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能够在高心律下同步产生心脏T1图像,动态影像以及预反转恢复图像的SALLI方法初始研究
目的 开发一种综合评估高心率小动物心功能和组织特性的MR成像方法.材料与方法 所有的动物实验研究均得到当地动物保护委员会批准.小动物Look-Locker反转恢复(SALLI)研究是在临床上配备了70mm电磁线圈的3.0T MR上实施的.SALLI包括,分段、心电门控以及多模重建体系的预反转恢复Look-Locker型脉冲序列.特别是暂时欠采样和径向非平衡稳态自由进动技术的应用,分别能加快数据采集速度及减少运动伪影的产生.采用9个琼脂糖凝胶体模研究不同序列的设置.在体研究中,10只SD( Sprague-Dawley)大鼠用于评估注射钆喷酸二甲葡胺前、后的正常T1值.7只采用外科法产生急性心肌梗死的大鼠用于测试心肌损伤检测的可行性.采用线性回归分析方法对离体组织T1的变化进行了研究,并对在体组织梗死区域与远端区域T1的差别以Wilcoxon秩和检验法进行检验.结果 体模研究阐述了T1测定的系统状态,并通过使用简单的线性校正算法使T1的误差减少到(1.3±7.4)%.增强前、后的心肌层及血液的T1值处于狭窄的正常范围内.SALLI展示了在梗塞区域内的运动功能减退(通过动态图像),心肌水肿(通过对比增强之前的T1图像)以及心肌坏死(通过对比用钆增强之后的T1图像以及延迟的钆增强图像).结论 该MR成像方法使高心率心肌T1图像、动态图像以及预反转恢复序列图像这三者同步生成成为了现实.对于在高心率下心肌T1图像变化、功能以及延迟的钆增强图像,可以用SALLI实现其同步性和时效性进行评价.
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血管紧张素转移酶基因缺失型与妊娠高血压综合征的关系
对妊娠高血压综合征(PIH)孕妇的ACE基因分布进行初步研究,以探讨PIH遗传倾向的分子生物学基础.1.研究对象:PIH组60例,年龄24~33岁,平均27.8岁,其中重度18例,中度20例,轻度22例,按乐杰主编<妇产科学>第四版诊断标准分类.对照组110例,以随机原则,抽取健康孕妇,年龄23~30岁,平均25.7岁.两组孕妇均为单胎、初产,既往无高血压、心脏病和肾病史.2.方法:用新鲜全血(EDTA-2NA抗凝)3 ml,取富含白细胞层,蛋白酶消化白细胞,后用盐析法,冷乙醇提取絮状DNA.采用PCR技术检测血管紧张素转移酶基因的多态性,引物为5′- CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT -3′及5′- GATGTGGCCATCACACATTCGTCAGAT- 3′.扩增产物在含有0.5 μg/ml 溴乙锭的2% 琼脂糖凝胶中电泳,紫外灯下观察(图1).
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乙型肝炎病毒免疫吸附柱构建的实验研究
根据免疫学原理,结合血液净化学理论,将人抗-HBs-IgG结合于活化琼脂糖凝胶上,构建了抗-HBs-IgG免疫吸附柱, 并在体外观察了其对含HBV和HBsAg 血浆的吸附作用.该项技术已申报了国家发明专利(申请号: 03110948.9).
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内蒙籍汉族儿童过敏性紫癜多器官损害与HLA-DQA1基因的关联性
我们收治儿童过敏性紫癜(AP)累及关节、胃肠、肾、心、肝、肺、脑中2个或2个以上器官受损的多器官损害44例,男23例,女21例,平均发病年龄8.91岁±2.57岁。诊断和器官损害标准符合实用儿科学有关章节。另选90名健康儿童作为对照组,男46名,女44名,平均年龄8.86岁±4.39岁。两组研究对象均为祖籍三代居住内蒙,无血缘关系和风湿性疾病及其家族史。以经典饱和酚/氯仿法从静脉血中提取DNA。应用PCR-SSP技术进行HLA-DQA1等位基因型别分析(方法见:Olerup等.应用PCR-SSP进行HLA-DQA1和DQB1基因分型.组织抗原杂志,1993)以β珠蛋白为内对照物。PCR条件为:预变性92℃ 2min;变性92℃ 30s;退火61℃ 45s;延伸70℃1min;共32个循环,后于70℃,延伸10min。扩增产物在琼脂糖凝胶上电泳,经紫外光透射检出DNA条带,确定其基因型,并分别出基因频率。各组间基因频率比较采用卡方或Fisher检验。当P<0.05时,依Woolf公式计算出相对危险率RR以及病因分数EF和预防分数PF。
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尿蛋白琼脂糖凝胶普通电泳的临床应用
目的 做尿蛋白琼脂糖凝胶普通电泳,分析其图谱类型并应用于临床.方法 采用SPIFE3000全自动电泳仪(helena)及其配套试剂,检测1 645例尿蛋白,将所有电泳图谱进行总结分析,并与SDS-PAGE图谱比较,结合临床资料,以判断普通电泳的尿蛋白类型.结果 根据电泳图谱可基本上分出Ⅰ~Ⅶ类尿蛋白,第Ⅰ类仅单一白蛋白(ALB)区带;第Ⅱ类ALB占80%以上,α1、β1和γ区带分别<3%、<7%和<6%,无α2区带;第Ⅲ类ALB占50%或以下,α2和β1均可达10%~15%以上;第Ⅳ类ALB占60%以下,α1、α2、β1和γ区带齐全且某个或多个区带不均一,可出现β2区带;第Ⅴ类仍以ALB为主,但α1、α2、β和γ区带无规律;第Ⅵ和Ⅶ类不以白蛋白为主,第Ⅵ类ALB低于30%,且除ALB外各区带均明显,并可等于或大于ALB;第Ⅶ类在β到γ区带有显著增高的1~2条孤立窄区带.结论 第Ⅰ~Ⅶ类电泳图谱的尿蛋白类型分别为白蛋白尿、选择性肾小球性蛋白尿、非选择性肾小球性蛋白尿、混合性蛋白尿、难确定是混合性还是肾小球性蛋白尿、肾小管性蛋白尿以及溢出性蛋白尿,尿蛋白普通电泳能客观地得到尿蛋白全貌,判断出约90%病例的尿蛋白类型.
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毛细管电泳法分离血清中乳酸脱氢酶同工酶
目的利用还原型辅酶I(NADH)在340 nm波长处特异性吸收峰,建立用毛细管区带电泳在线检测人血清中乳酸脱氢酶 (LDH) 同工酶的方法.方法实验中采用未涂层毛细管,长60 cm,内径75 μm,pH 9.4(23 ℃) 二氨基二甲基1,3丙二醇(AM2P)缓冲液含20 mmol/L氧化型辅酶I(NAD+ )、51.6 mmol/L乳酸锂.结果在25 min内完成电泳分离,乳酸脱氢酶同工酶1(LDH1)、乳酸脱氢酶同工酶5(LDH5)纯品各自均可得到较好峰形,而且LDH1、 LDH5纯品的混合物亦可得到完全分离,在分析正常人血清与肝癌患者血清时,其结果与美国Helena公司REP全自动琼脂糖电泳结果一致,取得满意效果.结论该法快速、低耗,具有较好的推广应用价值.
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对一例5岁患儿M蛋白的血清免疫学分析
患儿男,5岁.于1997年因关节疼痛伴全身淋巴结肿大,病理诊断为恶性淋巴瘤.2000年8月,因关节疼痛伴发热,作淋巴结活检为反应性增生,骨髓涂片检查(BM)提示:见异常淋巴细胞.患儿于2001年2月到本院门诊就诊.膝关节片显示:右胫骨上段溶骨性破坏.BM提示:增生性骨髓象.血象:WBC 4.1×109/L,HB 107 g/L,PLT 219×109/L.生化:血清球蛋白58 g/L,经琼脂糖凝胶蛋白电泳(法国HYDRASYS Sebia)可见γ 34.6%,并且呈现单株峰.继续进行免疫固定电泳,出现双M蛋白: IgM伴λ轻链型和IgG伴λ轻链型.免疫球蛋白定量(Behring BN100 散射比浊法) IgG 8.7 g/L、IgA 1.2 g/L、IgM 37.7 g/L、κ 1.1 g/L、λ 9.2 g/L.显示M蛋白所属Ig部分显著增高,非M蛋白所属Ig部分并无显著降低,再经流式细胞仪作白细胞分化抗原(CD)分型,结果为CD19(-)、CD20(-),进一步提示了此阶段B细胞已成熟至浆细胞.
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人血管能抑素canstatin基因的分子克隆
目的:克隆血管能抑素canstatin基因,测定并分析其基因序列.方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出canstatin基因,克隆进载体pUCm-T获得重组质粒pUCm-T/canstatin,转化E.coliDH 5α,挑选出阳性克隆,测定基因序列.结果:从人胎盘组织中提取出RNA,10 g/L琼脂糖凝胶电泳显示3条清晰条带,分别对应28 S,18 S,5 S.分光光度计测定总RNA的A260=0.879,A280=0.410,A26:A280=2.095,总RNA浓度为1.8 g/L.RT-PCR扩增产物与预期的目的基因canstatin长度一致.RT-PCR产物与载体pUCm-T连接过夜后,转化E.coliDH5α,在LB平板上生长出蓝色和白色菌落.挑选6个白色菌落做酶切鉴定,其中一个菌落经BamHI酶切后,只出现l条特异性条带,位置与酶切前质粒相近,而经HindⅢ酶切后,出现2条特异性条带,其中l条与酶切前质粒位置相近,另l条与目的基因位置基本一致,证实为阳性克隆.测定该阳性克隆基因序列,结果显示其与Genbank中公布的canstatin基因序列完全一致.结论:成功克隆了canstatin基因,为进一步研究其抗肿瘤作用打下基础.
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一种乙型肝炎病毒免疫吸附柱的构建
目的 构建乙型肝炎病毒免疫吸附柱.方法 以琼脂糖凝胶为载体,经活化后键合人抗-HBs-IgG.构建流程为:环氧介质的合成、氨基介质的合成、醛基介质的合成、免疫吸附介质的合成、未反应醛基的封尾、装柱.体外观察其对含HBV和HBsAg血浆的吸附作用.结果 活化琼脂糖凝胶与抗-HBs-IgG的键合率为85.07%,患者血浆体外吸附实验结果表明,该免疫吸附柱可吸附、除去离体血浆中58.97%的HBsAg和53.1%的HBV颗粒.结论 乙型肝炎病毒免疫吸附柱可吸附除去离体血浆中部分HBsAg和HBV颗粒.
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磷酸铝灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床观察
磷酸铝凝胶是一种含有磷酸铝凝胶、天然琼脂糖凝胶及果糖凝胶的一种凝胶剂,它具有强大的粘膜被覆作用,是广泛性胃肠粘膜保护剂.本研究采用磷酸铝凝胶保留灌肠,以局部用药的方法治疗溃疡性结肠炎,报告如下.
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Alpha Imager EP凝胶成像系统故障维修
凝胶成像系统是分子生物学常用仪器,在医院临床检验和科研开发中发挥着重要的辅助作用[1].其主要是对电泳后的琼脂糖凝胶中的核酸在紫外灯管下的影像进行采集,并进行图像保存与定性分析[2].我院于2008年购进1台Al-pha Imager EP凝胶成像系统,此机器操作简便、图像清晰,并可以进行核酸半定量分析[3].现将1例故障排除方法介绍如下,供参考.
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单个细胞凝胶电泳分析在范可尼贫血诊断中的应用
目的 报告1例经单个细胞凝胶电泳(SCGE)证实存在DNA断裂的范可尼贫血(FA)患儿,探讨SCGE作为FA实验诊断依据之一的可行性.临床资料4岁10个月患儿,双侧拇指畸形、隐睾、右侧小睑裂和右眼内斜视等多种先天异常.自3岁2个月始,发现血小板减少和贫血.确诊为FA.方法 和结果SCGE分析患儿及其父母外周血单个核细胞DNA断裂.患儿及其父母外周血单个核细胞中,彗尾阳性细胞的比例分别为100%、90%和52%,而正常同龄对照的分别仅为2%和5%.患儿及其父母的SCGE各参数均明显高于对照(P<0.01).患者有微核细胞高达6.74%,而正常仅为0.40%.结论 SCGE证实该FA患儿存在DNA断裂,提示SCGE可以作为FA实验诊断依据之一.
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肾病患者血清蛋白电泳图谱分析
目的 应用血清蛋白电泳分析肾病患者血清蛋白成分的变化,为临床肾病的诊断提供可靠的依据.方法 利用琼脂糖凝胶电泳分析仪检测65例肾病患者和75例健康人的血清蛋白成分,并对两组人群的血清蛋白成分进行分析.结果 肾病患者组蛋白电泳区带中的白蛋白、α1、α2、β四个区带百分比与健康组比较差异有高度统计学意义(P<0.001).实验组γ球蛋白百分比与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 血清蛋白电泳的测定对肾病患者的诊断、治疗及预后有十分重要的意义.
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100例待产妇血清蛋白电泳图谱分析
目的 应用血清蛋白电泳分析待产妇与育龄未孕健康女性的血清蛋白成分特点,了解待产妇血清蛋白电泳图谱的改变.方法 利用琼脂糖凝胶电泳分析仪检测100例待产妇(实验组)和75例育龄未孕健康女性(对照组)的血清蛋白成分,同时用日立7060全自动生化分析仪检测两组人员总蛋白.结果 实验组总蛋白浓度及白蛋白百分比与对照组比较显著降低,α1、α2、β球蛋白百分比与对照组比较显著增高,差异均有高度统计学意义(P<0.001).实验组γ球蛋白百分比与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 待产妇血清蛋白电泳图谱的改变主要表现在总蛋白浓度和白蛋白比例降低.▓α1、α2、β球蛋白比例升高而γ球蛋白比例无变化.血清蛋白电泳对待产妇血清蛋白成分的分析有一定临床价值.
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从琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA方法的总结
在分子生物学实验的操作中,许多情况下要利用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳观察、纯化和回收DNA片段。DNA片段回收是其中的重要步骤,根据实验的目的不同,回收的DNA可用于载体连接、基因重组、序列分析、探针制备等后续工作。 DNA回收技术操作简单而迅速,并且能分离用其他方法(如密度梯度离心等)不能满意分离的DNA片段。在实际工作中,根据实验需求,准确、简便、快速、经济的DNA片段回收方法更受操作者的青睐。现总结从凝胶中回收DNA常用的方法,不需要特殊的仪器和试剂。
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环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶及其动力学分析
[目的]探索环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶的佳反应条件,建立活化反应动力学模型.[方法]研究了活化反应中氢氧化钠、环氧氯丙烷和硼氢化钠的浓度以及反应温度、时间和溶剂对活化反应的影响.通过测定活化反应中环氧基的浓度,计算反应的活化度,以确定环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶的佳反应条件.对影响活化反应的主要因素进行分析,建立活化反应动力学模型.[结果] 环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶的佳反应条件为:5 g琼脂糖、7.5 mL 0.8 mol/L 氢氧化钠、2 mL环氧氯丙烷以及10 mg硼氢化钠于25℃反应8 h.根据活化反应动力学模型推导出了反应过程的宏观动力学公式.[结论] 对影响活化反应的主要因素进行了分析,确定了环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶的反应条件.将琼脂糖凝胶活化实验结果与动力学公式计算结果相比较,发现二者基本一致.
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血脂及脂蛋白常用检测指标的临床意义
20世纪50年代,人们逐渐认识到血脂水平与动脉粥样硬化(AS)之间的密切关系,且血清脂类主要有胆固醇(包括游离胆固醇和胆固醇酯)和甘油三酯(TG),故当其中一种或几种脂类升高均称为高脂血症,并将高脂血症分为高胆固醇血症、高甘油三酯血症和混合型三大类.60年代,明确了血浆脂质是以脂蛋白的形式存在,血脂的异常必然反映为血浆脂蛋白的异常,临床上逐渐用高脂蛋白血症代替高脂血症.目前常用的测定血浆脂蛋白的方法有两种:超速离心法和电泳法.超速离心法是根据脂质和蛋白质密度和比例的差异,将血浆脂蛋白分为4大类:乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL).电泳法的分类基础是依据脂蛋白分子在电场中的迁移率,在常用的以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳中,也可将脂蛋白分为四大类:分别为CM、β脂蛋白、前β脂蛋白和α脂蛋白.以临床表现型为基础分为六型,以I、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ和V来表示.
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人转化生长因子-β1基因克隆、测序及真核表达载体的构建
目的 克隆人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因编码区cDNA序列,构建并鉴定TGF-β1真核表达载体.方法 设计含有EcoRⅠ和XholⅠ酶切位点的TGF-β1cDNA引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,以人白细胞mRNA为模版,扩增TGF-猹1基因,纯化PCR产物,TA克隆,双酶切与pcDNA3质粒表达载体连接,转化感受态大肠杆菌JM109,酶切鉴定阳性重组子,并进行序列测定.结果 琼脂糖凝胶电泳显示,用双酶切后形成分子量1.2kb的条带,符合物理图谱,表明表达载体构建成功,序列测定结果与预测结果完全一致.结论 成功克隆了TGF-猹1基因,并成功地构建了真核表达载体pcDNA3-TGF-β1.
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鼠伤寒沙门氏菌耐药质粒的研究
1982年10~11月在上海暴发流行期收集的45株鼠伤寒沙门氏菌流行株中,对氨苄青霉素、氯霉素、四环素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、氧哌嗪青霉素和复方SMz-TMP的耐药者占73.3%,对5种或5种以上抗菌药物耐物药者占93.7%;而同期从带菌者中分离的9株鼠伤寒沙门氏菌非流行株中仅工株为多重耐药株.接合转移和转化试验证明,细菌的多重耐药性乃耐药(R)质粒(抗性或耐药质粒)所介导,25%在五质粒可将其耐药性转移给大肠杆菌KRif/12,转移频率为10-4~10-6.琼脂糖凝胶电泳显示:流行株的质粒谱相似+均有5~6个质粒带,其中大质粒与多重耐药性有关;而非流行株仅有一个质粒带.
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慎重判读乙型肝炎病毒血清免疫学标志物
1963年,美国医学家Blumberg将一例反复输血的血友病患者与一名澳大利亚土著居民的血清标本做琼脂糖凝胶扩散试验,意外地发现了沉淀带.进一步研究证实形成沉淀带的抗原就是HBsAg,当时被称为"澳大利亚抗原",简称"澳抗".这一经典的、以抗原抗体反应为基本原理的免疫凝集试验,是发现HBV的重要基础.Blumberg因此在1976年被授予诺贝尔医学和生理学奖.