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小G蛋白ARL8B是潜在的抗原发性胃低分化黏液样腺癌的药物作用靶标
目的 发现更多表达小G蛋白ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,以扩大ARL8B在抗肿瘤药物研究中的应用范围.方法 利用实时荧光定量PCR法测定一些肿瘤细胞系中的ARL8B/ARL8A的相对表达量;以ARL8A和ARL8B都表达的细胞系作对照,对新发现的只表达ARL8B的肿瘤细胞系实施siRNA降低ARL8B表达量,用CCK8法检测ARL8B表达量被降低后的细胞活力变化;用Western blot考察ARL8B表达量降低诱导肿瘤细胞凋亡的原因.结果 发现MGC-803细胞表达ARL8B而ARL8A无表达,胃癌细胞系BGC-823和MKN-45均表达ARL8A和ARL8B.ARL8B被敲低后MGC-803细胞出现了明显的凋亡,BGC-823和MKN-45细胞无明显的凋亡出现.细胞自噬水平显著提高是引起细胞凋亡的原因.结论 MGC-803细胞系来源于胃低分化黏液样腺癌患者,是新发现的表达ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,降低ARL8B表达能导致明显的细胞凋亡,提示ARL8B是抗胃低分化黏液样腺癌潜在的药物作用靶标.
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小G蛋白基因重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞实验研究
目的 研究含有小G蛋白基因Rad重组腺病毒在体外转染乳鼠心肌细胞后的转染效率及表达.方法 构建Rad腺病毒载体,分别以感染复数5、10、15和20转染体外培养的乳鼠心肌细胞,48 h后,采用荧光显微镜观察转染后荧光强度,流式细胞仪检测转染率.以感染复数为20转染后分3组:空白对照组,阴性对照组和Rad过表达组,3 d后,采用RT-PCR、Western blot检测Rad基因表达情况.结果感染复数5、10、15和20对应转染率分别为29.84%、69.69%、77.20%和84.81%.腺病毒转染3 d后,Rad过表达组心肌细胞Rad基因 mRNA和蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组显著增加(P<0.05).结论 外源性Rad基因可在乳鼠心肌细胞中稳定表达.
关键词： 单体GTP结合蛋白质类 肌细胞 心脏 转染 基因表达 -
小G蛋白Rad基因对心肌肥大的影响
目的：研究Rad基因对心肌细胞肥大的影响，为心肌肥大早期干预提供理论基础。方法针对Rad基因序列构建Rad过表达和低表达腺病毒载体，体外培养乳鼠心肌细胞，分为8组：空白对照组，Ad-GFP组，Ad-RNA干扰（RNAi）组，Ad-Rad组，肥大模型组（心肌营养素1诱导），肥大＋Ad-GFP组，肥大＋ Ad-RNAi组，肥大＋ Ad-Rad组，48 h后检测Rad、心房利钠因子（ANF）mRNA和蛋白表达水平。结果肥大模型组ANF蛋白表达较空白对照组明显升高；肥大＋Ad-Rad组ANF蛋白表达较肥大＋Ad-GFP组明显降低，肥大＋Ad-RNAi组ANF蛋白表达较肥大＋Ad-GFP组明显升高（P＜0．05）。肥大模型组Rad mRNA和蛋白表达较空白对照组明显降低；Ad-Rad组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显增加，Ad-RNAi组 Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显降低（P＜0.05）。结论 Rad基因可抑制在细胞水平心肌营养素1诱导的心肌细胞肥大反应。
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Ras1、Rac1、Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异
目的 研究Ras1、Rac1和Rho1基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相中的表达差异,探讨其在菌丝生长过程中的作用.方法 分别培养阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相,提取两组的总RNA,采用荧光定量PCR方法测定两组中Ras1、Rac1和Rho1 mRNA的相对表达量.结果 酵母相菌丝生成率(0.40％±0.53％)显著低于菌丝相(99.33％ ± 0.57％,t=13.93,P＜0.05).实时荧光定量PCR显示,以酵母相为对照组,将其Ras1、Rac1、Rho1基因表达量均设为1,则菌丝相的Ras1、Rac1、Rho1基因mRNA相对表达量分别为25.17±10.99、16.81±7.80、42.61±18.50,与酵母相比较,差异有统计学意义(t值分别为3.81、3.51、3.90,均P＜0.05).结论 Ras1、Rac1、Rho1基因可能参与了阿萨希毛孢子菌菌丝的生长过程.
