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新型姜黄素脂质体的制备和初步稳定性考察
目的:制备包封率高、粒径小、稳定性好的新型姜黄素脂质体,并对其稳定性进行考察.方法:采用薄膜超声法制备新型姜黄素脂质体,以透射电镜(TEM)观察其形态,动态光散射(DLS)考察粒径分布,用超速离心法测定包封率,并考察其对温度、乙醇、酸碱的耐受性.结果:新型姜黄素脂质体粒径小,平均粒径97.08nm(多分散系数PDI为0.173),包封率为(99.37±0.89)%;稳定性试验证明新型姜黄素脂质体能够耐受热压灭菌(115℃,67kPa,30min)、终浓度为40%的乙醇和终浓度为lM的盐酸.结论:和传统脂质体相比,新型脂质体提高了姜黄素的包封率和稳定性,可以使药物更好地发挥作用.
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常用精制方法在纯化中药制剂中的应用
目的:对近年来在中药制剂中常用的精制方法进行综述.方法:查阅文献.结果:水醇法、膜分离法、超速离心法、澄清剂吸附法、大孔吸附树脂法等各有其优越性,同时亦存在问题.结论:应根据临床治疗的需要、处方中各药物的化学性质及所制备的剂型的要求,选择比较不同的分离和纯化方法,可考虑采用两种或两种以上的分离技术.
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20(S)-原人参二醇药质体的制备及体外评价
目的:研制20(S)-原人参二醇(Ppd)药质体和Brij78修饰的Ppd药质体并对其进行体外评价.方法:采用薄膜超声法制备Ppd药质体和Brij78修饰的Ppd药质体,用超速离心法测包封率,用动态光散射(DLS)考察粒径分布,以粒径和包封率为指标,分别考察温度、乙醇、酸碱和人工胃肠液等对药质体的影响.结果:薄膜超声法制备的Ppd药质体的包封率为(80.84±0.53)%,粒径100.1 nm;Brij78修饰的Ppd药质体的包封率为(72.76±0.63)%,粒径为117.3 nm.结论:该药质体制备工艺简单可行,制剂学性质较稳定.
关键词： 20(S)-原人参二醇药质体 包封率 超速离心法 粒度分布 稳定性 -
血清中外泌体及外泌体 RNA 提取方法的比较
目的：评价超高速离心法、ExoQuick 与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12 h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体，通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布，评估外泌体提取效率；采用超高速离心法＋Trizol LS法、ExoQuick＋SeraMir、TEI＋TER与ExoRNeasy 试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA（exo－RNA），利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布，实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。结果外泌体提取方法中，比较外泌体浓度和其蛋白浓度， ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法；超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白，而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中，不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达，未影响 miRNA相对表达趋势；ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高，各miRNA表达水平较高；TEI＋TER法未见明显RNA条带，样本中各miRNA表达水平稳定；超高速离心法＋Trizol LS法与ExoQuick＋SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带，此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究，而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。（中华检验医学杂志，2016，39：427－432）
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超速离心HPLC测定血清脂蛋白亚类和脂蛋白(a)胆固醇方法的建立
目的 建立血清高密度脂蛋白(HDL)亚类、低密度脂蛋白(LDL)亚类和脂蛋白(a)[Lp(a)]胆固醇准确测定方法.方法 血清与含脯氨酸的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.006和1.044,血清与含脯氨酸和巯基乙醇(ME)的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.044、1.063和1.125,超速离心,用高效液相色谱测定各种超速离心底部组分胆固醇,计算HDL亚类(HDL2和HDL3)、LDL亚类(LDLa和LDLb)及Lp(a)胆固醇.结果 ME使Lp(a)解离,解离前后Lp(a)存在明显密度分界点(1.044),使脂蛋白亚类和Lp(a)胆固醇测定成为可能;测定HDL2、HDL3、LDLLa、LDLb及Lp(a)胆固醇的总变异系数分别为0.85%～2.66%、0.87%～3.21%、0.86%～1.11%、2.59%～6.35%和4.42%～12.29%.结论 建立新的血清HDL和LDL亚类及Lp(a)胆固醇测定方法,方法可靠、精密、简便,可望在脂蛋白亚类和Lp(a)胆固醇测定标准化中发挥作用.
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超速离心-高效液相色谱测定血清高密度和低密度脂蛋白胆固醇
目的 建立一种新的预期用作参考方法的高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)准确测定方法.方法 血清与含2-巯基乙醇(ME)和脯氨酸的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.063,超速离心分离高密度脂蛋白(HDL);血清与含脯氨酸的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.006,超速离心分离HDL和低密度脂蛋白(LDL);用高效液相色谱测定两种脂蛋白组分胆固醇.结果 ME和脯氨酸可有效消除脂蛋白(a)对超速离心法分离HDL的影响;新方法测定HDLC和LDLC的总变异系数分别为0.96%～2.07%和0.65%～1.12%.结论 建立血清HDLC和LDLC准确测定方法,方法可靠、精密、简便,可望用作HDLC和LDLC测定参考方法.
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氧化型低密度脂蛋白脑血管运动效应的实验研究
近年来的研究结果提示,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可抑制人和动物冠状动脉内皮依赖的舒张,而其对脑动脉的影响则知之甚少.因此,我们研究了ox-LDL 对兔离体颅内外脑血管(颈动脉和基底动脉) 内皮依赖的舒张功能的影响,现将结果报道如下.材料和方法:成年雄性新西兰大白兔,随机分为4组:1组(6只),以天然LDL(n-LDL)孵育血管条30 min;2组(6只),以ox-LDL孵育血管条30 min;3组(5只)以ox-LDL+L-精氨酸孵育血管条30 min;4组(对照组),单纯以Krebs液孵育.用不连续密度梯度超速离心法提取LDL,Cu2+ 诱导法制备ox-LDL;等长张力法测定动脉条的反应性,得出浓度反应曲线,进行统计学处理.
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海星多糖的分子量测定
海星酸性粘多糖除了作代血浆用外,还发现它能提高免疫功能,对血凝时间及血清胆固醇也有影响.为综合利用海洋资源,开发多用途海洋生物制品,海军某医院研制出陶氏太阳海星酸性粘多糖,本文就其分子量的蒸气压渗透法和超速离心法测定作一概述.
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奥扎格雷纳米结构脂质载体包封率的测定方法
目的:建立奥扎格雷纳米结构脂质载体(ozagrel-loaded nanostructured lipid carriers,OZ-NLC)包封率的测定方法.方法:分别采用超滤法、葡聚糖凝胶柱层析法、超速离心法分离游离药物,以紫外分光光度法测定奥扎格雷的含量,计算包封率.结果:超滤法和葡聚糖凝胶柱层析法可有效分离OZ-NLC与游离药物,两种方法的平均回收率分别为98.31％和97.15％,平均包封率为59.21％和61.11％.结论:葡聚糖凝胶柱层析法操作简便,结果可靠,重现性好,故选择该方法测定OZ-NLC的包封率.
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紫杉醇固体脂质纳米粒包封率的测定
目的 建立紫杉醇固体脂质纳米粒(Paclitaxel Solid Lipid Nanoparticles,FIX-SLN)包封率的测定方法 .方法 分别采用凝胶柱过滤法、超速离心法、微柱离心法分离固体脂质纳米粒和游离药物,并进行方法 学考察,优化包封率测定条件.结果 微柱离心法能有效地将PTX-SLN与游离药物FIX分离,柱回收率测定结果 为98.23%,3次包封率测定的平均值为94.07%.RSD为0.78%.结论 微柱离心法简便,结果 重现性好,适于PTX-SLN包封率的测定.
关键词： 紫杉醇固体脂质纳米粒 包封率 凝胶柱过滤法 超速离心法 微柱离心法 -
工艺变更对中药制剂质量的影响
余彦海[20]探索了三种方法对通脉方制剂的纯化工艺的影响，通过测量有效成分三七皂苷的含量表明超速离心法较水提醇沉法和絮凝沉淀法其含量高。牟鲁霞等[29]研究了水溶性黄芪多糖除蛋白的方法，发现蛋白酶法以及蛋白酶与Sevage联用法效果较传统的Savage法、三氯乙酸法等更好，蛋白质经过水解透析后，在多糖溶液中的含量大大降低。
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低密度脂蛋白与动脉粥样硬化
1 LDL的分型Krauss[1]和Austin[2]等用密度超速离心法或非变性聚丙乙烯酰胺凝胶电泳法将LDL分成许多亚组分.其中有重要临床意义的主要有三种:①主要的LDL亚类是低密度,较大颗粒LDL(直径＞26.2nm),定为A型;②主要的LDL亚类是高密度,较小颗粒LDL(直径＜25.5nm),定为B型;③两种LDL亚类都不占优势,中间密度LDL.小颗粒、致密的LDL占优势或其血浆水平升高,可导致心脑血管疾病的发生,并时常伴有极低密度脂蛋白(VLDL)在肝脏中的过度产生和高甘油三酯血症(TG)以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度的降低,被称为"致动脉粥样硬化脂蛋白图谱".但当LDL-C水平正常或在基线水平升高时,小密度LDL颗粒数量增加通常被忽视.
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血脂及脂蛋白常用检测指标的临床意义
20世纪50年代,人们逐渐认识到血脂水平与动脉粥样硬化(AS)之间的密切关系,且血清脂类主要有胆固醇(包括游离胆固醇和胆固醇酯)和甘油三酯(TG),故当其中一种或几种脂类升高均称为高脂血症,并将高脂血症分为高胆固醇血症、高甘油三酯血症和混合型三大类.60年代,明确了血浆脂质是以脂蛋白的形式存在,血脂的异常必然反映为血浆脂蛋白的异常,临床上逐渐用高脂蛋白血症代替高脂血症.目前常用的测定血浆脂蛋白的方法有两种:超速离心法和电泳法.超速离心法是根据脂质和蛋白质密度和比例的差异,将血浆脂蛋白分为4大类:乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).电泳法的分类基础是依据脂蛋白分子在电场中的迁移率,在常用的以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳中,也可将脂蛋白分为四大类:分别为CM、β脂蛋白、前β脂蛋白和α脂蛋白.以临床表现型为基础分为六型,以I、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ和V来表示.
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龙葵提取物凝胶微粒的制备工艺研究
目的：采用超速离心法测定了凝胶微粒对澳洲茄胺的包封率，并以包封率为指标，用正交实验设计优选处方及工艺。方法：离心条件：转速为30000r/min；离心时间为30min。结果：通过正交设计筛选出优处方组成：海藻酸纳浓度为1.5%，海藻酸钠与药物的比例为1：2，氯化钙浓度为0.1mol/L。结论：本方法操作简便，制备条件温和，收率高。
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低密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究进展
有研究发现冠心病的发病风险与总胆固醇（total cholesterol，TC ）含量有明显关联［1］。人体血液循环中的胆固醇主要由低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）转运。许多前瞻性研究和临床试验也发现LDL是冠心病发病风险的主要影响因素［1-2］。对有冠心病临床表现患者［3-4］和无冠心病临床表现患者［5-7］的干预性研究发现降脂治疗疗效明显。临床实验室检测低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholester-ol，LDL-C）常用的方法是Friedewald计算法［8］。该方法是根据患者空腹状态的血清TC、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol， HDL-C）和甘油三酯（triglyeride，TG）进行计算得到LDL-C浓度。虽然这一方法在临床检测中广泛应用，但并不建议使用这一方法检测非空腹状态样本、高TG血症（TG＞4．52 mmol／L）患者样本和Ⅲ型高脂蛋白血症患者样本。基于上述原因，1995年美国国家胆固醇教育计划（National Cholesterol Education Program，NCEP）专家组建议使用直接法检测 LDL-C［9］。我们综述了 LDL-C检测方法的发展历史和不同检测方法间的结果比较等研究进展。
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3种分离尿外体方法比较
目的 对超速离心法、超滤法和沉淀法3种分离尿液中外体(exosome)方法进行比较,为临床研究选择合适的分离方法提供依据.方法 用超速离心法、超滤法和沉淀法3种方法分别从4例健康人和2例慢性肾脏病(CKD)患者尿液中分离exosome.用透射电镜观察尿exosome形态结构,BCA法检测exosome总蛋白质浓度,分别在尿体积及exosome总蛋白质浓度相同上样条件下,用western blot(WB)检测exosome标志蛋白TSG101和Alix.结果 3种分离方法均能获得直径为40 ～ 100 nm的圆形膜性囊泡;WB能检测到超速离心法及超滤法分离得到的exosome标志蛋白,而沉淀法未检测到;超滤法尿exosome总蛋白质浓度远高于超速离心法及沉淀法;超速离心法尿体积及exosome总蛋白质浓度相同情况下上样时所有样本均能检测到exosome标志蛋白,且表达量在3种方法中均多;超滤法尿体积相同情况下上样,4例健康人均能检测到exosome标志蛋白,而以exosome总蛋白质浓度相同上样时,仅有2例健康人能检测到标志蛋白,但2例CKD患者在此两种上样方式未检测到标志蛋白;沉淀法两种上样条件下所有样本均未检测到exosome标志蛋白.结论 超速离心法分离尿exosome效果较好,开展尿exosome临床研究时建议选择超速离心法.
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非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨
目的:比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体(Exosomes)的方法,为获得高质量的Exosomes提供参考.方法:分别采取超速离心法、进口ExoQuick-TC提取法、国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes.利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物CD63表达.结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构.进口ExoQuick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P＜0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白CD63表达,超速离心法CD63表达高.结论:超速离心法、进口ExoQuick-TC提取法、国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高.
关键词： 外泌体 超速离心法 Exoquick提取法 Ribo提取法 -
超速离心法分离泡相胆汁
胆汁中的磷酯泡是胆固醇的主要携带者,在一般情况下,泡处于稳定状态,一旦存有影响其稳定性的因素,则单层泡趋于集聚成复层泡,进而胆固醇结晶成核乃至成石[1].上述因素可能是泡相胆汁中的蛋白质[2],后者仅占胆汁蛋白的2%[4].本实验的目的在于通过超速离心法大量分离泡相胆汁,以获得足够的泡相蛋白并对其进行研究.
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脂质代谢与慢性疾病的相关联系
在血液中血脂要由载脂蛋白进行转运.脂质与载脂蛋白结合形成脂蛋白.正常血浆利用超速离心法可分离出4种主要的脂蛋白,即乳靡颗粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).CM、VLDL主要运送三酰甘油,LDL和HDL主要转运胆固醇.各种血脂主要通过小肠和肝脏合成及从食物中吸收而来.血浆脂蛋白转移障碍或内源性产生过多或两者同时存在,可引起血脂过高,血浆脂质紊乱[1].
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低密度脂蛋白研究进展
近年来,血脂增高、动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的发病率明显上升,已成为危害城镇居民健康的重要原因.血脂的临床和实验室研究成为热点.血脂是一个总称,包括血浆中的甘油三酯(TG)、磷脂(PL)、游离胆固醇(Fc)和胆固醇酯(CE).这些不溶于水的脂类在血浆中与水溶性的蛋白质(载脂蛋白)相结合而运输,形成血浆脂蛋白系统.应用密度梯度超速离心法,人们将血浆脂蛋白分离为乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).大量的临床研究和一、二级预防试验显示降低血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)可以预防CHD临床事件发生,减少CHD死亡.Sniderman AD等主张在CHD的众多危险因素中,将高LDL-C放在致病作用的中心位置[1].本文就LDL研究新进展作一综述.
