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肾移植慢性排异患者载脂蛋白B基因的多态性
肾移植术后慢性排异,是影响移植肾长期存活的关键。脂蛋白是影响肾移植慢性排异的因素之一[1]。载脂蛋白B(apo?B)基因是已知基因中具多态性的基因,它的变异可导致脂蛋白代谢紊乱及动脉粥样硬化。移植后,有进行性脂蛋白异常的患者,发生慢性排异的危险性升高,其脂蛋白图谱与动脉粥样硬化相似[2]。本研究采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术PCR-RFLP,就apo?B基因多态性与慢性排异的关系进行探讨。
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低密度脂蛋白与动脉粥样硬化
1 LDL的分型Krauss[1]和Austin[2]等用密度超速离心法或非变性聚丙乙烯酰胺凝胶电泳法将LDL分成许多亚组分.其中有重要临床意义的主要有三种:①主要的LDL亚类是低密度,较大颗粒LDL(直径>26.2nm),定为A型;②主要的LDL亚类是高密度,较小颗粒LDL(直径<25.5nm),定为B型;③两种LDL亚类都不占优势,中间密度LDL.小颗粒、致密的LDL占优势或其血浆水平升高,可导致心脑血管疾病的发生,并时常伴有极低密度脂蛋白(VLDL)在肝脏中的过度产生和高甘油三酯血症(TG)以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度的降低,被称为"致动脉粥样硬化脂蛋白图谱".但当LDL-C水平正常或在基线水平升高时,小密度LDL颗粒数量增加通常被忽视.
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图谱研究揭示蛋白质间交互作用链
一国际研究团队通过大规模蛋白图谱研究发现,有机生物细胞内的不同蛋白质间具有较深联系,正是它们间的相互作用促进了细胞和生物体的构建。而蛋白图谱的绘制,或可帮助科学家探寻导致人类错综复杂的各种疾病的根源。
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吉林西北部草原鼠疫菌外膜蛋白的研究
吉林西北部草原是处于达乌尔黄鼠鼠疫自然疫源地的一块特殊区域.该地区曾多次暴发过鼠疫,分离到的鼠疫菌,按我国纪树立鼠疫菌分型法属松辽平原A型[1].由于该地区的特殊性,为究明该型鼠疫菌某些分子生物学特征.我们检测了该地区鼠疫菌外膜蛋白图谱.结果如下.1材料与方法1.1材料1.1.1菌株选自该地区分离的鼠疫菌株,对其中18株鼠疫菌进行试验.菌株由全国鼠疫布氏菌病防治基地提供.1.1.2仪器高速离心机:KR-200FA型日本久保田制作所.超高速离心机:SCP85H日本日立工机株式会社.德国VP200S超声仪.BS423型稳流稳压电泳仪,北京生化仪器厂.DYY-Ⅲ20A型电泳槽,北京六一仪器厂.
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亲和磷酸蛋白组学——筛选LPS信号通路中调节蛋白的新方法
目的 建立并优化亲和磷酸蛋白组学方法,发现脂多糖(LPS)刺激Thp-1巨噬细胞所诱导的磷酸化蛋白图谱的差异,以初步筛选LPS通路中的新信号分子.方法 使用佛波酯刺激Thp-1单核细胞48 h使之分化成为成熟的巨噬细胞,静息48 h后,先后以等体积的培养基或100 ng/ml LPS刺激30min.采用PMAC富集磷酸化蛋白,经超滤除盐后进行二维凝胶电泳,比较对照组和LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异并挑选部分斑点进行质谱鉴定.结果 相对于对照组,LPS刺激的细胞(LPS组)中,29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出重复的差异.其中8个斑点发生了上调,并且新出现了7个斑点;10个发生了下调,并且消失了4个斑点.选择新出现或消失的蛋白斑点进行质谱测试,鉴定出其中4个,这些蛋白参与信号转导和宿主防御反应等,其中LPS刺激后,proteasome C2亚基的磷酸化显著上调,这与文献报道的结果相符合,证实了该方法的有效性,而Z-DNA-binding protein 1的磷酸化尚未见诸报道,需要进一步的验证和研究.结论 亲和磷酸蛋白组学方法是筛选信号分子的有效策略,可以广泛应用于信号通路的系统性研究.
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正常人眼小梁组织的二维凝胶电泳及质谱分析
[目的] 应用二维电泳和质谱对正常人眼小梁组织蛋白质组的进行初步分析.[方法] 采用二维凝胶电泳对正常人眼小梁组织进行蛋白分离和图像分析.分别用(7 cm×8 cm、13 cm×16 cm、18 cm×16 cm)3种不同尺寸大小凝胶分离蛋白,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点.[结果] 建立小梁组织蛋白样品处理及二维凝胶电泳的实验条件及方法,获得正常人眼小梁组织二维凝胶电泳蛋白图谱.3种不同尺寸大小凝胶的蛋白质分离斑点数分别为230个、875个、1213个.质谱鉴定出14个蛋白点.[结论] 完成人眼小梁组织蛋白质的二维电泳凝胶"标准"图谱并作质谱分析的方法性探索对同类研究具有参考意义,为分析小梁组织在青光眼发病过程中蛋白质表达改变研究提供了新的方法及途径.
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分子生物学技术在沙门菌研究中的应用
在迄今已发现的2200多种不同血清型的沙门菌属中,以伤寒沙门菌(S.Typhi)引起的伤寒热为严重,也是一些发展中国家引起伤寒暴发流行的重要病菌,已成为当前传染病防治工作中的重要问题.由于沙门菌属型别复杂,在传染来源的流行病学追溯中往往采用传统的病原分型方法进行,如血清学分型、噬菌体分型、生物学分型等方法,也采用了以大肠菌素产生情况而进行的分型,随后又发展了抗性分型、全菌蛋白图谱分型、生化指纹分型、脂多糖分型以及菌毛分型等研究,在伤寒现场防治工作中发挥了极其重要的作用.随着现代分子生物学理论和技术在生物学的多学科中的日益崛起和迅速发展,分子流行病学(Molecular epidmiology)方法也应运而生,同时也看到了有机地将分子生物学的理论和技术与流行病学研究结合起来,能发展一些灵敏、特异、应用广泛的现场流行病学分析方法之广阔前景,从中引起人们更迫切地欲从更深层次去了解病原体致病遗传背景与其引起疾病流行间的内在关系,并结合防治工作实际研究和发展了一系列的分子生物学技术和方法,取得丰硕成果.