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极低密度脂蛋白对肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响
目的 观察不同浓度极低密度脂蛋白(VLDL)是否调节肾小管上皮细胞(HK-2细胞)人尿酸盐转运子(Huat)Mrna的表达.方法 根据培养液中所含VLDL浓度的不同,将HK-2细胞分为:①仅使用DMEM/F-12组(对照组);②DMEM/F-12+50μg/ml VLDL组(V1组);③DMEM/F-12+100μg/ml VLDL组(V2组);④DMEM/F-12+200 μg/ml VLDL组(V3组);⑤DMEM/F-12+400 μg/ml VLDL组(V4组).每组均培养6瓶细胞.上述细胞在不同培养液中分别培养48 h.采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞中Huat Mrna的相对表达量(2△△Ct法).结果 所有标本均能检测到hUATmRNA的表达,但V1～V4组Huat Mrna表达水平均明显低于对照组,其中,VLDL低浓度(50μg/ml)组Huat Mrna表达水平为对照组的64%,VLDL高浓度(400μg/ml)组Huat Mrna表达水平仅为对照组的24%.结论 VLDL下调Huat Mrna表达,VLDL的这种作用可能与脂代谢紊乱易合并高尿酸血症有关.
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血脂的功和过
人体血液中含有一定量的脂质,主要包括胆固醇(TC)、甘油三酯(TG). 磷脂(PL)、游离脂肪酸(FFA)等,它们只有在血液中与某些蛋白质结合成脂蛋白的形式,才能在血液中运转和代谢.不同成分和比例的血脂与蛋白质结合成为不同种类的脂蛋白,主要有低密度脂蛋白(LDL). 高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、脂蛋白a(LPa)等.
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单核巨噬细胞摄取极低密度脂蛋白机制的初步研究
目的探讨单核巨噬细胞摄取极低密度脂蛋白(VLDL)的机制和途径. 方法观察单核巨噬细胞结合VLDL的活性、载脂蛋白E(apoE)配体活性及清道夫受体A(SRA)抗体的作用,分析VLDL对单核巨噬细胞SRA mRAN、蛋白质表达以及VLDL受体(VLDLR)基因转录的影响. 结果 (1)单核巨噬细胞既能结合VLDL,又能结合缺乏apoE配体活性的VLDL(tryp-VLDL),其总结合能力与2种脂蛋白浓度呈显著正相关(前者r1=0.71,后者r2=0.63),但与结合VLDL能力相比,巨噬细胞结合tryp-VLDL的能力下降约50%;(2)SRA抗体对单核巨噬细胞结合125I-VLDL活性无显著影响;(3)VLDL显著增加巨噬细胞VLDLR基因转录,而对巨噬细胞SRA mRNA及蛋白质表达作用不明显. 结论单核巨噬细胞可能通过apoE依赖(可能是VLDLR)或非依赖途径介导的VLDL摄取,SRA在此过程中不起重要作用.
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肝脏胰岛素受体急性敲除对载脂蛋白B和三酰甘油分泌的影响
目的 分析肝脏组织特异性的胰岛素信号急性缺失对载脂蛋白B和三酰甘油分泌的影响. 方法 应用Cre-LoxP系统原理,在重组酶基因的上游插入肝组织特异性白蛋白基因启动子,以此构建组织特异性表达的腺病毒.扩增纯化后的腺病毒经胰岛素受体Floxed小鼠尾静脉注射,分别在注射2d、4d和6d后收集小鼠血浆,测定新生载脂蛋白B和极低密度脂蛋白三酰甘油分泌速率,抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量,并用免疫印迹法分析胰岛素受体和脂代谢相关蛋白在肝脏内的表达. 结果 小鼠在注射含重组酶的腺病毒2d、4d和6d后,胰岛素受体表达依次降低30.50％ (P＜0.05)、60.12％ (P＜0.01)和99.54％ (P＜0.001),极低密度脂蛋白三酰甘油的分泌速率分别降低20.43％ (P＜0.05)、33.63％(P＜0.05)和44.21％(P＜0.01);下调了固醇调控结合蛋白1和脂肪酸合成酶以及极低密度脂蛋白形成相关蛋白的表达,但不影响新生载脂蛋白B100的分泌和肝脏脂质含量；而在含重组酶的腺病毒注射6d后新生载脂蛋白B48升高约35.07％ (P＜0.05).结论 肝脏胰岛素信号急性缺失降低极低密度脂蛋白中三酰甘油的分泌速率并呈现时间依赖性,揭示小鼠肝脏分泌较小的极低密度脂蛋白颗粒,这种变化可能和肝脏内脂肪酸的合成速度下降有关.
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高甘油三酯血症的影响因素
血浆中的TG主要存在于乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDL)中.乳糜微粒和VLDL统称为富含TG的脂蛋白(TRL),TRL经脂蛋白脂酶(LPL)分解后形成TRL残粒.血浆TG浓度升高反映了TRL水平升高.TRL产生过多和(或)清除减少都将引起血浆中TG浓度上升,从而导致高TG血症[1-2].遗传和环境因素均在高TG血症的病因学中起重要作用,常见的遗传学病因是LPL基因缺陷,而常见的环境因素则包括热量摄入过多,长期大量饮酒,糖尿病或某些药物所致等[3].
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极低密度脂蛋白胆固醇与胆固醇吸收和合成标志物的关联性研究
目的 通过评价极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)水平与胆固醇吸收和合成标志物水平及其变化的关联性,探索降低VLDL-C的有效方法.方法 从2008年10月到2009年6月在河南省和山西省两家医院心内科,连续入选363例从未服用过他汀药物的冠心病中高危患者,基线时测定患者体内VLDL-C水平和胆固醇吸收、合成标志物水平,并进行统一的问卷调查和体格检查,期间给予患者阿托伐他汀20mg/d对血脂进行干预,共持续4周,试验结束时再次测定VLDL-C和胆固醇吸收、合成标志物的水平.分析时按胆固醇吸收、合成标志物水平或降低幅度三分位进行分组及交叉分组,采用协方差分析方法调整年龄和性别后比较在不同胆固醇吸收和合成状态下患者VLDL-C的水平及其变化情况.并采用偏相关分析方法和多元线性回归的方法分析VLDL-C的水平与胆固醇吸收、合成标志物的关联性.结果 (1)363例患者中终共283例患者纳入统计分析,平均年龄为(55.43±9.01)岁,VLDL-C基线水平为1.06(0.65,1.86)mmol/L,胆固醇吸收标志物菜油固醇为6.01(3.78,9.45)mg/L,合成标志物7-烯胆烷醇为13.46(8.30,21.07)mg/L.(2)偏相关分析和多元回归结果均显示VLDL-C基线水平与胆固醇吸收标志物菜油固醇水平呈正相关(r=0.153,P＜0.05),但与胆固醇合成标志物7-烯胆烷醇的相关性无统计学意义(r=0.182,P=0.173).在不同的胆固醇吸收、合成状态下随着基线菜油固醇水平的升高,VLDL-C基线水平呈现明显的上升趋势(趋势性检验P=0.035).(3)经4周阿托伐他汀干预后,VLDL-C下降了38.0％,VLDL-C的降幅与菜油固醇的降幅呈明显正相关(r=0.331,P＜0.001),随着菜油固醇下降幅度的增加,VLDL-C的下降幅度亦呈现明显增加的趋势(趋势性检验P=0.032),而VLDL-C变化与7-烯胆烷醇变化的相关性则无统计学意义(趋势性检验P=0.798).结论 VLDL-C水平与胆固醇吸收标志物有明显的相关性,为进一步研究胆固醇吸收抑制剂是否可以更有效降低VLDL-C水平提供了初步的假设.
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酵母双杂合体系研究丙型肝炎病毒进入肝细胞的受体
目的:用酵母双杂合体系筛选肝细胞 cDNA文库,寻找与丙型肝炎(丙肝)病毒(hepatitis C virus,HCV)胞膜蛋白2(E2)相作用蛋白的基因,探讨HCV与肝细胞的相互作用,寻找HCV进入细胞的受体.方法:以HCV E2蛋白胞外区片段,构建酵母双杂合体系中"饵"载体,从成人肝细胞cDNA文库筛选与HCV E2相作用蛋白的基因.结果:筛出的阳性克隆基因序列分析后,经GenBank查询,与人的apo CⅢ同源,同源性为98%.结论:HCV E2蛋白能与人的apo CⅢ在酵母双杂合体系中结合,但其相互作用与HCV进入细胞间的关系待进一步研究.
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降脂药物临床应用评价(下)
3贝特类贝特类能增强脂蛋白脂酶的活性,加速VLDL分解代谢,并能抑制肝脏中VLDL的合成和分泌.这类药物可降低甘油三酯22%～43%,而降低TC仅为6%～15%,并有不同程度升高HDL-C作用.其适应证为高甘油三酯血症或以甘油三酯升高为主的混合型高脂血症.
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极低密度脂蛋白受体在糖尿病患者脂肪组织中的分布和表达
目的:观察极低密度脂蛋白受体 (VLDL-R)的两种亚型在糖尿病患者脂肪组织中的分布和表达,以探讨其变化及意义. 方法:选择 10例正常人及 9例糖尿病患者,手术中采集其腹壁及肠脂垂脂肪组织,从脂肪组织提取的 mRNA用半定量-PCR方法扩增. 结果:①正常腹壁及肠脂垂脂肪组织 VLDLⅠ,Ⅱ型受体均有表达,两部位各亚型受体比较,差异无显著性意义(腹壁 t=- 0.454, P=0.6499;肠脂垂 t=0.870, P=0.3843).②糖尿病患者腹壁及肠脂垂脂肪组织中,Ⅰ型受体的分布和表达量与正常相比无明显变化,差异无显著性意义(腹壁 t=- 0.082, P=0.9349;肠脂垂 t=- 0.327, P=0.7439).但Ⅱ型受体表达明显减少甚至丢失 ,与正常相比差异有显著性意义 (腹壁 t=3.576, P=0.0003;肠脂垂 t=2.597, P=0.0094). 结论:糖尿病代谢紊乱影响 VLDL-R表达及亚型分布.
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血脂检测的临床意义
血脂是血浆中的中性脂肪(三酰甘油和胆固醇)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称.应用超速离心方法,可将血浆脂蛋白分为乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、中间密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和脂蛋白a(Lpa).
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肝硬化患者血清脂蛋白、载脂蛋白与总胆汁酸水平分析
本文对109例肝硬化患者检测血清高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B100(ApoB100)及总胆汁酸TBA水平,并进行相关研究.
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极低密度脂蛋白受体在糖尿病患者脂肪组织中的分布和表达
目的观察极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)的两种亚型在糖尿病患者脂肪组织中的分布和表达.方法手术中采集正常人及糖尿病患者腹壁及肠脂垂脂肪组织,从脂肪组织提取的mRNA用半定量-PCR方法扩增.结果 (1)正常腹壁及肠脂垂脂肪组织VLDLⅠ型、Ⅱ型受体均有表达,两部位各亚型受体比较,统计学分析差异无显著性.(2)糖尿病患者腹壁及肠脂垂脂肪组织中,Ⅰ型受体的分布和表达量与正常相比无明显变化.但Ⅱ型受体表达明显减少甚至丢失.结论糖尿病代谢紊乱影响VLDL-R表达及亚型分布.
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脂质代谢与慢性疾病的相关联系
在血液中血脂要由载脂蛋白进行转运.脂质与载脂蛋白结合形成脂蛋白.正常血浆利用超速离心法可分离出4种主要的脂蛋白,即乳靡颗粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).CM、VLDL主要运送三酰甘油,LDL和HDL主要转运胆固醇.各种血脂主要通过小肠和肝脏合成及从食物中吸收而来.血浆脂蛋白转移障碍或内源性产生过多或两者同时存在,可引起血脂过高,血浆脂质紊乱[1].
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极低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖及分泌纤连蛋白的作用
目的观察极低密度脂蛋白(VLDL)对大鼠系膜细胞分泌纤连蛋白(FN)及系膜细胞增殖的作用,探讨VLDI对系膜细胞的毒性作用.方法ELISA法测定细胞上清液FN的分泌;采用还原四氮唑盐复合物(XTT)检测系膜细胞增殖情况.结果(1)不同浓度VIDI(10～500μg/mL)、不同时间(6～48 h)与XTT光密度值(D)呈线性关系[r分别为0.911(P＜0.01),0.651(P＜0.05)].当VLDI浓度达1000μg/mL时,D下降.(2)在VIDI浓度在500 μg/mL左右时,随着刺激时间以及浓度的升高,VLDI大致可以依时间、浓度依赖关系促进系膜细胞FN分泌.结论VLDI可以促进系膜细胞分泌FN以及细胞增殖,提示其具有肾脏毒性作用.
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ApoCⅢ与脂质代谢相关性研究进展
载脂蛋白C(apolipoprotein C,apoC)是血浆中一组水溶性的低分子量蛋白质,包括载脂蛋白CⅠ、CⅡ、CⅢ和新近发现的CⅣ四个亚类,它们主要分布在乳糜微粒(chylomicron,CM)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)中.载脂蛋白C在脂蛋白代谢中发挥着重要的作用.载脂蛋白CⅢ(apoCⅢ)是载脂蛋白C族中含量丰富的一类.
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脂蛋白脂酶过表达促进极低密度脂蛋白诱导人系膜细胞的胞内脂质积聚和单核细胞趋化蛋白1表达
目的 通过在人肾小球系膜细胞转染脂蛋白脂酶(LPL)基因,观察LPL在系膜细胞摄取极低密度脂蛋白(VLDL)中的作用并对其介导肾损害的可能机制进行探讨.方法 以携带野生型人LPL基因(LPLwt)、无活性的突变型人LPL基因(LPL194)和对照人碱性磷酸酶基因(AP)的重组腺病毒转染人肾小球系膜细胞(HMCL)[Ad-LPLwt(活性型)、Ad-LPL194(无活性型)和Ad-AP(对照病毒)],RT-PER检测细胞LPL mRNA表达;细胞免疫化学染色检测细胞LPL蛋白表达;放射性核素标记的脂质体底物法检测LPL活性.分别以油红"O"染色和酶法定性和定量检测VLDL诱导的细胞内脂质沉积;MTT法检测VLDL刺激的HMCL增殖;实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测HMCL单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和蛋白的表达水平;HMCL与T-H蛋白1(THP-1)单核细胞的共孵育,检测单核细胞向系膜细胞的趋化.结果 细胞内脂质沉积分析显示,与Ad-AP组相比,Ad-LPLwt组和Ad-LPL194组细胞内三酰甘油的积聚分别增加3.55倍(P<0.01)和0.52倍(P<0.05).细胞增殖实验表明,在40 mg/LVLDL刺激下,Ad-LPLwt组细胞上清较Ad-AP组对HMCL有更强的促增殖作用(0.2282±0.0168比0.1805±0.0254,P<0.05).与Ad-AP组相比,Ad-LPLwt组细胞MCP-1 mRNA表达增加0.39倍(P<0.05),蛋白表达上调1.18倍(P<0.01).Ad-LPLwt组THP-1单核细胞向系膜细胞的趋化能力也强,为Ad-AP组的1.69倍(P<0.05).结论 活性型和非活性型LPL均能促进VLDL诱导的系膜细胞内三酰甘油的积聚,且活性型LPL起主要作用.在高VLDL条件下,LPL促进人系膜细胞转变为泡沫细胞,扩大VLDL对系膜细胞的促增殖效应,上调系膜细胞MCP-1的分泌及增加对THP-1细胞的趋化.LPL可能作为一个重要的因素参与富含三酰甘油的脂蛋白介导的肾损害的发生和发展.
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高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及其机制的研究
目的 研究高甘油三酯血清(HTS)对原代牛主动脉内皮细胞(BVEC)一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响及其可能机制.方法 采用Western印迹法从蛋白质水平检测高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞eNOS和一氧化氮(NO)活性的影响.在证实其效应的基础上.采用Western印迹法检测经HTS作用后,PKC-MAPK-MAPKK信号转导通路的改变.进一步从Ⅳ型高脂蛋白血症血浆提取极低密度脂蛋白(VLDL) (HTG-VLDL)并采用Western印迹法研究HTG-VLDL对eNOS的蛋白质表达的影响.结果 HTS以浓度依赖的方式抑制eNOS的蛋白质表达,减少一氧化氮的产生,并以剂量和时间依赖的方式促进MAPK的磷酸化.而经PKC、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,HTS对eNOS的蛋白质表达的抑制作用更明显;另外发现HTG-VLDL可抑制eNOS的蛋白质表达水平.结论 HTS抑制eNOS的蛋白质表达水平,可能部分通过HTG-VLDL对eNOS的影响.但未经PKC-MAPKK-MAPK通路.而且PKC-MAPKK-MAPK可能参与了eNOS正常的蛋白质表达,HTS增加MAPK的磷酸化水平有可能是一种细胞自身保护机制.
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快速琼脂糖电泳测定VLDL联合non-HDL的初步临床应用
目的 快速分析测定动脉粥样硬化性疾病患者空腹血清脂蛋白中VLDL的百分含量、观察非高密度脂蛋白(non-HDL)及脂肪餐后血清中三酰甘油(TG)、VLDL的变化.方法 使用SE-BIA MG300,自制琼脂糖凝胶平板,等电流电泳测定77例冠心病与脑梗死患者和62例健康体检者空腹血清脂蛋白中VLDL的百分含量,常规测定血脂,计算non-HDL(TC-HDL-c),并分析两组之间的差异.随机选取男女性患者各2例,给予脂肪餐进食,观察脂肪餐后1～6 h TG、VLDL的变化.结果 1)近1 h左右的区带电泳法非常简单、快速,VLDL%扫描低值与高值的批内CV为9.3%和5.3%.2)健康对照组中女性VLDL%显著低于男性[(10.5±5.8)%vs(14.7±9.3)%];其他差异表现为成年女性的HDL绝对值和在脂蛋白中所占的百分比都明显高于男性,apoA1也显著高于男性,而apoB100则低于男性水平(P<0.05).3)动脉粥样硬化性疾病组血清脂蛋白中VLDL的含量及non-HDL显著高于健康对照组,分别为(15.5±7.3)%vs(12.7±8.1)%,(3.26±0.93)vs(2.91±0.96)mmol/L,(P<0.05);表观血脂水平正常(三酰甘油小于2.2 mmol/L、总胆固醇小于5.7 mmol/L)的动脉粥样硬化性疾病患者血清TG、non-HDL、apoB、VLDL%、LDL%显著高于血脂正常的对照人群,而HDL、HDL%、apoA1显著降低,其中VLDL%与non-HDL分别为(14.4±5.7)%vs(10.9±4.6)%、(3.14±0.88)vs(2.74±0.91)mmol/L,(P<0.05).4)脂肪餐后血脂测定,其中3例TG、VLDL均在4 h左右达到峰值,而1例糖尿病患者TG、VLDL在2 h提前升高至峰值;脂肪餐后1～6h,2例男性VLDL变化与TG的改变趋势相同,但2例女性餐后VLDL改变与TG的变化未见明显相关性,且女性的TG代谢明显慢于男性.结论 1)男性相对于女性来说,HDL低而VLDL高,因此建议在临床关注non-HDL时,应分别列出男女性不同的参考范围.2)脂蛋白中高含量的VLDL是致冠状动脉粥样硬化性疾病的危险因素之一,且更需要关注表观血脂水平正常或接近正常人群的non-HDL,快速琼脂糖电泳测定VLDL%,提供了反映non-HDL的一项简单、直观的定量指标.
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γ-谷氨酰转移酶对肝炎、肝硬化、肝癌的诊断分析
目的:建立了可测定血清中与低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白结合的γ-谷氨酰转移酶(LDL-VLDL-GGT)活性的免疫沉淀法,探讨其在肝炎、肝硬化、肝癌疾病鉴别诊断中的意义.方法:以抗载脂蛋白B抗体为沉淀荆,沉淀血清中的LDL-VLDL-GGT并测定其活性.结果:血清LDL-VLDL-GGT对肝癌的诊断度高达88.9%,对于肝癌与肝硬化、肝癌与慢性肝炎之间的鉴别诊断特异性分别是76.3%和69.7%.结果:建立的免疫沉淀法检测血清LDL-VLDL-GGT活性对鉴别肝癌与其他肝病有重要意义.
