因高表达成功地阻止在哮喘模型鼠气道由IL-4和IL-13诱发的气道嗜酸性粒细胞浸润,另外,逆转录病毒介导的IL-4RA在气道的表达明显地阻止了哮喘模型气道黏液的分泌,同时也减少了过敏性哮喘相关的TH2细胞因子水平,因此,基因治疗可能会成为治疗慢性哮喘气道炎症和哮喘症状的极有潜力的药物.
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哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的变化及地塞米松对其影响
p38蛋白激酶(p38 MAPK)是新近发现的与炎症、应激反应密切相关的蛋白激酶,参与了肥大细胞、嗜酸性粒细胞的定位迁移和淋巴细胞的发育、分化、成熟和活化的全过程,提示p38 MAPK可能与支气管哮喘的气道炎症机制相关.为探讨p38 MAPK在哮喘发病机制中的作用,我们选择了雄性SD大鼠20只,体重220±40g,2~3月龄.随机分成3组:A组为正常对照组,以生理盐水代替抗原进行注射和雾化吸入;B组为阳性对照组,给予鸡卵清蛋白(OVA,美国Sigma公司)致敏和刺激复制哮喘模型;C组为地塞米松(DEX)干预组,每天予以OVA雾化吸入前分别给予5mg/kg体重的DEX(美国Sigma公司)腹腔注射.
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标准化粉尘螨疫苗鼻腔免疫治疗的疗效和机制初探
变态反应疾病临床上常见的有哮喘和过敏性鼻炎等.哮喘是一种以肺部嗜酸粒细胞浸润和对各种激发因子产生气道高反应为特征的慢性气道炎性疾病,是一种常见病和多发病,尘螨是引发哮喘和变应性鼻炎重要的致敏原之一,80%的哮喘患者对尘螨过敏,采用尘螨诱发的哮喘模型能够更好地反映人体的哮喘情况[1].
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BCG-PSN通过抑制哮喘小鼠NF-κB影响BALF中细胞因子的水平
核因子NF-κB (Nuclear factor kappa B)是一个具有广泛生物学活性的核转录因子,可参与许多炎症的表达调控,是与支气管哮喘及气道炎症密切相关的因子之一.将28只6周龄BALB/c小鼠(山东大学医学院实验动物室)随机分为4组,每组7只.对照组:隔日腹腔内注射生理盐水(NS)0.03 ml, 第14天、28天、35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;BCG-PSN (卡介苗多糖核酸注射液,BCG-Polysaccharide nucleic acid)6周龄组:隔日腹部皮下注射BCG-PSN(商品名斯奇康1 ml/安瓿,长沙九芝堂公司产品)0.03 ml,在第14、28和35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;OVA(卵蛋白,aerosolization)组:隔日腹腔内注射NS 0.03 ml,建立哮喘模型;BCG-PSN 6周龄+OVA组:6周龄鼠,隔日腹部皮下注射BCG-PSN 0.03 ml,建立哮喘模型.
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黄芪对豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的作用研究
本研究利用豚鼠哮喘模型观察血红素氧合酶-1(HO-1)的表达特点及黄芪对HO-1表达的影响. 材料和方法雄性豚鼠30只,体重200~350 g,随机分为5组,每组6只. 腹腔内注射10%卵清蛋白(OVA)溶液1 ml致敏,2周后喷入1% OVA溶液激发30 s,对照组则喷入生理盐水30 s.A组(正常对照组):喷雾生理盐水,每日1次,共2周;B组(哮喘发作1周组 ):每日激发哮喘1次,共1周;C组(哮喘发作2周组):处理同B组,共2周;D组(黄芪治疗1周组 ):每日激发哮喘1次,每次于激发哮喘后30 min腹腔注射黄芪注射液5 g/kg,共1周;E组(黄芪治疗2周组):处理同D组,共2周.各组于后1次激发后6 h采血,测全血碳氧血红蛋白(C OHb)的%含量.取肺做切片,做常规HE染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),免疫组化染色选用羊抗 HO-1多克隆抗体.利用计算机图像分析测定豚鼠气道上皮HO-1阳性表达的平均吸光度.以 SAS统计软件进行方差分析.
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鼠白细胞介素12质粒对小鼠支气管哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响
目的研究鼠白细胞介素12(IL-12)基因表达(mIL-12)质粒对小鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型气道炎症及细胞因子的影响,并分析其作用机制.方法卵白蛋白(OVA)致敏建立小鼠哮喘模型.BALB/c小鼠41只,分为6组.即哮喘模型组(A组)8只:OVA致敏+OVA气雾攻击;模型对照组(B组)6只:用生理盐水代替1%OVA溶液雾化,余处理同A组;mIL-12质粒预防组(C组)8只:实验第1、3、5天各肌肉注射mIL-12质粒100μg;mIL-12质粒治疗组(D组)8只:实验第14、16、18天各肌肉注射mIL-12质粒100μg;空质粒预防组(E组)5只:实验第1、3、5天各肌肉注射空质粒100μg;空质粒治疗组(F组)6只:实验第14、16、18天各肌肉注射空质粒100μg.测定所有小鼠支气管-肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸粒细胞(EOS)个数和IL-4、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)水平.结果B组小鼠EOS个数和IL-4、IL-5、IFN-γ浓度分别为(0.01±0.03)×108/L、(24±4)pg/ml、(33±6)pg/ml、(725±59)pg/ml,C组为(0.06±0.04)×108/L、(43±13)pg/ml、(63±10)pg/ml、(626±60)pg/ml,D组为(0.11±0.12)×108/L、(38±14)pg/ml、(66±14)pg/ml、(661±40)ppg/ml,与A组[(2.97±1.20)×108/L、(122±45)pg/ml、(126±34)pg/ml、(435±49)pg/ml]比较,差异有显著性(P<0.01);C组和D组分别与E组[(1.96±0.93)×108/L、(110±24)pg/ml、(112±11)pg/ml、(464±51)pg/ml]及F组[(2.11±0.90)×108/L、(88±17)pg/ml、(107±6)pg/ml、(481±64)pg/ml]比较,差异均有显著性(P<0.01).结论mIL-12质粒可能通过调节Th1/Th2细胞平衡而抑制哮喘气道炎症.
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牛膝多糖对幼年哮喘大鼠模型气道炎症的影响
支气管哮喘(简称哮喘)的主要特点是气道高反应性、慢性嗜酸粒细胞(EOS)性肺部炎症以及气道黏液的过度分泌、Th1/Th2淋巴细胞比例和功能失调[1].牛膝多糖(ABPS)是我国传统中药牛膝根中提炼出来的有效成分,具有免疫调节作用[2].我们采用幼年SD大鼠哮喘模型,探讨ABPS对哮喘气道炎症及Th1/Th2平衡的作用及机制.
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用呼吸道合胞病毒诱导致敏小鼠建立重度支气管哮喘动物模型
呼吸道病毒感染是导致支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑及急性加重、致死的重要原因[1].我们采用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导致敏小鼠复制重度哮喘模型,旨在为建立重度哮喘动物模型提供一种较理想的方法.
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地塞米松对哮喘豚鼠肺组织G蛋白α亚族的调控研究
抗哮喘药物种类繁多并不断增加,但糖皮质激素(GC)作为临床一线用药其地位至今无法替代.GC的抗哮喘机制是复杂的,要想准确解释其平喘机制仍待时日.近来发现,许多药物通过与G蛋白藕联的受体相互作用发挥药效,我们发现哮喘豚鼠肺组织Gα亚族表达增高与其发病有关[1],GC的抗哮喘作用是否与调控G蛋白的表达有关尚少见报道.我们的实验用卵蛋白致敏复制豚鼠哮喘模型,用地塞米松(DEX)进行干预,通过测定G蛋白α亚族的表达变化,以期从信号转导的角度阐述GC的抗哮喘机制.
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黄芪对豚鼠哮喘模型核因子κB表达作用的研究
支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,多种炎症细胞及其产生的细胞因子等炎症蛋白参与了哮喘的发病机制。核因子κB(NF-κB)作为一种转录因子调节多种炎症蛋白基因的表达,从而参与了哮喘的炎症机制[1]。近来有研究发现黄芪能降低哮喘患者的气道高反应性,并能调节哮喘患者的免疫功能。本研究观察豚鼠哮喘模型NF-κB表达的特点及相关的肺功能和气道炎症程度,并观察黄芪对NF-κB表达的影响。 材料与方法选健康雄性豚鼠30只,体重200~350 g,随机分为3组,每组10只。腹腔内注射10%卵清蛋白(OVA)溶液1 ml致敏,2周后用1%OVA溶液喷雾30 s激发哮喘,对照组则喷入生理盐水30 s。正常组:喷雾生理盐水,每日1次,共1周;哮喘组:每日激发哮喘1次,共2周;治疗组:每日激发哮喘1次,每次于激发哮喘后30 min腹腔注射黄芪注射液5 g/kg,共2周。上述各组分别于后一次激发后6 h按李荣等[2]所述方法测定气道阻力。取肺做冰冻切片备做免疫组化及常规HE染色计数支气管壁中浸润的嗜酸性粒细胞(EOS)数。
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共刺激信号与支气管哮喘γδT细胞活化关系的研究
我们之前的研究表明[1,2],γδ T细胞在哮喘支气管肺泡灌洗液(BALF)中明显活化;γδ T细胞可能存在Th1/Th2模式,并表现为Th2样优势应答.为进一步阐明γδ T细胞活化的细胞和分子机制,我们探讨了单核/巨噬细胞(Mon/Mφ)与γδ T细胞间共刺激分子B7∶CD28/CTLA-4( )的改变.材料与方法 2~3月龄雄性Wistar大鼠20只,体重(200±50)g.随机分正常组和哮喘组,每组各10只.哮喘模型的建立、鉴定及标本的收集和处理按方法[1].
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支气管哮喘小鼠模型应用评价
支气管哮喘(简称哮喘)是由嗜酸粒细胞(EOS)、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,并伴有气道高反应性(AHR)、可逆性气流受限及黏液高分泌,晚期还可出现气道重塑.哮喘发病机制复杂,鉴于人体试验的局限性,目前对哮喘病因、发病机制及治疗等方面的研究很大程度上需要通过动物模型来进行.曾用于制作哮喘模型的动物很多,包括:猫、马、狗、猴、兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠等,其在反映人类哮喘方面各有优点及相应的局限性.其中小鼠模型是近年来采用多的哮喘动物模型.
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FIZZ1对α-肌动蛋白和Ⅰ型胶原在大鼠支气管哮喘模型中表达的影响
支气管哮喘(简称哮喘)患者的气道慢性炎症可导致上皮细胞损伤,成纤维细胞活化并分化为表达α-肌动蛋白(α-SMA)的肌成纤维细胞和胶原沉积,因此,α-SMA和Ⅰ型胶原是哮喘早期气道重塑中的重要指标.