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龙胆泻肝汤氯仿提取物抑制白念珠菌VVC临床株水解酶活性
该研究探讨龙胆泻肝汤氯仿提取物(CELX)对白念珠菌VVC临床株外分泌水解酶的影响.分别采用牛奶培养基、蛋黄培养基、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)培养基对15株白念珠菌VVC临床株进行分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)、磷脂酶(PL)、脂肪酶(Lip)阳性菌株的筛选;牛奶平板法、蛋黄平板法、吐温-80平板法分别检测CELX干预后,Sap,PL与Lip的活性变化;qRT-PCR检测基因SAP1 ～7,10,PLB1 ～2,LIP3 ～6的表达量.结果可见,15株VVC临床株的Sap,PL均为阳性,11株Lip阳性菌株.随着CELX剂量的递增,与空白对照组相比,各含药培养基(牛奶培养基、蛋黄培养基、吐温-80培养基)上菌落的沉淀圈逐渐减小,当药物达256 mg·L-1时,菌落沉淀圈几乎消失,酶活力显著减弱.qRT-PCR结果显示,256mg·L-1CELX时,除SAP5,SAP6外,SAP1,SAP2,SAP3,SAP4,SAP7,SAP9,SAP10分别下调了62％,55％,62％,84％,61％,51％,68％;PLB1下调了67％;LIP3,LIP4,LIP6分别下调了51％,54％,55％.研究表明,CELX能抑制白念珠菌重要毒力因子天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶与脂肪酶的活性.
关键词： 龙胆泻肝汤氯仿提取物 白念珠菌VVC临床株 分泌型天冬氨酸蛋白酶 磷脂酶 脂肪酶 -
靶向白色假丝酵母菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的小分子干扰RNA对白色假丝酵母菌毒力影响
目的 探讨靶向白色假丝酵母菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)的小分子干扰RNA(siRNA)对白色假丝酵母菌SAP的基因表达影响,以期为RNA干扰技术抑制真菌毒力提供实验基础.方法 设计并合成SAP靶向的siRNA,用醋酸锂转染白色假丝酵母菌,试验设空白对照组、错义对照组、SAP siRNA组,采用RT-PCR测定转染后白色假丝酵母菌SAP mRNA表达水平,制备BSA培养基测定天冬氨酸蛋白酶活性及小鼠毒力实验.结果 与空白对照组、错义对照组相比,转染48 h后,siRNA组白色假丝酵母菌中SAP mRNA表达明显下调为(0.51±0.05),siRNA组天冬氨酸蛋白酶活性PA值为(0.84±0.04)均高于空白及错义对照组,小鼠30 d死亡率显著降低为20.0％.结论 化学合成的靶向SAP siRNA能够下调白色假丝酵母菌中SAP基因的表达,降低白色假丝酵母菌的毒力,该实验为进一步研究应用RNA干扰技术抗真菌治疗奠定基础.
关键词： 白色假丝酵母菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 RNA干扰 -
小鼠腹腔感染中白色念珠菌芽管及蛋白酶活性与其毒力的相关性研究
目的:探讨白色念珠菌与腹膜炎发生相关的毒力因子.方法:40株临床分离菌分别以腹腔接种方式感染小鼠进行毒力试验,以血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和α-淀粉酶(AM)活力为表示菌株毒力的指标.结果:白念菌体外测得的芽管长度分别与受染动物血清中ALT、AM含量呈正相关(rALT=0.893,rAM=0.801,P＜0.01),菌株分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)活力与血中ALT、AM水平也存在显著的正相关关系(P＜0.01),且经SAP特异抑制剂处理过的受染小鼠其ALT活性显著降低(P＜0.01).结论:白念菌芽管和蛋白酶均为其与腹膜炎发生有关的重要的毒力因子 .
关键词： 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶 毒力 -
小鼠腹腔感染中白色念珠菌芽管及蛋白酶活性与其毒力的相关性研究
目的:探讨白色念珠菌与腹膜炎发生相关的毒力因子.方法:40株临床分离菌分别以腹腔接种方式感染小鼠进行毒力试验,以血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和α-淀粉酶(AM)活力为表示菌株毒力的指标.结果:白念菌体外测得的芽管长度分别与受染动物血清中ALT、AM含量呈正相关(rALT=0.893,rAM=0.801,P<0.01),菌株分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)活力与血中ALT、AM水平也存在显著的正相关关系(P<0.01),且经SAP特异抑制剂处理过的受染小鼠其ALT活性显著降低(P<0.01).结论:白念菌芽管和蛋白酶均为其与腹膜炎发生有关的重要的毒力因素.
关键词： 白色念珠菌 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶 毒力 -
白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶研究进展
分泌型天冬氨酸蛋白酶(secreted aspartyl proteinase,SAP)是白色念珠菌的毒力因素之一,它参与白色念珠菌的黏附与侵袭,在白色念珠菌致病过程中发挥了重要作用.目前对于SAP的研究主要集中在其结构、理化性质、基因调控、抑制因素等方面,也有涉及其与相关口腔黏膜病的关系.本文就近年来有关SAP的研究进展做一综述.
关键词： 白色念珠菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 -
分泌型天冬氨酸蛋白酶—抗真菌药物作用的新靶点
近年来,随着临床上致病真菌耐药性的日趋严重,寻找具全新作用机制的新型先导化合物成为抗真菌药物研究的重要方向.大量实验证明,分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)是白色念珠菌致病的重要因素,将成为一个极具前景的抗真菌药物作用新靶点.该文综述了Sap的生物学性质与功能、催化反应机制、三维结构及抑制剂等方面的研究进展.
关键词： 分泌型天冬氨酸蛋白酶 抗真菌药靶 结构与功能 抑制剂 -
口腔白念珠菌3种致病相关分泌型水解酶检测方法的建立及应用
目的：了解口腔白念珠菌3种致病相关分泌型水解酶的体外表达水平。方法分别采用牛血清白蛋白平板、卵黄琼脂平板和三丁酸甘油酯平板检测88株临床分离的口腔白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）、磷脂酶（PL）和脂肪酶（Lip）的活性。结果88株白念珠菌中有70株（79.5%）高表达SAP，有64株（72.7%）高表达PL，仅有1株（1.2%）高表达Lip，有67株（76.1%）中等表达Lip。SAP和PL的表达呈正相关（r =0.221，P<0.05），Lip与SAP、PL均无相关性（r值分别为0.085、0.109，P值分别为0.432、0.311）。结论大部分口腔白念珠菌高表达SAP和PL，中等表达Lip。分泌型水解酶是口腔白念珠菌主要的毒力因子之一。
关键词： 白念珠菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 磷脂酶 脂肪酶 -
抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展
目的 综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展.方法 本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的新进展.结果 β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是目前研究为集中的抗真菌药靶,其抑制剂显示了良好的新药开发前景.结论 优化现有药物化学结构和发现全新作用机制的先导化合物,对研发新一代抗真菌药物具有重要意义.
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不同菌相白念珠菌对巨噬细胞凋亡的影响
目的:观察不同菌相白念珠菌诱导巨噬细胞凋亡情况,为疾病的预防和治疗提供思路.方法:用佛波醇酯刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,用酵母相、菌丝相及用胃蛋白酶抑制剂(pepstatin,PEP)预处理的白念珠菌分别作用巨噬细胞1、2、4、8 h;另设空白对照组,AnnexinV-FITC染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:酵母相、菌丝相、PEP作用组的白念珠菌分别感染巨噬细胞1、2、4、8 h的细胞凋亡率均较空白对照组升高(P<0.05~P<0.01);各作用组均随时间的延长凋亡率不断升高(P<0.01);酵母相组和菌丝相白念珠菌组不同时间细胞凋亡率均较PEP作用组明显增加(P<0.01),并且菌丝相组细胞凋亡率明显高于酵母相组(P<0.01).结论:白念珠菌可诱导巨噬细胞凋亡,其作用与其菌相及其分泌型天冬氨酸蛋白酶有关.
关键词： 念珠菌 巨噬细胞 菌丝相 分泌型天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡 -
不同来源白念珠菌感染小鼠前后胞外水解酶活力差异
目的 了解白念珠菌进入小鼠宿主前后其分泌胞外水解酶能力是否改变.方法 挑选分泌型天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶、脂肪酶活力无差异的艾滋病、外阴阴道念珠病病患来源和健康人来源白念珠菌,尾静脉注射感染小鼠,分离发病死亡小鼠肾脏菌株,比较感染小鼠前后菌株胞外水解酶活力差异.结果 不同来源菌株感染的小鼠28 d内死亡速率差异显著(χ2=82.5,P<0.05),从高到低依次为艾滋病、外阴阴道念珠病、健康人来源组;各来源菌株感染小鼠后肾脏分离株分泌型天冬氨酸蛋白酶表达水平皆高于感染小鼠前(F=789,P<0.05),不同来源区别显著(F=496,P<0.05),从高到低依次为艾滋病、外阴阴道念珠病、健康人来源;感染小鼠前均未曾测得磷脂酶活力的各来源菌株中,在感染小鼠后仅艾滋病、外阴阴道念珠病来源组小鼠肾脏分离株可测得磷脂酶活力,但艾滋病、外阴阴道念珠病来源两组间感染小鼠后肾脏分离株磷脂酶活力无显著差异(F=254,P>0.05);各来源白念珠菌感染小鼠前后均未测得脂肪酶活力.结论 在宿主体内白念珠菌表达天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶能力相较于体外有增强;在不同宿主环境状态下,白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶和磷脂酶的潜在表达能力有差异,即宿主免疫状态越弱时,白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶潜在表达能力越强.
关键词： 白念珠菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 磷脂酶 脂肪酶 小鼠模型 -
白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
目的 制备白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶Sap2多克隆抗体,并对其进行鉴定.方法 提取白假丝酵母菌基因组DNA为模板,经聚合酶链反应(PCR)获取SAP2目的基因;双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),构建pMAL-c2x/SAP2重组质粒;在大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达出可溶性的融合蛋白;用可溶性Sap2免疫小鼠制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清效价,亲和层析法纯化抗血清后,利用Western免疫印迹(Western Blot)检测抗体特异性.结果 该研究成功制备了抗Sap2多克隆抗体,抗体效价＞1∶51 200;Western Blot检测结果表明,该抗体可特异性识别Sap2蛋白.结论 纯化后的Sap2作为抗原免疫小鼠,有较好的抗原性和免疫原性,可成功制备多克隆抗体,并具有高特异性,为快速检测侵袭性白假丝酵母菌感染奠定了基础.
关键词： 白假丝酵母菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 多克隆抗体 抗原 抗体 -
白假丝酵母菌对氟康唑的敏感性及与其毒力的相关性
目的 观察白假丝酵母菌对氟康唑的敏感性,并探讨其敏感性与毒力的相关性.方法 对昆明医学院第二附属医院临床分离鉴定为白假丝酵母菌的124株菌株,根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的M27-A方案进行氟康唑药物敏感实验;并测定白假丝酵母菌氟康唑敏感组和耐药组的磷脂酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶的阳性率及活力.结果 124株白假丝酵母菌中68.55%对氟康唑敏感;白假丝酵母菌氟康唑敏感株和耐药株磷脂酶阳性率分别为26.67%和66.67%;二者分泌型天冬氨酸蛋白酶阳性率分别为33.33%和73.33%,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 昆明医学院第二附属医院院内白假丝酵母菌中,有68.55%菌株对氟康唑敏感;白假丝酵母菌耐药株的磷脂酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶的阳性率及活力均明显高于敏感株,可认为白假丝酵母菌耐药株的毒力较敏感株强.
关键词： 白假丝酵母菌 氟康唑 药物敏感试验 磷脂酶 分泌型天冬氨酸蛋白酶 -
结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌毒力测定
目的了解结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌芽管生成长度和分泌型天冬氨酸蛋白酶活性.方法采用病例对照方法对病例组30株和健康组4株白念珠菌芽管生成长度和分泌型天冬氨酸蛋白酶活性进行测定.结果病例组菌株芽管长度为(8.425±1.513)μm,显著高于健康组的(6.495±0.375)μm(P＜0.05);病例组分泌型酸性蛋白酶活性Pa值为0.490±0.053,低于健康组的0.610±0.056(P＜0.01).白念珠菌生成的芽管长度与其分泌的酸性蛋白酶活性Pa值呈负性相关(r=-0.874,P＜0.01).结论与健康人相比,结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌毒力较强,有更强的潜在致病力.
关键词： 结缔组织病 白念珠菌 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶
