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酸浆种子蛋白提取方法的比较研究
目的:建立适用于酸浆种子的SDS-PAGE和2-D PAGE蛋白样品提取方法.方法:比较直接提取法、TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法、改良饱和酚法等7种提取方法所获酸浆种子总蛋白含量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异.结果:HEPES buffer直接提取法提取蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高;PVP buffer和Lysis buffer A直接提取法次之.但杂质较多;TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法和改良的饱和酚法差别不大,蛋白纯度较高,但提取效率低,谱带数目少;此外,Lysis buffer A法、丙酮法和酚法易产生高丰度蛋白的干扰.结论:直接提取法中的HEPES buffer法好,优于丙酮法、酚法和其它直接提取法.
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双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法
目的：比较两种破碎方法提取的蛋白质样品在双向电泳（2-DE）中的分离效果。方法用超声破碎和玻璃珠振荡破碎方法分别制备革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织的蛋白抽提样品，通过2-DE比较两种制样方法的实际效果。结果获得了革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织在两种制样条件下的2-DE图。结论通过对比不同样品的电泳结果发现，玻璃珠振荡破碎法制样背景更低，更有利于后续的图像分析。
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两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双向电泳图谱比较
目的:比较尿素/CHAPS和尿素/硫脲/CHAPS/SB3-10两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双向电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）图谱的差异。方法：大鼠脊髓经三氯醋酸/丙酮沉淀蛋白后，分别用尿素/CHAPS和尿素/硫脲/CHAPS/SB3-10两种不同的溶液体系提取蛋白。以固相pH梯度（IPG）等电聚焦为第一向，SDS-PAGE水平电泳为第二向进行蛋白质2-DE。图像分析软件ImageMaster 2D Elite 3.01分析蛋白质2-DE图谱。结果：两种蛋白提取溶液分别获得1 059和1 023个蛋白（亚基）斑点，其中790个蛋白在两张图谱中重叠，其余269和233个蛋白点为两种体系各自所特有。两种提取方法共获得1 292个蛋白斑点。结论：综合使用不同蛋白提取方法有助于提高组织蛋白2-DE图谱的完整性。
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几种不同提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳结果的影响
目的 比较几种不同的提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳图谱的影响.方法 采用反复冻融裂解法、超声加冰浴裂解法、室温振摇及试剂盒纯化法提取Hela细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE).以7 cm pH 3-10NL固相pH梯度胶条做一向等电聚焦,上样量为300 μg,SDS-PAGE做二向垂直电泳,改进的胶体考马斯亮蓝染色,ImageMaster 2D Platinum软件分析电泳图谱.结果 反复冻融裂解法得到的2-DE图谱条纹很多,蛋白点数较少(400±);超声加冰浴裂解和室温振摇法得到的2-DE图谱横向条纹明显减少,蛋白点数明显增加(分别为700±和800±);进一步用试剂盒纯化法得到的2-DE图谱基本上没有蛋白拖尾现象,且加Destreak试剂后蛋白点数有所增加(由800±→900±),但纯化的同时有低丰度蛋白的丢失.结论 超声加冰浴裂解和室温振摇法处理细胞,可得到条纹较少、蛋白点数较多较全的2-DE图谱;进一步用蛋白纯化试剂盒和Destreak试剂纯化样品能更好地解决碱性端的横向拖尾,得到较多的蛋白点.
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三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取
目的 探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率.方法 采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比.结果 三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响.结论 三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究.
关键词： 三氯醋酸-丙酮沉淀法 骨组织 蛋白提取 -
突发小牛血清去蛋白注射液过敏反应的急救与护理
小牛血清去蛋白注射液为小牛血清去蛋白提取、精制而成,内含多种游离氨基酸和肽,是一种淡黄色的澄明液体.适应症:1)改善脑部血液循环障碍和营养障碍性疾病(缺血性损害、颅脑外伤)所引起的神经功能缺损.
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不同浓度十二烷基磺酸钠在提取甲醛固定石蜡包埋组织β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1 中的作用
目的:探索从甲醛固定、石蜡包埋(formaldehyde-fixed,paraffin-embedded,FFPE)的脑组织中提取β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)的有效方法.方法:将大鼠 FFPE 脑组织分别加入不同浓度十二烷基磺酸钠(SDS,0%,0.5%,1%,2%和4%)提取 BACE-1,新鲜大鼠腩组织作为对照组.提取的 BACE-1 蛋白量采用 Western blot 进行检测.结果:未用SDS 处理的同定组织提取不到 BACE-1,随着 SDS 浓度的逐渐升高,同定组织中提取的 BACE-1 蛋白也逐渐增加,4%SDS处理的 FFPE 组织与新鲜组织提取的 BACE-1 蛋白量没有明显差别.结论:SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的必需条件,高浓度(4%)SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的一种有效方法.
关键词： 甲醛固定 石蜡包埋 十二烷基磺酸钠 β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1 蛋白提取 -
温莪术蛋白双向电泳技术的建立
目的:建立温莪术的双向电泳技术(2 -DE)体系.方法:采用TCA/丙酮沉降法提取蛋白,并用超速离心去除杂质.采用固相pH胶条在IPGphor TM III等电聚焦系统上进行等电聚焦,采用Bio-Rad电泳仪进行SDS -PAGE电泳,以银染法染色.结果:得到了上百个点的双向电泳图谱.结论:本研究成功建立了温莪术蛋白双向电泳技术体系.
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蝉花蛋白提取方法比较
目的:比较不同方法所提蝉花蛋白的浓度、数量和体外抗肿瘤活性,筛选适蝉花蛋白提取方法.方法:采用六种方法提取蝉花中的总蛋白质,分别为Tris-HCl/饱和酚法(A法)、TCA/丙酮沉淀法(B法)、两步法(C法)、蜗牛酶酶解法(D法)、Tris-HC1提取法(E法)、磷酸盐缓冲液(PBS)提取法(F法),通过蛋白质浓度检测、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及体外抗人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤活性检测,比较不同提取方法对蛋白提取效果的影响.结果:从提取浓度来看,A法优;从SDS-PAGE结果看,A法和B法即蛋白质沉淀法效果较好,条带丰度好且较清晰,C法条带丰度较好,但较模糊;从蛋白体外抗肿瘤活性结果看,C法、E法、F法的蛋白活性较高.结论:方法A、B、C均适用于蝉花总蛋白的提取,但方法A、B在制备过程中无法保持蝉花蛋白的生物活性,而方法C即两步法提取的蝉花蛋白浓度较高、种类较多,体外抗MCF-7肿瘤活性也较强,为蝉花蛋白提取适方法.
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兔椎间盘软骨终板总蛋白提取方法的改良
目的:探讨快速有效的椎间盘软骨终板组织总蛋白提取方法.方法:采用一般法、外加超声法及液氮研磨法提取兔椎间盘软骨终板组织的总蛋白,并用BCA法测蛋白浓度,再用蛋白印迹检测软骨终板组织中目的蛋白1(65 kDa)、目的蛋白2(30 kDa)及β-actin(42 kDa)的表达.结果:提取107个兔椎间盘软骨终板组织,其中一般法17个,其浓度为(0.911±0.211)mg/mL；外加超声法14个,其浓度为(2.021±0.258)mg/mL；液氮研磨法76个,其浓度为(3.121±0.248) mg/mL,经统计分析,任何两种方法间蛋白浓度差异有统计学意义,液氮研磨法所得蛋白浓度高;且液氮研磨法所得的总蛋白经蛋白印迹得到目的蛋白-1、目的蛋白-2及β-actin的清晰条带.结论:液氮研磨法可以作为少量软骨组织蛋白提取的一种理想方法,可以在一般实验室中展开,进而可在蛋白质水平上进行相关功能的研究.
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神经再生条件液中相对分子质量为22万的蛋白提取与鉴定
目的 了解神经再生条件液(never regeneration conditioned fluid,NRCF)中蛋白质成分组成及相对分子质量为220×103的蛋白带中是否存在一类新的尚未知的神经活性因子.方法 新西兰大白兔25只,体重1.8～2.5 kg,取坐骨神经建立神经再生室模型.术后1周采集NRCF,采用凝胶过滤法分离NRCF中蛋白质,主要分离相对分子质量为220×103的蛋白带,应用自然聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)法检测其相对分子质量.并对取得的相对分子质量为220×103(a峰)和(20～40)×103(c峰)的蛋白带,分别应用已知的神经活性因子抗体:抗神经生长因子(nerve growth factor, NGF)抗体、抗胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor, GDNF)抗体、抗脑源神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)抗体、抗神经营养素3(neurotrophin 3,NT-3)抗体、抗NT-4抗体、抗睫状神经营养因子(ciliang neurotrophic factor,CNTF)抗体,采用Western blot免疫印迹法和ELISA检测,观察抗原抗体反应.结果 经凝胶过滤法分离的NRCF蛋白质,多集中在相对分子质量为(20～40)×103和220×103.相对分子质量为(20～40)×103蛋白带中神经营养因子与抗NGF、抗BDNF、抗NT-3、抗CNTF等抗体反应,相对分子质量为220×103的蛋白带所含神经营养因子仅与抗NT-4抗体反应.结论 NRCF中相对分子质量为220×103的蛋白带仅与抗NT-4抗体反应,且生物活性远强于NT-4,该蛋白带中可能存在一类新的神经活性因子.
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不同提取方法对小鼠海马AD相关蛋白电泳的影响
目的:探索不同提取方法对小鼠海马AD相关蛋白电泳结果的影响,为更准确地研究不同干预条件下AD小鼠模型中海马AD相关蛋白表达量的变化提供研究基础.方法:分别采用新鲜组织试剂盒提取法、新鲜组织超声波破碎法、速冻组织试剂盒提取法和速冻组织研磨法提取C57BL/6小鼠海马组织蛋白,然后利用SDS-PAGE电泳技术进行蛋白分离,考马斯亮蓝染色观察不同提取方法中蛋白条带的分布和数量,并进一步通过Western Blot分析不同提取方法对脑组织特异性蛋白免疫印迹结果的影响.结果:四种提取方法均能有效提取脑组织蛋白,其中新鲜组织超声法提取的海马组织蛋白总量高.考马斯亮蓝染色结果显示:新鲜组织超声法提取的海马组织蛋白条带为清晰,条带数量多,但Western Blot分析结果显示:p-Tau(S396)通过新鲜组织试剂盒提取法获得的蛋白条带丰度高,而Neurofilament-L通过新鲜组织超声波破碎法和速冻组织试剂盒法所获得的蛋白条带丰度高,其他AD相关蛋白采用速冻组织研磨法均可获得较高丰度的特异性蛋白条带.结论:不同蛋白提取方法对不同脑组织蛋白的提取效率存在明显差异,速冻组织研磨法可高效提取大部分小鼠海马AD相关蛋白.
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研磨珠均质仪提取增生性瘢痕组织蛋白质的方法
目的 利用研磨珠均质仪,从临床增生性瘢痕组织样本中充分提取蛋白质.方法 临床收集烧伤后增生性瘢痕组织样本,通过玻璃匀浆器、研磨珠均质仪等方法,提取样本总蛋白,比较提取后残渣,BCA测定总蛋白浓度,蛋白凝胶电泳考马斯亮蓝染色观察蛋白质条带完整性,和western blot比较前列腺素D合成酶的含量(PTGDS).结果 玻璃匀浆器与研磨珠均质仪联合方法残渣呈絮状均匀,获得蛋白质量大,差异具有统计学意义(P<0.05),蛋白凝胶电泳考马斯亮蓝染色样本均未降解,Western blot测得联合方法提取样本中前列腺素D合成酶含量更高.结论 玻璃匀浆器与研磨珠均质仪的联合提取临床增生性瘢痕组织样本中获得蛋白质较为高效,是一种临床瘢痕组织蛋白样本提取方法.
