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骨髓间充质干细胞对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式
本研究探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在体外对致微小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式,以便进一步了解MSC对致敏小鼠影响的可能机制.建立致敏模型后,将应用贴壁培养法体外培养的正常小鼠骨髓MSC或其培养上清液作为免疫细胞或免疫因子,致敏小鼠的淋巴细胞作为效应细胞,用植物血凝素( phytohemagglutinin,PHA)刺激淋巴细胞增殖,在体外应用MTT法检测两者的混合淋巴细胞增殖反应.结果表明,正常小鼠骨髓MSC在体外能很好地抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,同时在MSC培养上清液也能观察到类似现象,而且随着两者细胞比例或浓度比的增大,抑制作用有所加大,当两者比例为1∶1时抑制作用大(有明显的统计学意义).结论:MSC能在体外明显抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,该作用可以通过细胞与细胞(MSC和淋巴细胞)直接接触抑制,也可通过细胞与细胞的间接作用(如MSC的培养上清液与淋巴细胞)方式发挥作用.
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用呼吸道合胞病毒诱导致敏小鼠建立重度支气管哮喘动物模型
呼吸道病毒感染是导致支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑及急性加重、致死的重要原因[1].我们采用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导致敏小鼠复制重度哮喘模型,旨在为建立重度哮喘动物模型提供一种较理想的方法.
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CD+34细胞在致敏小鼠气道浸润的研究
过敏性哮喘是由多种炎性细胞和炎性介质参与的慢性气道炎症,近研究发现,抗原刺激气道后可引起骨髓中祖细胞(CD+34细胞)扩增、分化,形成成熟的炎性细胞,这些成熟炎性细胞从骨髓池释放到外周并募集到气道局部,介导了速发性和迟发性哮喘反应,由抗原引起骨髓发生的上述变化称为骨髓反应.
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泼尼松对蟑螂致敏小鼠支气管哮喘模型的作用
近年来支气管哮喘(简称哮喘)发病率逐年上升,研究发现蟑螂变应原过敏与哮喘的发病相关.糖皮质激素是临床治疗哮喘的为有效的药物.然而糖皮质激素治疗之后对机体的免疫学指标如抗体、细胞因子等的影响还不确切.为此,我们观察了泼尼松对美洲大蠊提取液致敏的哮喘小鼠预防性治疗的效果,探讨哮喘小鼠治疗后的病理和免疫学改变特点.
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雷公藤抑制致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达及GATA3活性
通过对致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达和GATA3活性的观察,探讨雷公藤内酯醇(TP)对IL-5基因转录水平的调节机制,并与地塞米松(DM)的作用比较。 材料与方法(1)动物模型建立及分组:BALB/c小鼠24只,随机平均分为4组:正常对照组,以生理盐水代替卵蛋白(OVA)致敏和激发;致敏组,以OVA致敏和激发[1];TP组,每次激发前1 h腹腔注射TP 40 μg/kg体重;DM组,每次激发前1 h腹腔注射DM 10 mg/kg体重。TP组与DM组后一次激发后24 h再给药1次。(2)原位杂交(ISH):制备脾脏T细胞涂片。IL-5寡核苷酸探针序列:5′TCT CAA AGA ACC ACA TTA CTT GTG GCT CAC 3′。随机观察200个细胞,计数杂交阳性T细胞数。(3)凝胶电泳迁移率实验(EMSA):BALB/c小鼠30只,随机分为正常对照组(5只)和致敏组(25只),致敏方法同上。Panning法[2]分离CD+4T细胞,用丝裂霉素C处理的B细胞作为抗原呈递细胞(APCs)。将CD+4T细胞分为4组:A组:正常对照组,即正常小鼠CD+4T细胞;另3组分别为将致敏小鼠CD+4T细胞随机分成的B组:刀豆蛋白A(ConA)刺激组,C组:TP组和D组:DM组。各组加入OVA至终浓度0.2 g/L、ConA至终浓度25 mg/L、1×107个APCs,相应组加入TP至终浓度10-4mol/L,DM至终浓度10-5mol/L。B组取0.5 h、1 h、2 h和4 h时相点,其余组取2 h时相点。GATA3寡核苷酸序列:P1 5′CCT CTA TCT GAT TGT TAG CA,P2 5′ TGC TAA CAA TCA GAT AGA GG,末端标记[γ-32P] ATP。EMSA反应产物经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳3 h,-70℃放射自显影8 h。相同实验重复3次。(4)凝胶电泳迁移率竞争实验:特异性竞争抑制实验组:加入100倍和200倍未标记GATA3探针;非特异性竞争抑制实验组:加入200倍非特异性的其它未标记探针序列:P1 5′ATA AAA TTT TCC AAT GTA AA,P2 5′TTT ACA TTG GAA AAT TTT AT。
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雷公藤抑制致敏小鼠T淋巴细胞活化及其白细胞介素-5mRNA表达
通过对致敏小鼠活化T淋巴细胞(CD25)与白细胞介素(IL)-5mRNA表达相关性的观察,探讨雷公藤内酯醇对T淋巴细胞活化和IL-5mRNA表达的影响,同时就雷公藤内酯醇的作用机制与氟美松进行比较。 一、材料与方法 1.动物模型建立及分组:4~6周健康BALB/c小鼠(第三军医大学动物所提供)24只,雌雄不限,体重16~20 g。随机分为4组,每组6只。(1)A组:致敏组,以卵蛋白(OVA)致敏和激发[1]建立致敏模型;(2)B组:雷公藤内酯醇组,每次激发前1 h腹腔注射雷公藤内酯醇 40 μg/kg体重;(3)C组:氟美松组,每次激发前1 h腹腔注射氟美松 10 mg/kg体重。B组与C组在后一次激发后24 h再给药一次。(4)D组:正常对照组,以生理盐水代替OVA致敏和激发。
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大补阴丸对空肠弯曲杆菌致敏小鼠的免疫调节作用
近年临床报道中医滋补肾阴的经典名方大补阴丸,在治疗系统性红斑狼疮[1]、糖尿病[2]等自身免疫疾病方面疗效肯定,且无雷公藤等药物的不良反应.肝炎也是一种自身免疫性疾病,大补阴丸对肝炎的作用至今尚无临床报道.本实验通过病理切片、细胞培养、酶联免疫吸附实验等技术观察了大补阴丸水提物对空肠弯曲杆菌CJ-S131致敏小鼠的免疫调节作用,为大补阴丸在治疗肝炎等自身免疫疾病方面的应用提供理论依据.
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芦荟多糖对卵清蛋白致敏小鼠的脱敏效果
目的:研究芦荟多糖对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的脱敏效果.方法:50只BABL/c小鼠随机分为5组,分别为正常组(A),模型组(B),小、中、高剂量组(C,D,E)组.采用OVA加Al(OH)3注射法复制小鼠OVA致敏模型,期间C,D,E组灌服不同剂量的芦荟多糖干预.24 d后检测小鼠受OVA激发后的反应、肺泡灌洗液(BALF)中总细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)数量、肺组织丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量、血清特异性IgE,BALF及淋巴细胞培养液中的IL-4,IFN-γ含量.结果:芦荟多糖能够减轻致敏小鼠受OVA激发所引起的症状,能够下调BALF及淋巴细胞培养液中的IL-4水平,提升IFN-γ,降低肺泡灌洗液(BALF)中总细胞及EOS数量,使肺组织中与炎症相关的MDA及NO浓度降低,下调血清中特异性IgE.结论:芦荟多糖能够纠正致敏小鼠体内的免疫失衡,对致敏小鼠有一定的治疗作用.
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骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内的示踪归巢实验
[目的]了解骨髓间充质干细胞在以异基因脾细胞输注致敏小鼠体内的归巢情况.[方法]正常同种异基因小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定后,体外予羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯荧光染料标志,经尾静脉注射到致敏组和非致敏组小鼠体内(每组10只),在6h、24h和48 h处死动物,分别应用冰冻切片和流式检测方法了解骨髓间充质干细胞在各个脏器的分布情况.[结果]冰冻切片和流式检测结果均表明骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内迅速和持久在脾、肝脏聚集,而非致敏动物却没有明显聚集到肝脾等脏器,而是终归巢到了骨髓.其中流式细胞仪定量结果表明:6h时致敏小鼠脾脏荧光阳性细胞为(3.78±0.66)%,与同期正常小鼠脾脏结果比较P<0.05,有统计学意义;而在48 h时致敏小鼠骨髓荧光阳性细胞为(0.43±0.35)%,同期正常小鼠骨髓为(5.40±1.58)%,两者比较P<0.05,有统计学意义.[结论]应用异基因脾细胞致敏的小鼠体内肝脾等免疫脏器明显受到致敏影响,其对骨髓间充质干细胞体内归巢的定位具有很高的趋化吸附作用,中止了骨髓间充质干细胞正常状态下向骨髓的归巢.
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小青龙加减方药理作用研究摘要
目的:研究小青龙加减方平喘作用及作用机理;方法:通过豚鼠药物引喘、豚鼠体外气管容积法、大鼠被动皮肤过敏反应PCA、DNCB所致小鼠DTH反应、对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响、角叉菜胶致足跖肿胀的影响、对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响、对小鼠棉球肉芽肿的影响、对致敏小鼠中脑单胺类神经递质含量的影响、对肥大细胞的影响、对小鼠炎症组织炎症介质、丙二醛及肝组织LPO含量的影响实验,研究小青龙加减方平喘、抗过敏、抗炎及平喘作用机理的重要参数;