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小鼠骨髓基质细胞成内皮细胞分化及缺血区存活能力
目的探讨体外培养的骨髓基质细胞的部分生物学特性、成内皮细胞分化能力及在缺血区存活能力.方法分离5~6周龄的小鼠胫骨、股骨,预冷的DMEM/F12培养基冲洗出骨髓,密度梯度离心分离出骨髓单个核细胞,接种于DMEM/F12培养基中(含10%优质胎牛血清及双抗).
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精子形态对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响
目的:分析男性精液参数与卵裂率、优质胚胎率及妊娠率的相关性,探讨休外受精一胚胎移植(IVF-ET)周期中精子形态对精子功能的影响.方法:分析82个受精率100%的IVF-ET周期.以Diff-Quickstain方法染色,密度梯度离心法处理精液.WHO精子形态学标准评估精子形态,精子正常形态率≥14%为正常组,<14%者为异常组.观察精液处理前后精子参数变化,比较妊娠组与未妊娠组的年龄、移植日子宫内膜厚度和精液各参数的情况.比较精液处理前后精子正常形态率与两组的正常受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠率.结果:①密度梯度离心法处理后82例精液密度明显降低,活动力明显提高,差别有统计学意义.②精液处理前精子正常形态率:正常组11例(13.41%),异常组71例(86.59%);处理后正常组34例((41.46%),异常组48例(58.53%).异常组精液处理后正常精子形态的比例提高,中位数(P_(25),P(75))分别为8.15%(6.38%,10.50%)vs.12.41%(9.98%,18.58%),差别有统计学意义(P<0.01).③精液处理前精子正常形态率正常组和异常组的密度和活动力差别无统计学意义(P>0.05).④精液处理前后精子正常形态率正常组和异常组的妊娠率和优质胚胎率差异均无统计学意义(P>0.05);精子正常形态率正常组的卵裂率高于异常组(P<0.05).⑤妊娠组和未妊娠组除男女双方年龄差异有统计学意义外,移植日子宫内膜厚度和各精液参数差异均无统计学意义.结论:精子形态对妊娠结局无预测,密度梯度离心法能提高正常精子形态百分数,需根据精液处理后的结果选择受精方式.
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人乳头瘤病毒与肺、食管鳞癌的相关性
自从人乳头瘤病毒( Human Papillomavirous, HPV)被发现以来,与人类的许多疾病相伴随,大量证据表明与宫颈癌、膀胱癌关系非常密切.随着研究的深入及广泛,近年来HPV与胸科鳞癌的关系日益受到重视.本文就这方面的研究现状和进展综述如下.1 HPV基础概况分类学上HPV属于乳多空病毒科乳头瘤病毒属.基因组为双链共价封闭的环状DNA,长约7.8~8.0kb.病毒颗粒直径为55nm,核壳为20面体对称型,由72个壳粒组成,在CSCL密度梯度溶液中浮密度为1.34g/ml.基因分型的原则是以50%的同源性为界限,如新发现的HPV与已知病毒之间核酸杂交率超过50%,则被认为是新的型别.
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基因1~6型无血清 HCV 颗粒培养体系的建立和特点
近产生 HCV 颗粒(HCVcc)的细胞培养系统已经建立。构建无血清培养环境可能是制造无活性全病毒疫苗好的发展方向。来自 Hvidovre 医院的 Mathiesen CK 等描述了通过 Huh7.5细胞培养于腺病毒表达介质获得基因型1~6型的无血清 HCVcc(sf -HCVcc)。与 HCVcc 相比,sf -HCVcc 显示出0.6~2.1l g 倍的感染性滴度的增加,可能与 sf -HCVcc 的释放增加和特异性感染力相关。与 HCVcc 相反,sf -HCVcc 在密度梯度谱中只有一个同源性高峰。sf -HCVcc 的进入依赖于 HCV 共同受体 CD81、LDLr、SR -BI 和 clathrin 介导的细胞内吞。HCVcc 和 sf -HCVcc 能被慢性 HCV 感染者的血清中和,也能被抗构象表位的人单克隆抗体中和。因此作者发明了产生高滴度单一密度 sf -HCVcc 的无血清培养系统,显示与 HCVcc 相似的生物学特性。这种方法可能推进 HCV 疫苗发展,并有利于 HCV 的生物学研究。
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重组HBsAg大规模生产中超速离心纯化工艺的改进
目的为提高制品的纯度和收率以及离心机的使用效率,建立更适合大规模生产的超速离心工艺.方法样品在超离前先过滤,然后再分别调整梯度液的液量及比重.结果样品经过滤后适当调整梯度液的液量,超离心的峰形和所收获的hBsAg的纯度和收率都明显提高,而改变梯度液的比重则收液量下降,收率降低.结论在超离心前先过滤,然后再改变原有梯度液的比例,减少A液50ml,增加B液50ml,能提高制品的纯度和收率.
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流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化
目的建立分离、纯化流感病毒RNA聚合酶PB1、PB2和PA 3P蛋白的有效方法,为进一步研究3P蛋白的结构和功能奠定基础。方法用甘油、CsCl1及CsTFA不同介质的密度梯度超速离心法进行分离,用SDS-PAGE电泳及Western blot法检测3P蛋白,用尿素变性PAGE检测vRNA。结果用甘油密度梯度离心,可从病毒粒子中分离由NP、3P和RNA组成的RNP。将纯化的RNP用CsCl和甘油双组分不连续密度梯度离心,可形成NP和3P-RNA两部分,使NP与3P-RNA分离。进一步将3P-RNA在CsTFA-甘油双组分不连续密度梯度介质中进行超速离心,可有效地将3P与RNA分离,获得较纯的3P蛋白。3P位于离心管的上半部分,而RNA则位于离心管的近底端部分。结论用甘油、CsCl-甘油和CsTFA-甘油分步超离心法可有效地从流感病毒粒子中纯化出高纯度的流感病毒RNA聚合酶。
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小鼠脊髓前角运动神经元的分离、培养和鉴定
目的:探讨一种分离小鼠脊髓前角运动神经元的方法,为运动神经元相关的研究提供依据.方法:分离13 d的C57BL/6胎鼠脊髓,利用Optiprep分离液经密度梯度离心获得脊髓前角运动神经元,培养后观察神经元细胞形态的变化,免疫荧光双标法对分离运动神经元的纯度进行判定.结果:将分离到的运动神经元进行培养,能够观察到典型的神经元细胞形态及轴突生长.免疫荧光双标证明培养的细胞为运动神经元细胞,纯度约95%.结论:Optiprep分离液用于小鼠运动神经元的分离,可获得良好的分选效果.Optiprep分离液可用于运动神经元相关的研究.
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Percoll法分离培养肾小管上皮细胞
目的建立良好的肾小管上皮细胞培养方法.方法选用SD幼鼠的肾组织进行细胞培养,采用Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%新生牛血清的DMEM/F12培养基、5%CO2、37℃孵箱进行细胞培养.利用传1代的细胞,制作细胞爬片,用免疫组化、透射电镜进行鉴定.结果细胞生长4~5天后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石铺路样.结合形态学及免疫组化鉴定,细胞培养传1代后98%的细胞为肾小管上皮细胞.结论用Percoll法分离培养的细胞数量多,均一性生长较好,可重复性操作较好.为体外研究接近组织原位RTECs细胞功能和特征及药物的筛选提供了可行性和可能性.
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低密度脂蛋白研究进展
近年来,血脂增高、动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的发病率明显上升,已成为危害城镇居民健康的重要原因.血脂的临床和实验室研究成为热点.血脂是一个总称,包括血浆中的甘油三酯(TG)、磷脂(PL)、游离胆固醇(Fc)和胆固醇酯(CE).这些不溶于水的脂类在血浆中与水溶性的蛋白质(载脂蛋白)相结合而运输,形成血浆脂蛋白系统.应用密度梯度超速离心法,人们将血浆脂蛋白分离为乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).大量的临床研究和一、二级预防试验显示降低血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)可以预防CHD临床事件发生,减少CHD死亡.Sniderman AD等主张在CHD的众多危险因素中,将高LDL-C放在致病作用的中心位置[1].本文就LDL研究新进展作一综述.
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虚拟内窥镜系统中表面法向量的计算
表面法向量计算是虚拟内窥镜系统中的一个重要问题,通常采用距离梯度法和密度梯度法计算.作者对这两种方法的优缺点作了讨论,针对它们彼此具有互补的特点,提出将距离梯度图像和密度梯度图像相融合的方法,并分别设计了代数融合和几何融合两种方法.实验结果显示,融合后的图像质量有了明显改善,而且几何融合法优于代数融合法.
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不同物理密度介质诱导干细胞表达多种组织细胞标记蛋白
干细胞凭借其多组织分化潜能,成为当前医学界包括血液科、神经科、心脏科、骨科、皮肤科等在内的多学科研究热点[1-3].我们在近期工作中偶然发现将干细胞移植到特定物理密度的材料表面时,干细胞有顺材质硬度分化的特性.我们借助低熔点琼脂糖设计出一种物理密度梯度介质,比较干细胞在该梯度介质中的生长状态和组织分化特点,观察物理因素对干细胞横向组织分化的干预效果.
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托卡马克等离子体密度梯度对边缘输运垒形成的作用
从电子、离子的输运方程出发,通过一维输运代码模拟了不同功率下JET装置中的等离子体输运过程.模拟结果表明:当加热功率在一定范围内时,离子的密度梯度趋势变化不大,输运系数增大;当加热功率超过一定阈值,在边缘将产生陡峭的密度梯度,形成边缘输运垒,输运系数显著降低,约束明显改善.
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一次性密度梯度超速离心分离人血清脂蛋白及无脂血清
本研究采用角度转头和一次性密度梯度超速离心法,从正常人血清中将VLDL,LDL,HDL和无脂血清相互分离,效果满意,并成功应用于脂蛋白和胆固醇代谢的研究。1.1.1 仪器 超速离心机为BeckmanL8-55型,55.2-Ti角度转头,容量38.5×10 ml。分析天平为TG-328型(浙江温州天平仪器厂)。
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日立超速离心机区带转头在使用中应注意的几个问题
区带超速离心技术在我们公司内应用于一些生物制品的生产工艺中,而应用较多的离心机区带转头是P35ZT转头,为了保证设备的正常运行,特将P35ZT转头使用中的应注意检查事项归纳起来.