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医用微生态制剂分离菌株对白假丝酵母菌芽管形成的抑制作用
目的:研究市售医用微生态制剂分离的单菌株对白假丝酵母菌芽管形成的影响.方法:分离市售益生菌产品单菌株10株,采用结晶紫芽管染色法,通过计算出芽率检测各益生菌分离菌株培养上清,活菌体和热灭活菌体对白假丝酵母菌的出芽抑制.结果:五种微生态制剂单菌的中性培养上清对白假丝酵母菌的芽管生成均具有显著的抑制作用(P＜0.01);长双歧杆菌1,嗜酸乳杆菌及两株芽孢杆菌的活菌可以抑制出芽;热灭活菌体无法抑制白假丝酵母菌的出芽.结论:市售医用微生态制剂具备抑制白假丝酵母菌出芽的抑菌效果.
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白念珠菌MAb03.2C1-C2特异性验证及临床研究
目的 进一步验证抗白念珠菌芽管单克隆抗体MAb03.2C1-C2(MAb)的特异性及在临床中的应用价值,为今后的实验研究和应用性研究打下基础.方法 用白念珠菌标准株,重庆、九江两地不同地域中临床分离的白念珠菌、非白念念珠菌、常见的酵母菌和实验室保存的金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌做抗原包被,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IIF)方法,对单抗MAb03.2C1-C2特异性进行分析.取临床口腔及阴道念珠菌病患者真菌涂片菌丝阳性的标本,MAb03.2C1-C2作为I抗,用IIF方法检测.结果 200例被检临床病例中,84例口腔念珠菌病和51例阴道念珠菌病真菌涂片IIF试验阳性的标本中,终鉴定均为白念珠菌.38例口腔念珠菌病和27例阴道念珠菌病中标本终鉴定为非白念念珠菌或新型隐球菌.MAb03.2C1-C2仅与白念珠菌芽管或菌丝特异性地结合,与白念珠菌的孢子及其他念珠菌种的假菌丝和孢子均不发生结合,也不与金黄色葡萄球菌发生反应.61例标本8种临床分离的非白念念珠菌的孢子和菌丝不能特异性地与单抗结合;分离的4例新型隐球菌及金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌均不能与该单抗相结合.结论 进一步证实了MAb03.2C1-C2对白念珠菌芽管高度专一的特异性,并可用于口腔念珠菌病及阴道念珠菌病真菌涂片中自念珠菌的检测.
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小鼠腹腔感染中白色念珠菌芽管及蛋白酶活性与其毒力的相关性研究
目的:探讨白色念珠菌与腹膜炎发生相关的毒力因子.方法:40株临床分离菌分别以腹腔接种方式感染小鼠进行毒力试验,以血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和α-淀粉酶(AM)活力为表示菌株毒力的指标.结果:白念菌体外测得的芽管长度分别与受染动物血清中ALT、AM含量呈正相关(rALT=0.893,rAM=0.801,P＜0.01),菌株分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)活力与血中ALT、AM水平也存在显著的正相关关系(P＜0.01),且经SAP特异抑制剂处理过的受染小鼠其ALT活性显著降低(P＜0.01).结论:白念菌芽管和蛋白酶均为其与腹膜炎发生有关的重要的毒力因子 .
关键词： 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶 毒力 -
小鼠腹腔感染中白色念珠菌芽管及蛋白酶活性与其毒力的相关性研究
目的:探讨白色念珠菌与腹膜炎发生相关的毒力因子.方法:40株临床分离菌分别以腹腔接种方式感染小鼠进行毒力试验,以血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和α-淀粉酶(AM)活力为表示菌株毒力的指标.结果:白念菌体外测得的芽管长度分别与受染动物血清中ALT、AM含量呈正相关(rALT=0.893,rAM=0.801,P<0.01),菌株分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)活力与血中ALT、AM水平也存在显著的正相关关系(P<0.01),且经SAP特异抑制剂处理过的受染小鼠其ALT活性显著降低(P<0.01).结论:白念菌芽管和蛋白酶均为其与腹膜炎发生有关的重要的毒力因素.
关键词： 白色念珠菌 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶 毒力 -
白念珠菌ATCC-90028菌丝相的诱导
目的在不同培养条件下,观察白念珠菌芽管形成率.方法在3种不同培养基中,分别进行不同浓度的孢子振荡培养(pH 7.35,37 ℃),诱导白念珠菌芽管的形成.结果 RPMI1640、DMEM培养液中孢子密度为5×106/L时,芽管形成率高(大于95%).结论优化培养条件以提高白念珠菌芽管形成率.
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液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定
芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验,传统的芽管检测的试剂多为动物血清.我们研制了一种液体染色培养基,用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子,临床应用效果良好,报道如下.
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白色念珠菌菌丝壁蛋白1的研究进展
此文简述了条件致病菌白色念珠菌的菌丝壁蛋白1(Hwp1)的结构特征、表达部位、其作为哺乳动物转谷氨酰胺酶底物的特点、黏附的二阶段模型、在白色念珠菌病发病中的作用、形成生物被膜时所扮演的角色和对白色念珠菌病诊断及治疗的展望.
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大蒜素对体外白色念珠菌生物活性影响的研究
目的:探讨大蒜素在体外对白色念珠菌生物活性的影响.方法:采用NCCLS M27-A2酵母菌微量稀释法测定大蒜素对白色念珠菌的小抑菌浓度(MIC),采用芽管生成试验观察不同浓度的大蒜素对白色念珠菌芽管的抑制作用,采用MTT法检测大蒜素对白色念珠菌生物膜不同形成阶段的作用及大蒜素预先包被对其生物膜形成的影响.结果:大蒜素对白色念珠菌的MIC值为12.5 μg/mL,能够有效地抑制白色念珠菌芽管的生成,且在白色念珠菌生物膜形成的早期阶段发挥有效的抑制作用.结论:大蒜素在体外能够有效抑制白色念珠菌的生物活性.
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不同培养条件对白念珠菌芽管形成的影响
时,随着菌体浓度的增加,出芽率反而下降.结论:优化培养条件可获得较纯的芽管,结晶紫染色法可精确定量检测芽管形成率.
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白色念珠菌芽管的诱导培养及定量检测
目的:比较和优化白色念珠菌芽管诱导培养的条件,定量检测白色念珠菌芽管形成的情况.方法:采用结晶紫芽管染色法,对不同血清浓度,菌体浓度,孵育时长及孵育温度下的芽管形成进行定量检测,通过计算出芽率判断芽管诱导效率.结果:在浓度为50%(v/v)的血清中,白色念珠菌菌体浓度为5×106 cfu/ml时,于37℃孵育2 h,出芽率及芽管纯度较好.结论:结晶紫法可精确定量检测芽管形成,诱导条件优化后可使白色念珠菌形成较多较纯的芽管.
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四糖小培养在酵母样真菌鉴定中的应用
目的:探讨四糖小培养在酵母样真菌检测中的应用.方法:采用四糖发酵、玉米-吐温琼脂小培养、芽管生成实验,对本院1996～1997 2 a内临床发现的202例酵母样真菌进行鉴定.结果:白色念珠菌感染占65%(含类星形念珠菌3%),热带念珠菌占17%,近平滑念珠菌占5%,少见菌种及酵母菌占13%.从标本来源看,呼吸道标本占56.4%,泌尿道标本占19.0%,外伤标本占12.3%,消化道标本占8.4%,血液标本占2.9%,骨髓及脑积液标本各占0.5%.结论:检测结果和临床相符,四糖小培养法有较高的推广价值.
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吐温-80对白色念珠菌芽管形成作用的观察
目的 观察吐温-80在3种不同的白色念珠菌芽管诱导液(RPMI1640培养基、新生牛血清、含10％新生牛血清的RPMI1640培养基)中对芽管形成率的影响,为临床进行体外芽管形成试验提供一定的参考资料.方法 采用诱导液振荡恒温培养法.结果 3种不同的芽管诱导液分别加入10μL、100 μL吐温-80中,RPMI1640培养基中芽管形成率分别为41％、71％,差异有统计学意义(x2＝18.26,P＜0.05),两个试验组与对照组的差异均有统计学意义(x2地=15.34,P低＜0.05；x2地=61.54,P高＜0.05).新生牛血清中形成率分别为32％、35％,差异无统计学意义(x2=0.20,P＞0.05),含10％新生牛血清的RPMI1640培养基中形成率分别为56％、82％,差异有统计学意义(x2＝15.80,P＜0.05)；其中加入10μL吐温-80的RPMI1640培养基及含10％新生牛血清的RPMI1640培养基与无吐温对照组的芽管形成率差异有统计学意义(P＜0.05),新生牛血清与无吐温对照组的芽管形成率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在RPMI1640培养基、含10％新生牛血清的RPMI1640培养基中加入1％和10％的吐温-80均可提高白色念珠菌的芽管形成率,吐温-80浓度为10％时效果为显著.
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单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究
目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗Mab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性.方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及Western Blotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量.体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况.不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析.取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同.结果体外诱导30 min后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原.体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同.靶抗原表位可能位于N-糖链上.结论Mab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程.靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义.
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单抗Mab03.2C1C2影响白念珠菌芽管形成及粘附作用的实验研究
目的观察抗白念珠菌芽管单抗Mab03.2C1C2在体外对白念珠菌感染的保护性作用.方法将不同浓度的Mab03.2C1C2分别与白念珠菌孢子悬液、白念珠菌孢子和人口腔粘膜上皮细胞混合液、白念珠菌孢子和胎儿脐静脉内皮细胞混合液共同孵育,观察Mab03.2C1C2对白念珠菌芽管生成的抑制作用及其对白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞粘附的抑制作用.结果Mab03.2C1C2能显著降低白念珠菌芽管生成率及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与该单抗的浓度成正比.结论Mab03.2C1C2在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,通过抑制白念珠菌芽管的形成而抑制白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞的粘附,降低白念珠菌的侵袭力.
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抗白念珠菌芽管单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备抗白念珠菌芽管的单克隆抗体mAb03 2C1 C2, 并对其特性进行分析, 以探讨其应用于实验室检测的可行性.方法:利用杂交瘤技术制备分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原mAb的杂交瘤细胞株, 对mAb的Ig亚类进行鉴定.用间接免疫荧光(IIF)法对mAb的抗体活性及特异性进行测定.在白念珠菌芽管形成条件下, 加入mAb, 观察其对白念珠菌芽管诱导的抑制及白念珠菌对上皮细胞、 内皮细胞黏附的抑制.复苏冻存的杂交瘤细胞株, 分析其持续分泌mAb的能力.结果:获得1株mAb03 2C1 C2, 其Ig亚类为IgG1.该mAb仅与白念珠菌芽管特异性结合, 并能显著降低白念珠菌芽管的生成率以及在芽管形成条件下对上皮细胞、 内皮细胞的黏附, 其抑制作用与该mAb的浓度呈正比.结论:制备的mAb03 2C1 C2抗体效价高, 在体外能抑制白念珠菌芽管的形成, 降低白念珠菌的侵袭力.而且其对白念珠菌芽管具有高度的特异性, 可用于白念珠菌和都柏林念珠菌的快速鉴别.
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抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及临床初步应用研究
目的 分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性及其应用于实验室检测的可行性.方法 用临床分离白念珠菌、致病非白念的念珠菌的孢子、菌丝及常见的酵母菌、细菌做抗原包被,用间接免疫荧光(ⅡF)方法,对单抗特异性进行分析.取临床口腔念珠菌病患者的真菌涂片菌丝阳性的标本,用IIF方法检测.结果 MAb03.2C1-C2仅与白念珠菌芽管或菌丝特异性地结合,与白念珠菌的孢子不发生结合.13种非白念的念珠菌孢子和菌丝、新型隐球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均不能与该单抗相结合.59例口腔念珠菌病真菌涂片ⅡF试验阳性的标本终鉴定为白念珠菌(100%).结论 MAb03.2C1-C2对白念珠菌芽管有高度的特异性,并可用于口腔念珠菌病真菌涂片中白念珠菌的早期诊断.
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结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌毒力测定
目的了解结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌芽管生成长度和分泌型天冬氨酸蛋白酶活性.方法采用病例对照方法对病例组30株和健康组4株白念珠菌芽管生成长度和分泌型天冬氨酸蛋白酶活性进行测定.结果病例组菌株芽管长度为(8.425±1.513)μm,显著高于健康组的(6.495±0.375)μm(P＜0.05);病例组分泌型酸性蛋白酶活性Pa值为0.490±0.053,低于健康组的0.610±0.056(P＜0.01).白念珠菌生成的芽管长度与其分泌的酸性蛋白酶活性Pa值呈负性相关(r=-0.874,P＜0.01).结论与健康人相比,结缔组织病患者咽部定植的白念珠菌毒力较强,有更强的潜在致病力.
关键词： 结缔组织病 白念珠菌 芽管 分泌型天冬氨酸蛋白酶 -
抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其对血清芽管诱导率的影响
目的制备并鉴定抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株,观察该单抗对白念珠菌菌相转换的影响.方法白念珠菌ATCC-90028标准株带芽管孢子做抗原,运用细胞融合技术,制备抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,并鉴定.将该单抗参与白念珠菌芽管血清诱导,对比其芽管诱导率与血清芽管诱导率.结果建立1株持续分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株McAb03.2C1-C2.其小鼠腹水单克隆抗体效价达1:25 600;抗体重链属IgG1亚类,轻链属λ型;证实McAb03.2C1-C2的靶位是位于白念珠菌芽管胞壁外膜上分子量为156kD的抗原成分.间接免疫荧光(IIF)可见单抗能与白念珠菌芽管特异性地结合,与白念珠菌的孢子相不发生反应.单抗能明显降低芽管诱导诱导率.结论本研究建立的McAb03.2C1-C2对白念珠菌致病相-芽管有高度的特异性,为早期、快速地诊断系统性白念珠菌感染提供了新的前景.McAb03.2C1-C2对菌相转换有明显的抑制作用,可能在抗白念珠菌系统性感染中起保护性作用.
