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皮肤着色芽生菌病临床治疗分析
着色芽生菌病是一种外源性暗色真菌侵入皮肤深部组织所引起的,以疣状增生、化脓、瘢痕性挛缩为特征的慢性深部真菌病。该病是由自然界一组腐生性真菌感染所致。病原菌一般通过外伤处侵入皮肤深部,经过一定的时间由菌丝相转成酵母相硬壁孢子,其孢壁的抗原性和代谢产物的毒性作用引起炎症反应,形成慢性肉芽肿[1]。原发病灶的病原菌可通过淋巴管、组织间隙和自家接种的途径向远处播散,形成新病灶。
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不同来源阿萨希毛孢子菌菌丝相体外诱导条件的探讨
目的 探讨在不同诱导因素条件下,不同来源的阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)菌丝诱导结果的差异.方法 11株不同来源的T.asahii,选用RPMI-1640液体培养基、YPD液体培养基、吐温酵母肉汤(TYB)培养基和50%(v/v)胎牛血清,分别在15℃、25℃和37℃条件下培养,于1h、2h、3h、6h、12 h、24 h计数菌丝生成率.结果 T.asahii 15℃菌丝生成率均值为(0.15±0.42)%,25℃为(5.75±3.48)%,37℃为(33.81±15-39)%,差异有统计学意义(P值均<0.05).RPMI-1640培养基诱导菌丝生成率均值为(46.24±25.50)%,YPD液体培养基为(36.28±21.85)%,TYB培养基为(33.93±21.29)%,50%(v/v)胎牛血清为(18.60±14.58)%,组间比较有显著统计学差异(F=6.29,P=0.0013),组内比较有显著统计学差异(F=21.80,P=0.0000).随着诱导时间的延长,各菌株菌丝生成率也随之上升.结论 综合比较各诱导因素,RPMI-1640培养基、37℃诱导24h可使大多数Zasahii菌株由孢子相获得较纯的菌丝相,而菌株来源的不同也是影响诱导结果差异的重要因素之一.
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气相色谱法检测白色念珠菌细胞壁甘露糖含量
白色念珠菌粘附于宿主细胞是感染发生的必要条件,研究认为,白色念珠菌细胞壁外层的甘露聚糖是粘附作用的重要介导物[1,2].白色念珠菌在体内有孢子相与菌丝相2种形式,为了解二相性白色念珠菌的细胞壁甘露糖含量的具体差异,本文采用气相色谱法对其进行检测,方法简便快速,灵敏度高,准确可靠.现将结果报告如下.
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阴道白色念珠菌致病株与携带株两相性与毒力关系研究
目的 探讨阴道白色念珠菌致病株和携带株菌丝相和酵母相分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性以及与其毒力的关系.方法 分别采用牛奶平板和卵黄培养基法检测白色念珠菌致病株和携带株200株分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力,分别将致病产酶株的菌丝相和孢子相菌悬液(5×106CFU/ml)注射小鼠尾静脉, 1个月内观察小鼠死亡率及平均存活时间,以平均存活时间评价菌株毒力.结果 白色念珠菌致病株和携带株分泌型酸性蛋白酶检出率分别为83.3%和35.7%(P<0.01);细胞外磷脂酶阳性率分别为87.5%和39.3% (P<0.01).动物实验结果表明,白色念珠菌致病株菌丝相分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力均显著高于孢子相(P<0.01,P<0.005);注射菌丝相白色念珠菌的小鼠死亡率高于注射孢子相的小鼠(P<0.01),且平均存活期短于注射孢子相的小鼠(P<0.01).结论 分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶是白色念珠菌重要毒力因子,致病株毒力高于携带株,菌丝相毒力高于酵母相.
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阴道白假丝酵母菌二相性的酶活性和毒力的差异
目的 探讨阴道白假丝酵母菌菌丝相和酵母相的酶活性和毒力的差异.方法 收集2009年1 - 12月北京大学第一医院妇产科门诊标本,经形态学和生化学鉴定证实为白假丝酵母菌,共200株.分别用牛奶平板和卵黄培养基法检测其菌丝相和酵母相时分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力.并从中挑选24株分别用其菌丝相和酵母相感染血管内皮细胞,再以四甲基偶氮唑蓝比色法计算菌丝相和酵母相的细胞毒力.结果 酵母相和菌丝相分泌型酸性蛋白酶的活力(PA值)分别为0.681±0.105和0.641±0.096;细胞外磷脂酶的活力(PZ值)分别为0.621±0.113和0.558±0.102,差异具有统计学意义(P <0.001).酵母相和菌丝相毒力值分别为0.299±0.129和0.577±0.217且PZ值-毒力Pearson系数分别为- 0.485和-0.629,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 菌丝相分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性均高于酵母相;菌丝相毒力强于酵母相;白假丝酵母菌毒力强弱与其酶活性高低呈高度正相关.
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甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌相态转化的影响及机制研究
白假丝酵母菌(Candidaalbicans,C.albicans)俗名白色念珠菌,是一种条件致病菌,广泛存在于人的口腔、上呼吸道、皮肤、肠道及阴道黏膜,是一种正常菌群,但当机体免疫力低下或菌群失调时,C.albi-cans 即是一种条件致病菌,当发生感染时,C.albi-cans 就完成不同的菌相转化,白假丝酵母菌就酵母相(Yeastform,Y)向菌丝相(Hyphalform,H)进行转化,菌丝相酵母菌是造成感染的关键因素,有学者研究显示菌相转化与念珠菌感染之间存在明显的相关性[1],白假丝酵母菌菌相转化需要一定的物理化学剂免疫调节分子的调节才能有效的完成转化,相关物理化学条件研究较多,而对于免疫分子研究相对较少。
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白念珠菌酵母相-菌丝相形态转换机制的研究进展
白念珠菌是人体内重要的条件性致病真菌,形态多样性是其重要的生物学特征,不同形态细胞之间可相互转换.酵母相-菌丝相形态转换是白念珠菌中典型形态转换系统,与白念珠菌粘附、侵袭性等方面密切相关.宿主相关环境因素作用于白念珠菌,激活相应的信号传导通路,调控下游应答基因的表达,共同调控白念珠菌菌丝发育.结合目前关于白念珠菌形态转换的研究,认为广泛和深入的信号通路主要有:环磷酸腺苷/蛋白激酶A (cAMP/PKA)信号通路、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路、Rim101介导的pH信号通路和Tupl介导的负调控信号通路共同调控形态转换.该文将近年来国内外白念珠菌形态转换及其信号传导通路调控机制方面的进展进行综述分析.
关键词: 白念珠菌 形态转换 菌丝相 cAMP/PKA信号通路 MAPK信号通路 -
白假丝酵母形态转换相关基因及其调控途径的研究进展
白假丝酵母可在酵母相和菌丝相之间进行转换,这种形态转换对白假丝酵母的黏附、侵入和逃逸宿主免疫系统攻击的能力等都具有很大的影响.近年来,运用分子生物学方法克隆出了一系列与白假丝酵母形态转换相关的基因,并发现了两条调控其形态转换的信号传导途径.
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BDSF对白假丝酵母体外作用的研究
白假丝酵母(又称白念珠菌)是人体重要的条件致病真菌.在正常人体中,白假丝酵母是一种无害共生真菌;在免疫力低下人群中,白假丝酵母可引起假丝酵母病,轻者可导致黏膜感染,重者可发展为系统性疾病,甚至危及生命.白假丝酵母从酵母相至菌丝相的形态转变是极其重要的致病因素之一.BDSF是小分子短链脂肪酸,由Burkholderia cenocepacia分泌产生.对酵母相白假丝酵母,在BDSF≥30 μmol/L时因菌丝生长受强烈抑制,无法从酵母相向菌丝相转变.而对菌丝相白假丝酵母,当BDSF在30 μmol/L和60 μmol/L时,菌丝进一步生长并产生分支,但随菌丝分支生长,新生的分支菌丝不断转变为酵母相;当BDSF增加至120 μmol/L时,菌丝生长和分支状况几乎完全受抑制.由此可见,BDSF不仅强烈抑制菌丝生长,还可促使新生的菌丝相向酵母相转化.
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白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因差异性分析
目的 探讨白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间的差异.方法 将16株同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌(CA-1~CA-9、CA-11~CA-17)进行菌丝相与酵母相培养后,分别抽提基因组DNA,设计引物扩增ERG11基因,扩增产物分别用Acc I、Mun I、Afl Ⅱ消化,电泳后比较两相细胞RFLP图谱,同时用下游引物P2对ERG11基因扩增产物进行反向测序.结果 Acc I、Mun I、Afl Ⅱ RFLP图谱及基因测序结果均显示菌株CA-7、CA-8、CA-14、CA-16、CA-17的菌丝相与酵母相间存在差异,两相细胞ERG11基因在1547、1587、1617三位点存在差异,位点编号按照基因库中ERG11基因序列编号(登录号X13296).结论 白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间存在差异,在进行白念珠菌体外研究时,选用其菌丝相更能反映体内真实情况.
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基于PCR-LIS-SSCP的白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因比较研究
目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因PCR-LIS-SSCP图谱的比较,探讨两相细胞在DNA水平的差异.方法分别抽提16株来自同一亲本且对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因序列设计7对引物,对其进行分段PCR扩增,扩增产物经单链变性后,以非变性聚丙烯酰胺凝胶进行SSCP分析.结果16株白念珠菌菌丝相与酵母相均能扩增出目的片段,SSCP图谱显示两相细胞的ERG11基因序列存在多位点差异.结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因存在着差异.
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特比萘芬对白念珠菌菌丝相和酵母相敏感性的比较
我们采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐M27-A微量法测定白念珠菌酵母相和菌丝相的低抑菌浓度(MIC),以了解特比萘芬对酵母相和菌丝相的敏感性有无差异.
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白念珠菌孢子相、菌丝相胞壁提取物SDS-PAGE分析
白念珠菌是一种重要的双相性条件致病性真菌[1].在念珠菌感染的组织中,目前认为,相变是白念珠菌的毒力因子之一[2,3].Ashman等[4]认为,白念珠菌孢子相向菌丝相转变,表达于细胞表面的抗原有质和量的变化.我们采用梯度十二烷基磺酸钠-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对临床分离的6株白念珠菌孢子相和菌丝相(带芽管的孢子)胞壁提取物进行分析,比较两相间胞壁提取物中蛋白成分的差异.
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Ras1、Rac1、Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异
目的 研究Ras1、Rac1和Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异,探讨其在菌丝生长过程中的作用.方法 分别培养阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相,提取两组的总RNA,采用荧光定量PCR方法测定两组中Ras1、Rac1和Rho1 mRNA的相对表达量.结果 酵母相菌丝生成率(0.40%±0.53%)显著低于菌丝相(99.33% ± 0.57%,t=13.93,P<0.05).实时荧光定量PCR显示,以酵母相为对照组,将其Ras1、Rac1、Rho1基因表达量均设为1,则菌丝相的Ras1、Rac1、Rho1基因mRNA相对表达量分别为25.17±10.99、16.81±7.80、42.61±18.50,与酵母相比较,差异有统计学意义(t值分别为3.81、3.51、3.90,均P<0.05).结论 Ras1、Rac1、Rho1基因可能参与了阿萨希毛孢子菌菌丝的生长过程.
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马尔尼菲青霉总RNA提取方法的比较
马尔尼菲青霉是一种双相型真菌,在25℃表现为菌丝相,37℃为酵母相.近几年随着免疫缺陷患者逐渐增多,马尔尼菲青霉感染也逐年增多,流行区域不断扩大[1].RNA是遗传信息的携带者,提取高质量的RNA是在分子水平上进行马尔尼菲青霉致病性研究的基础.我们将Rneasy Plant Mini试剂盒、Trizol、改良的异硫氰酸胍法、RNAex试剂分别应用于马尔尼菲青霉总RNA的提取,以找出一种方便、快速的方法,为其分子生物学的研究打下良好的基础.
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白念珠菌总RNA提取的实验研究
白念珠菌是一种特殊形式的双相型真菌,其生长形态可表现为酵母样呈圆形,条件改变时可呈细长状菌丝,这种生长形态的改变对RNA提取也带来一定的难度.我们根据文献[1]建立了两种白念珠菌总RNA提取的方法,并分别提取了酵母相和菌丝相白念珠菌的总RNA,发现该方法操作简便,需时较短,RNA降解少、纯度高,产量能满足科研的需要.
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不同菌相白念珠菌对巨噬细胞凋亡的影响
目的:观察不同菌相白念珠菌诱导巨噬细胞凋亡情况,为疾病的预防和治疗提供思路.方法:用佛波醇酯刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,用酵母相、菌丝相及用胃蛋白酶抑制剂(pepstatin,PEP)预处理的白念珠菌分别作用巨噬细胞1、2、4、8 h;另设空白对照组,AnnexinV-FITC染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:酵母相、菌丝相、PEP作用组的白念珠菌分别感染巨噬细胞1、2、4、8 h的细胞凋亡率均较空白对照组升高(P<0.05~P<0.01);各作用组均随时间的延长凋亡率不断升高(P<0.01);酵母相组和菌丝相白念珠菌组不同时间细胞凋亡率均较PEP作用组明显增加(P<0.01),并且菌丝相组细胞凋亡率明显高于酵母相组(P<0.01).结论:白念珠菌可诱导巨噬细胞凋亡,其作用与其菌相及其分泌型天冬氨酸蛋白酶有关.
关键词: 念珠菌 巨噬细胞 菌丝相 分泌型天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡 -
白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列比较研究
目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较,探讨两相细胞在DNA水平的差异.方法分别抽提7株来自同一亲本且对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因编码序列设计一对引物,对ERG11基因第948位点至第1 254位点307bp的碱基序列进行PCR扩增,以PCR产物直接测序比较两相在该片段碱基序列上的差异.结果 7株白念珠菌菌丝相与酵母相在该片段的碱基序列无差异.结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因的第948位点至第1 254位点序列无差异.
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氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相体外药物敏感性差异比较
目的:以同一亲本来源的7株白念珠菌为对象,研究氟康唑对其菌丝相与酵母相抗菌活性的差异.方法:参照NCCLS M27-A方案,测定氟康唑对7株白念珠菌菌丝相与酵母相的MIC值,并比较其差异.结果:白念珠菌菌丝相与酵母相对氟康唑的敏感性不同,对菌丝相的MIC值低于酵母相.结论:氟康唑对白念珠菌菌丝相的抗菌活性强于酵母相.
关键词: 白念珠菌 酵母相 菌丝相 氟康唑 抗真菌药物敏感性试验 -
念珠菌性外阴阴道炎
念珠菌性外阴阴道炎(VVC)是一种常见多发的外阴阴道炎症性疾病,近年来呈逐年增长趋势.据国外资料发现,75%的女性一生中至少有过1次有症状性感染,其中50%以上有过2次以上的复发性感染,孕期妇女3/4以上患过1次或1次以上阴道念珠菌病.在我国29个省市53个医疗单位的29113例健康人调查中,咽、肠道、泌尿道、阴道及皮肤白念珠菌的带菌率分别占7.08%、6.6%、1.55%、4.63%及0.99%.白念珠菌占念珠菌性外阴阴道炎致病菌的85%~90%,其次为热带念珠菌,其他尚有近平滑念珠菌、星形念珠菌、光滑念珠菌及季也蒙念珠菌等,致病菌相主要为菌丝相.