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日本香川地区荷斯坦牛乳与娟姗牛乳营养成分的比较
目的 比较日本香川地区荷斯坦和娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质含量,乳过氧化物酶(LPO)和乳铁蛋白的一些基本性质.方法 以荷斯坦和娟姗牛乳为对象,经酸沉淀除酪蛋白后,通过离心,SP-Sepharose离子交换层析分离纯化得到乳过氧化物酶和乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝定量、SDS-PAGE定性、ABTS检测乳过氧化物酶活性、后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)确认分子量.结果 娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质和乳过氧化物酶含量均高于荷斯坦中乳清蛋白中的总蛋白质和乳过氧化物酶含量.娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.870 5 U/ml)高于荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.758 9 U/ml).娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为786 48.154和831 23.538 kDa,荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为777 64.841和827 65.494 kDa.结论 对于乳酪行业,当考虑养殖奶牛品种生产乳酪同时又想大限度利用需要处理的乳清蛋白和乳铁蛋白的时候,相比于荷斯坦奶牛,娟姗奶牛是更好的选择.
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消毒剂消菌灵杀菌效果的试验观察
复方消毒剂消菌灵为含溴氯异氰尿酸、十二烷基磺酸钠与大蒜提取物的粉剂,含有效氯溴(BrCl)≥质量分数18%.采用悬液定量杀菌试验,对其杀菌效果进行了检测.结果,以其含有效氯溴125 mg/L的溶液作用5 min,对悬液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭率为100%;以其含有效氯溴1000 mg/L的溶液作用60 min,对悬液中枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率亦达100%.该复方为对细菌芽孢有一定杀灭作用的消毒剂.
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"优安净"对污染的一次性使用医疗用品的消毒效果观察
"优安净"是由次氯酸钠(Na0CD与十二烷基磺酸钠配伍而成,具有广谱、高效消毒效果,兼有去污作用.我们对用优安净消毒液浸泡使用后的一次性使用医疗用品的医院现场消毒效果进行了观察.
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乙型肝炎病毒X基因酵母表达载体构建及表达
目的:为进一步探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)的功能,在真核生物酵母细胞中表达X基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法以HBV ayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增X基因,克隆到pGEM-T载体中扩增并测序鉴定,EcoRI和PstI双酶切后回收连接到酵母表达载体pGBKT-7中并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.提取酵母蛋白质,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确HBxAg是否在其中表达.结果:成功地扩增出HBx基因,测序鉴定符合Gene Bank报告序列;酶切回收的HBx基因成功地克隆入酵母表达载体pGBKT-7并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示X基因在酵母细胞中表达,表达产物在胞内存在,相对Mr为35000左右结论:成功地构建了HBxAg在酵母表达载体,并在酵母细胞中表达
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丙型肝炎病毒NS2基因酵母双杂交"饵"载体构建及表达
目的:丙型肝炎病毒NS2蛋白在病毒蛋白加工中起到自裂蛋白酶的作用,但是对人体的作用还不清楚.为探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS2的功能,在真核生物酵母细胞中表达HCVNS2基因.方法:用聚合酶链反应(PCR)的方法以HCV全长质粒pBRTM/HCV-1为模板扩增HCV NS2基因,克隆到pGEM-T载体中,双酶切后回收连接到酵母表达质粒pGBKT7中表达.提取酵母蛋白质,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Westem免疫印迹分析.结果:成功构建HCV NS2基因酵母表达载体称为pGBKT7-NS2,Western免疫印迹显示了HCV NS2在酵母细胞中表达.表达产物在胞内存在,相对分子质量23kD左右,表达量占细胞总蛋白的4%左右.结论:我们成功在酵母细胞中表达了HCV NS2蛋白.为以后研究NS2蛋白对人体的作用打下了基础.
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十二烷基磺酸钠对脱细胞生物基质物理性能的影响及戊二醛拮抗
目的:研究十二烷基磺酸钠(SDS)对脱细胞生物基质物理性能的影响,探讨减少影响解决办法,本文初步研究如何提高基质强度.方法:检测SDS洗涤前后及戊二醛交联后脱细胞生物基质的抗拉强度,观察SDS洗涤及戊二醛交联对它的影响.结果:SDS洗涤前后基质的抗拉强度发生了显著性改变,经戊二醛交联固定后,基质的抗拉强度较SDS洗涤后明显增强,但仍不如SDS洗涤前.结论:SDS对脱细胞生物基质的抗拉强度产生了显著影响.基质脱细胞用戊二醛交联固定后,抗拉力强度明显增加,证明戊二醛确实有保护作用.
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不同浓度十二烷基磺酸钠对磷酸川芎嗪透皮性质影响
[目的]考察不同浓度表面活性剂十二烷基磺酸钠对磷酸川芎嗪透皮行为的影响.[方法]以离体大鼠皮肤为透过屏障,采用体外Franz扩散池法,绘制渗透曲线,并计算渗透速率,考察不同浓度SDS对LP离体透皮影响.[结果]不同浓度SDS溶液中(0.25%,0.5%,1.0%,2.5%)磷酸川芎嗪的透皮速率分别为19.45,27.87,19.18,16.78 μg·cm-2·h-1,迟滞时间为1.32,1.27,2.10,2.69 h.[结论]SDS的浓度与LP透皮速率以及迟滞时间没有剂量相关性,这可能与热力学活性降低及离子对形成有关.
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84消毒液的多种用途
84消毒液为一种新型的化学消毒剂,其主要成份为次氯酸及十二烷基磺酸钠.具有高效、速效、广谱、元毒等优点,短时间能杀灭细菌和病毒,包括细菌的芽胞等,且稀释液性较稳定,价廉.在不同浓度的84消毒液中添加不同剂量的碳酸钠可对金属器械起到防锈作用.1:200的84消毒溶液广泛应用于器械浸泡、病区物品擦拭及空气喷雾消毒外,还有下面多种用途.
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免疫细胞和肿瘤细胞外泌体及其免疫调节作用
细胞来源和组织分布:外泌体(Exosomes,microvesicles or exovesicles)是生活的哺乳动物细胞主动向细胞外芽生释放的囊泡样膜性细胞器,直径30~1 000 nm[1-3].外泌体的质膜与细胞膜略有不同,富含胆固醇、鞘磷脂和神经节苷脂,因而耐受Triton处理但皂草甙和十二烷基磺酸钠可使之裂解.
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大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体的纯化与复性研究
目的纯化、复性大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体蛋白.方法用8 mol/L尿素缓冲液变性溶解vMIP-Ⅱ包涵体,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)进一步促溶,利用金属亲和层析和分子筛层析纯化,再利用柱层析去除SDS,纯化后透析复性;通过荧光和单核淋巴细胞趋化抑制实验检测复性蛋白的结构和抑制单核淋巴细胞趋化的活性.结果重组vMIP-Ⅱ纯化和复性后,仍具有完整的高级结构和抑制单核细胞趋化的活性.结论已获得了重组vMIP-Ⅱ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础.
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提高甲苯磺丁脲片溶出度方法的研究
目的:采用低取代羟丙基纤维素改变甲苯磺丁脲片的溶出度.方法:于甲苯磺丁脲中加入低取代羟丙基纤维素测定溶出度.结果:甲苯磺丁脲片的溶出度有很大程度提高.结论:本方法经济适用,可行性强.
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两种不同去污剂制备肺去细胞支架的对比
目的:比较离子型洗涤剂十二烷基磺酸钠(SDS)与脱氧胆酸钠针对肺去细胞支架制备的性能,寻找一种合适的肺去细胞方法以得到模拟可以促进细胞附着和分化天然细胞外基质的肺功能架构.方法:SD大鼠随机分成正常对照组、去细胞SDS组、去细胞脱氧胆酸钠组,分别取心、肺联合体,两组去细胞组均经右心室置入留置针至肺主动脉.去细胞SDS组使用肝素、Triton X-100、SDS溶液和去离子水依次灌注;去细胞脱氧胆酸钠组使用肝素、Triton X-100、脱氧胆酸钠溶液和去离子水依次灌注.各组分别采用扫描电镜观察支架结构;H-E染色、Masson三色染色观察残留细胞、细胞核成分;免疫荧光染色观察肺组织层黏连蛋白、纤维连接蛋白保留情况,并进行DNA含量测定.结果:扫描电镜显示去细胞SDS组支架肺泡结构较去细胞脱氧胆酸钠组完整;H-E染色显示去细胞SDS组肺支架未见明显细胞及细胞核成分残留,去细胞脱氧胆酸钠组可见少量细胞核成分残留;Masson染色显示去细胞SDS组弹性纤维保留优于去细胞脱氧胆酸钠组;免疫荧光显示去细胞SDS组层黏连蛋白和纤维连接蛋白结构较去细胞脱氧胆酸钠组完整,保留度较高;去细胞SDS组DNA含量为(35.28±8.20) ng/mg,明显低于去细胞脱氧胆酸钠组(52.33±7.67) ng/mg,差异有统计学意义.结论:两种去污剂均可有效清除肺内细胞成分,较好地保留细胞外基质,其中SDS溶液灌注法优于脱氧胆酸钠溶液灌注法.
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不同浓度十二烷基磺酸钠在提取甲醛固定石蜡包埋组织β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1 中的作用
目的:探索从甲醛固定、石蜡包埋(formaldehyde-fixed,paraffin-embedded,FFPE)的脑组织中提取β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)的有效方法.方法:将大鼠 FFPE 脑组织分别加入不同浓度十二烷基磺酸钠(SDS,0%,0.5%,1%,2%和4%)提取 BACE-1,新鲜大鼠腩组织作为对照组.提取的 BACE-1 蛋白量采用 Western blot 进行检测.结果:未用SDS 处理的同定组织提取不到 BACE-1,随着 SDS 浓度的逐渐升高,同定组织中提取的 BACE-1 蛋白也逐渐增加,4%SDS处理的 FFPE 组织与新鲜组织提取的 BACE-1 蛋白量没有明显差别.结论:SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的必需条件,高浓度(4%)SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的一种有效方法.
关键词: 甲醛固定 石蜡包埋 十二烷基磺酸钠 β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1 蛋白提取 -
尿微量蛋白检测及尿蛋白电泳在肾脏疾病诊断中的应用
我们应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶电泳技术来进行蛋白尿的分类,并结合尿β2-微球蛋白(β2-m),尿视黄醇结合蛋白(RBP),尿微量白蛋白及α2-巨球蛋白测定进行对照分析,探讨尿微量蛋白检测及尿蛋白电泳在肾脏疾病中的诊断价值.
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双波长紫外分光光度法测定苯扎溴铵酊的含量
苯扎溴铵酊的含量测定方法常用十二烷基硫酸钠或十二烷基磺酸钠滴定法[1,2],操作过程复杂、烦琐、误差较大。我院平时采用银量法直接滴定,但存在终点不明显、消耗标准溶液太少等缺点,对测定结果影响较大。我们应用双波长法测定苯扎溴铵酊的含量,操作简便、可靠。1 材料与方法1.1 仪器与试剂 UV2100紫外可见分光光度计(日本岛津);苯扎溴铵(上海第十七制药厂);曙红(水溶性);稀释液(无水乙醇∶水∶氨水∶溴液=40∶10∶1∶5,自制);苯扎溴铵酊(本院制剂室);其他所用试剂均为分析纯。
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白念珠菌孢子相、菌丝相胞壁提取物SDS-PAGE分析
白念珠菌是一种重要的双相性条件致病性真菌[1].在念珠菌感染的组织中,目前认为,相变是白念珠菌的毒力因子之一[2,3].Ashman等[4]认为,白念珠菌孢子相向菌丝相转变,表达于细胞表面的抗原有质和量的变化.我们采用梯度十二烷基磺酸钠-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对临床分离的6株白念珠菌孢子相和菌丝相(带芽管的孢子)胞壁提取物进行分析,比较两相间胞壁提取物中蛋白成分的差异.
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非浓缩尿蛋白SDS-琼脂糖凝胶电泳技术及临床应用
目的对尿液中各种蛋白质进行分离,用于区分尿蛋白的类型.方法应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)法进行非浓缩尿蛋白电泳,对40例已被临床确诊的肾脏疾病患者的尿液样本进行电泳分析,使尿蛋白按分子量大小进行分离.结果根据尿蛋白分子量大小可以将其区分为肾小球性、肾小管性、混合性、溢出性及生理性蛋白尿.其中肾小球性蛋白尿13例、肾小管性蛋白尿9例、混合性蛋白尿11例、溢出性蛋白尿2例、生理性蛋白尿5例.结论本法具有分离效果好,检测灵敏度和诊断符合率高,操作简便,速度快,胶片易于保存等优点.可以将尿蛋白按分子量大小进行区分,经EDC扫描后可获半定量结果,对肾脏疾病的受损部位和受损程度的判断具有较高的价值.
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SLS人体单次斑贴试验阳性对照物基准模型的建立
目的:建立十二烷基磺酸钠(SLS)人体单次斑贴试验阳性基准模型.方法:60名健康受试者使用0.01%、0.05%、0.10%、0.50%和1.00%SLS进行第一阶段皮肤单次斑贴试验,确定阳性对照物的初步合适浓度区间.然后再选取60名健康受试者根据第一阶段合适浓度范围设计浓度进行第二阶段试验,进一步确定合适浓度.结果:第一阶段的试验提示,阳性基准物的浓度在0.01%~0.05%之间,第二阶段确定0.02%SLS的1级皮肤反应人数≤5例,2级皮肤反应人数<2例,该反应率与标准中的阳性结果为接近.结论:建议以0.02%SLS作为人体单次斑贴试验的阳性对照物基准模型.
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S-40/SDS/微乳体系测定胃铋治片剂中铋含量
目的 于不同微乳体系中筛选出增敏效果佳的微乳介质测定胃铋治片剂中的铋含量,为测定药物中铋含量的佳方法提供依据和指导.方法 分别以SDS、S-40单一和复配体系配制不同的微乳液.考察各体系对分光光度法测定铋含量的增敏作用,以筛选出的增敏效果佳微乳体系为介质,测定胃铋治中铋含量.结果 10号微乳体系增敏效果佳,在10号微乳介质中测定的胃铋治片剂中的铋含量为169.5mg/g.结论 不同配方的微乳液在铋的光度分析法中增敏效果明显不同,S-40/SDS按一定比例复配所形成的微乳体系对光度法测定铋含量具有明显的增敏作用,在该体系中测定铋含量具有灵敏度高,检测下限低.抗干扰能力强等优点,可用于药物中铋含量的测定.
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采用荧光光谱法测定谷氨酸诺氟沙星氯化钠注射液中诺氟沙星的含量
目的:研究了稀土铽-诺氟沙星-十二烷基磺酸钠(SDS)体系的荧光性质,在中性缓冲溶液中,镧对此体系的荧光强度具有增强作用.方法:用常规化学方法建立此体系,对此体系进行了荧光检测,测定其荧光光谱图,并且对此体系的荧光强度进行具体分析.结果:对产生共发光效应的实验条件进行优化,在佳实验条件下,建立了体系的荧光强度和Tb3+浓度之间的线性方程,线性范围为2×10-7~1×10-5 mol/L,相关系数r2为0.9985,该实验得到了满意的结果,并对反应机理进行了初步探讨.结论:第二稀土金属镧的加入对体系的荧光强度具有增强作用,采用荧光光谱法测定谷氨酸诺氟沙星氯化钠注射液中诺氟沙星的含量得出满意的结果,该方法可作为药物制剂的含量直接分析方法.