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乙型肝炎病毒L蛋白颗粒的真核表达与纯化
目的:真核细胞中表达和纯化乙肝病毒L蛋白颗粒,并初步分析其物理特性与抗原性.方法:真核表达质粒pSVsigLM-S-瞬时转染COS-7细胞,收集48 h后的培养上清采用CsCl等密度平衡离心、蔗糖密度梯度超速离心和酶联免疫吸附试验(ELISA)3者结合的方法纯化L蛋白,获得的纯化产物行Western blotting 鉴定和透射电镜(TEM)观察.结果:采用超速离心结合ELISA法可以纯化L蛋白,CsCl等密度平衡离心显示在密度约1.21 g/cm3处富含S抗原性.SDS-PAGE证实产物主要由一种42 kDa的蛋白分子组成,Western blotting证实这种蛋白为同时具有S与PreS1抗原性的L蛋白.透射电镜显示分泌的L蛋白自行组装成约23 nm的球形颗粒.结论:融合外源性信号肽能有效的引导L蛋白的组装和分泌.CsCl和蔗糖超速离心能高效纯化L颗粒并保持其完整的抗原性及颗粒形态.
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蔗糖密度梯度离心联合超滤技术分离恶性胸腹水来源的exosomes
目的:对常规的蔗糖密度梯度离心方法进行改进,以获取高质量和高数量的exosomes.方法:采用常规的蔗糖密度梯度离心方法,再联合超滤技术分离恶性胸腹水来源的exosomes,经透射电镜观察其形态.结果:离心超滤方法只需超速离心1次,可显著减少超速离心次数,缩短分离操作时间,降低样品污染和损失,回收率高;所获exosomes在透射电镜下呈圆形或椭圆形膜性囊泡状结构,直径30~100 nm,分散均匀.结论:蔗糖密度梯度离心法联合超滤技术提纯恶性胸腹水来源exosomes的方法简便、高效.
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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离心机转速的写法及相对离心力的正确表示
有的作者将离心机转速用rpm表示,这是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时用r/min表示;当高速或超速离心时用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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建立HPLC法测定螺内酯脂质体包封率
[目的]建立测定螺内酯脂质体含量及包封率的高效液相色谱方法.[方法]分别采用透析法和超速离心法分离螺内酯脂质体和游离药物,以HPLC法测定药物含量,计算包封率.[结果]在选定色谱条件下,辅料不干扰测定,螺内酯在0.5~8.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),日内日间精密度(RSD)均<2%,平均加样回收率为99.85%.透析法可使螺内酯脂质体和游离药物得到良好的分离.[结论]透析法测定螺内酯脂质体的含量及包封率准确可靠、操作简便.
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人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析
目的 建立一套完整的外泌体样品提取,液质联用蛋白质组学检测方法.方法 采用超速离心法提取细胞培养液外泌体,经过 FASP酶切,收集酶解肽段,通过Easy-Nano LC液相色谱仪和Triple TOF6600质谱仪(美国Sciex公司)液质联用检测外泌体全酶解产物,并通过ProteinPilot软件(Sciex)处理数据,检索Uniprot的相应数据库,从而鉴定外泌体蛋白质.结果 通过超速离心法,成功提取到细胞培养液外泌体.并通过LC-MS-MS方法,软件分析和数据库检索到833个匹配蛋白.结论 此方法可有效获取外泌体,并鉴定外泌体蛋白质.
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降低桑叶提取物中灰分的方法探讨
中药提取物中的灰分及重金属是影响成品质量的重要指标之一.中药提取物中的灰分及重金属来源有两类,一类是中药材中生理性存在的无机离子,包括钠、钾、钙、镁、铁、氯化物和磷酸盐;另一类是中药材前处理过程中未除净的部分杂质(如:泥沙).超速离心、大孔树脂及离子交换树脂在现代制药及食品工业中起着很重要的作用,且不会产生残留[1].有报道离子交换树脂在制药及食品工业中去除其中的灰分及重金属有较好的效果[2].灰分及重金属超标是直接影响成品质量重要的成分,是产品质量的关键控制点.笔者探讨降低桑叶提取物中灰分的方法,现报道如下.
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根尖牙乳头干细胞外泌体的提取与鉴定
目的 提取根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体并对其鉴定.方法 原代培养SCAP并鉴定,收集SCAP培养上清,采用超速离心法提取其外泌体,透射电镜下观察外泌体形态,免疫印记法检测外泌体特异性标记蛋白CD9、Alix的表达.结果 SCAP能分泌外泌体,电镜下可见其为呈杯状的囊泡结构,直径30~100 nm;特异性标记蛋白CD9、Alix呈阳性表达.结论 采用超速离心法可以成功从SCAP培养上清中提取外泌体.
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离心机转速及相对离心力的正确表示
离心机转速用rpm表示已是非法定单位的写法。正确的写法是:当低速离心时(1万转以下)用r/min表示;当高速或超速离心时(1万转以上)用相对离心力“×g”表示,g是斜体,前面是乘号。
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肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化
目的 优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据.方法 在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果.结果 在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果好,回收率高,达98%.综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P> 0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高.
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重组HBsAg大规模生产中超速离心纯化工艺的改进
目的为提高制品的纯度和收率以及离心机的使用效率,建立更适合大规模生产的超速离心工艺.方法样品在超离前先过滤,然后再分别调整梯度液的液量及比重.结果样品经过滤后适当调整梯度液的液量,超离心的峰形和所收获的hBsAg的纯度和收率都明显提高,而改变梯度液的比重则收液量下降,收率降低.结论在超离心前先过滤,然后再改变原有梯度液的比例,减少A液50ml,增加B液50ml,能提高制品的纯度和收率.
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阿霉素-槲皮素复方脂质体的制备
目的:研究阿霉素-槲皮素复方脂质体(DQ - Lip)的制备工艺.方法:以氢化大豆磷脂(HSPC)和胆固醇(CH)为膜材,薄膜超声结合硫酸铵梯度法制备阿霉素(DOX)-槲皮素(QUE)复方脂质体.单因素考察药脂比、硫酸铵浓度和孵育温度,优化处方工艺,超速离心后HPLC测定脂质体中DOX与QUE包封率;动态光散射粒径仪及透射电镜测定脂质体粒径及形态.结果:优化处方工艺为:QUE:HSPC=1∶20mol/mol,DOX:HSPC=1∶7.9w/w,硫酸铵浓度为0.15mol/L,孵育温度55℃;制备得到的复方脂质体DOX、QUE的包封率分别为(90.6±0.61)%、(83.3±0.24)%(n=3),粒径为138.5nm.结论:所得优化工艺制备阿霉素-槲皮素复方脂质体稳定可行.