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肠炎沙门菌质粒与沙门菌疾病关系的研究
本文就沙门菌耐药质粒和毒力质粒与沙门菌引起的食物中毒和医院内感染关系进行探讨,以求为预防和控制沙门菌病提供依据.
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伤寒杆菌耐药质粒pRST98介导细菌毒力的研究
目的研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98能否介导细菌毒力。方法将pRST98导入鼠伤寒杆菌低毒株RIA，经口和腹腔感染小鼠，测定半数致死量(LD50)；口饲细菌后检测在体内播散、繁殖及引起脏器的组织学改变；在体外对其进行细胞的粘附和侵袭试验。分别用含pRST98的野生伤寒杆菌、消除pRST98的突变体菌株及pRST98再重新导入突变体的菌株，研究对人、兔及豚鼠血清杀菌的抵抗力。结果导入pRST98的鼠伤寒杆菌口服和腹腔注射组LD50比阴性对照分别降低约700倍和75倍；在小鼠肠系膜淋巴结、脾和肝脏内增殖（P<0.05）并引起脏器严重病变；但在体外不影响鼠伤寒杆菌对HEp-2、CHO和HeLa细胞的粘附和侵袭。携带pRST98的伤寒杆菌在血清中的抵抗力显著高于无此质粒的菌株（P<0.05）。结论伤寒杆菌耐药质粒pRST98不但介导对药物的抗性，同时还能使宿主菌的毒力增强。
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伤寒杆菌耐药质粒pRST98毒力基因的研究
目的研究多重耐药伤寒沙门菌耐药质粒pRST98是否具有沙门菌属其他致病菌毒力质粒上的保守基因spv. 方法用QIAGEN试剂盒提取pRST98,精确定量后选用8种限制性核酸内切酶消化,建立该质粒的酶切图谱.用spv特异引物的PCR扩增和spv探针Southern blot法分析pRST98的基因构成. 结果 pRST98酶切图谱显示BglⅡ、PstⅠ和SacⅡ作用后片段均一,是对该质粒进行分子生物学和分子流行病学研究的理想工具.PCR和Southern blot结果显示,伤寒杆菌耐药质粒pRST98上存在其他沙门菌毒力质粒上高度保守基因spv的同源序列. 结论从基因水平首次证实伤寒杆菌耐药质粒pRST98具有多效性,是既编码抗药性又编码细菌毒力的"嵌合型"质粒.
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分子流行病学在细菌耐药性研究中的应用
流行病学方法在细菌耐药现象研究传统意义上的应用是通过监测、观察以及分析和实验研究等方法来明确耐药细菌分布的规律及其影响因素，借以探讨耐药细菌的流行与传播规律，并为制订预防和控制措施提供科学依据。尽管存在一些不足，此类研究结果在帮助人们认识耐药细菌的传播与流行规律中仍发挥了重要作用［1-2］。与此同时，还有许多研究探讨了不同分子型别耐药细菌以及与细菌耐药性相关的各种因子（如耐药质粒、耐药基因、相关基因组件等）的分布、作用方式与程度、传播规律及其影响因素等问题，即有关细菌耐药性的各种问题。此类研究能够揭示细菌耐药性在耐药细菌中（或间）的存在现状、发生发展和相互传播的规律。将此类研究与耐药细菌流行病学研究（细菌耐药监测和耐药细菌传播相关因素分析等）相结合可构成有关细菌耐药现象的多层次流行病学（ multilevel epidemiol-ogy），涵盖相关的人群特征、细菌群个体或克隆特征、耐药质粒、耐药基因以及相关的移动组件特征等［3-4］。有关细菌耐药性的流行病学研究按照研究内容可分为两大类：一类是通过各种分子分型方法对耐药细菌的分布、传播规律等问题进行流行病学分析，通常被称为耐药细菌的分子流行病学研究［5］。另一类是研究与细菌耐药性相关的各种分子（如质粒、耐药基因以及与其相关的调控基因等）的分布及其与细菌耐药性发生发展过程的关系和影响因素，也就是对与细菌耐药性相关的各种分子进行分布与传播规律等方面的流行病学研究［6］。本研究尝试就以上两类研究进行简单综述，借以与相关领域内的同行们进行探讨。
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淋病奈瑟菌TetM耐药基因的检测及质粒介导耐药性的分析
目的建立淋病奈瑟菌TRNG株的PCR检测方法并对淋病奈瑟菌质粒介导的耐药性进行调查与分析。方法通过特异的引物设计，行PCR扩增、电泳，可以检测出淋病奈瑟菌的TRNG株。同时通过琼脂稀释法检测153株淋病奈瑟菌对青霉素及四环素的MIC值。结果 153株淋病奈瑟菌中，通过小抑菌浓度测定为TRNG株的83株菌，其PCR法结果均为阳性，其余为阴性。用质粒总量或菌悬液作为检测模板，其低检出率分别为0.1pg和100个菌细胞。淋病奈瑟菌质粒介导的耐药性调查显示：质粒介导的耐药率为87%，其中PPNG 71%，TRNG 54%，PPNG/TRNG 39%。PPNG/TRNG株已成为成都地区主要流行菌株。结论 TRNG株PCR检测方法具有很高的特异性和灵敏度。与传统方法相比，其简便、快速、准确，可以在一般实验室运用。成都地区质粒介导的耐药性保持高水平并呈上升趋势，应该引起有关部门的高度重视。
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多重耐药不动杆菌临床菌株中整合子的基因分析
多重耐药质粒的演变与抗菌药物耐药决定子特定位点的整合子有关.根据整合酶的不同有4类整合子,临床分离株中常见1类整合子.本研究是检测多重耐药不动杆菌分离株中1类、2类整合子的情况,以调查不动杆菌的分子流行病学.
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诱导型AmpC酶和结构型AmpC酶的检测与产酶菌株感染的治疗进展
在细菌耐药机制中,耐药酶扮演着极其重要的角色,其中AmpC酶在革兰阴性杆菌耐药机制中的地位日渐突出,特别是质粒型AmpC酶的出现,使AmpC酶获得了与ESBLs相同的进化背景,使其可以在相同菌种间甚至不同菌种间将耐药质粒相互传播,从而使人类对抗AmpC酶的斗争更加艰难[1-3].AmpC酶属Bush1型酶或AmblerC类酶,是不被克拉维酸抑制的"丝氨酸"头孢菌素酶,主要存在于肠杆菌,枸橼酸杆菌,粘质沙雷菌,摩根摩根菌,铜绿假单胞菌等菌属中.AmpC酶可分为诱导型、结构型、质粒型[4] .本文将着重阐述诱导型AmpC酶与结构型AmpC酶在检测方法和临床治疗上的差异.
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抗感染治疗中值得注意的几个问题
近年来,大量广谱抗生素的过量使用甚至滥用造成了选择性压力,细菌为适应生存环境可发生突变(包括核苷酸缺失、替换或插入),当突变菌株具备生存优势,可在有抗生素的环境下生存,即对该抗生素产生耐药.耐药基因可由染色体编码,也可由质粒介导,耐药基因可垂直传给子代;更重要的是抗生素耐药基因可在不同细菌菌种间、属间进行水平传播.多个耐药质粒或染色体的基因盒还可组装在一起,产生多重耐药菌,给临床治疗带来重重困难.当前,细菌耐药趋势日益严重成为全球关注的焦点,备受关注的有产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和染色体介导的Ⅰ类β-内酰胺酶(AmpC诱导酶)的革兰阴性杆菌;耐甲氧西林葡萄球菌(MRS), 耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)和耐万古霉素的肠球菌(VRE)等革兰阳性球菌,都给临床治疗感染带来麻烦.
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产青霉素酶淋病奈瑟球菌耐药质粒的提取与酶切分析
目的了解产青霉素酶淋病奈瑟球菌(PPNG)在本地区的分布状况及其耐药质粒的限制性核酸内切酶长度多态性分析. 方法用碘量法筛选PPNG株,碱变性法进行质粒抽提,回收7.4kb及5.4kb质粒进行酶切分析. 结果 68株临床分离株筛选出PPNG菌3株,经限制性核酸内切酶长度多态性分析,PPNG菌7.4kb及5.4kb质粒含有BamHⅠ的双酶切位点, 7.4 kb质粒含有PstⅠ及HindⅡ单酶切位点. 结论 PPNG菌株的筛选及耐药质粒的酶切分析为追踪耐药菌株的流行趋势提供了流行病学信息.
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医院感染中金黄色葡萄球菌耐药质粒的同源性分析
目的 了解不同医院不同科室金黄色葡萄球菌(SAU)耐药质粒流行状况,分析菌株间的同源性,为控制医院感染流行提供依据.方法 采用药敏分析、质粒消除实验、质粒图谱及限制性内切酶图谱等技术对医院感染SAU耐药质粒进行同源性分析.结果 从两所省级医院不同科室196份标本中分离到SAU 15株,分离率为7.7%;检出菌对所用抗菌药物的耐药率为86.7%.有13.3%的菌株仅耐1种药,对≥3种抗菌药物耐药的有46.7%;在15株分离菌中12株检出质粒,检出率为80.0%;所有菌株均有38 kb的大质粒,提示该质粒是医院SAU的流行质粒;对11株携带质粒的耐药SAU进行质粒消除,除2株菌的耐药性始终未变化外,其余9株的耐药性有不同程度地改变,其中3株耐药性全部消失,其余菌株的耐药性仅有部分改变;大小相同的耐药质粒经EcoRI酶切后发现同一科室菌株的耐药质粒有相同的DNA片段,不同科室菌株间也有相似的酶切图谱.结论 医院病房存在流行耐药质粒,不同科室有不同的质粒流行,各科室菌株间有一定的同源性.
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社区及医院感染中产β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌细菌耐药性及质粒分析
目的探讨社区和医院感染中产ESBLs的大肠埃希菌(ECO)和肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及细菌质粒谱特点. 方法药敏试验采用改良Kirby-Bauer法,细菌质粒DNA采用碱变性少量快速提取法,用χ2检测. 结果医院感染ECO耐药率明显高于社区感染(P＜0.001),ECO细菌质粒较KPN分子量大,表现多源性、多样性、分布较广,仅在ECO中发现3对同源基因质粒谱. 结论医院感染致病ECO有多源多样的细菌耐药质粒,为医院感染顽固的耐药菌,应加强医院感染易感因素控制,以防感染流行.
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淋病奈瑟氏菌的耐药性及耐药质粒的研究现状
淋病是我国目前常见的性传播疾病之一.随着抗生素的广泛使用,淋病奈瑟氏菌的耐药性也越来越严重.该文就淋病奈瑟氏菌的耐药现状、耐药质粒的研究进展做出综述.显示:淋病奈瑟氏菌的耐药除可由染色体介导外,更主要是由质粒介导;研究较多的质粒携带的耐药基因是TEM-1基因和TetM基因;常用核酸杂交法和聚合酶链反应进行耐药基因的检测.
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临床药师参与泛耐药菌肺部感染治疗
目的:探讨中药辅助抗菌药物治疗泛耐药菌肺部感染的临床疗效.方法:对曾使用过多种抗菌药物治疗>7 d无效,并经连续3次以上合格痰标本培养后确诊为相同泛耐药菌株的23例肺部感染住院患者,采用具清热祛痰、补中益气功效且含有消除耐药质粒的中药方剂辅助抗菌药物治疗;对于鲍曼不动杆菌感染者,采用头孢哌酮舒巴坦联合米诺环素治疗;对于铜绿假单胞菌感染者,采用美罗培南治疗.结果:痊愈7例,有效9例,好转1例,无效6例,总有效率为73.91%.治疗前后临床症状、实验室检查得到显著改善.结论:具清热祛痰,补中益气功效且含有消除耐药质粒的中药方剂结合适宜的抗菌药物可以治疗泛耐药菌肺部感染.
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586株细菌的分离培养及药物敏感试验
由于抗生素的广泛应用及医院内源性感染,细菌的结构发生突变,耐药质粒延续传递,使耐药菌株不断增加.现就我院1997年送检的863份各类标本的分离培养及535株细菌的药物敏感试验结果报道如下.
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临床分离48株铜绿假单胞菌的耐药性分析及其耐药质粒检测
目的:分析探讨临床分离铜绿假单胞菌的耐药性及其耐药质粒的具体情况.方法:应用K-B法对从临床病例分离的48株铜绿假单胞菌进行药敏实验,提取或检测铜绿假单胞菌的耐药质粒时应用碱裂解法.结果:通过研究可确定敏感性较好的抗生素及其敏感率分别为:妥布霉素(83.33%),丁胺卡那霉素(79.17%),环丙沙星(72.92%);耐药性较高的抗生素及其耐药率分别为:复方新诺明(87.50%),呋喃妥因(75.00%),氨苄青霉素(72.92%);提取其中8株多重耐药菌株的质粒后可发现,有4株菌携带质粒DNA,大小为23~25kb,对质粒进行消除实验后可得出铜绿假单胞菌的多重耐药性与其携带的质粒有关.结论:在消灭铜绿假单胞菌时,不宜采用复方新诺明、呋喃妥因、氨苄青霉素等抗生素;耐药质粒是导致铜绿假单胞菌具有高度耐药性的原因,且传播性大.
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医院感染中大肠埃希菌耐药质粒的同源性分析
目的 了解不同医院不同科室大肠埃希菌耐药质粒流行状况,分析菌株间的同源性,为控制院内感染流行提供依据.方法 采用药敏分析、质粒消除实验、质粒图谱及限制性内切酶图谱等技术对医院感染大肠埃希菌耐药质粒进行同源性分析.结果 从2家省级医院不同科室196份标本中分离到E.coli 25株,分离率为12.8%.检出菌对抗生素的耐药率为76.0%,有28.0%的菌株仅耐1种药,对3种及3种以上抗生素耐药的有32.0%.在25株分离菌中19株检出质粒,检出率为76.0%.所有菌株均有24.8 kb质粒,提示该质粒是医院致病性大肠埃希菌的流行质粒.对13株携带质粒的耐药大肠埃希菌进行质粒消除,除1株菌的耐药性始终未变化外,其余12株的耐药性有不同程度地改变,其中7株耐药性全部消失,5株仅有部分改变.大小相同的耐药质粒经EcoR Ⅰ酶切后发现同一科室菌株的耐药质粒有相同的DNA片段,不同科室菌株间也有相似的酶切图谱.结论 医院病房存在流行耐药质粒,不同科室有不同的质粒流行,各科室菌株间有一定的同源性.
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超广谱β-内酰胺酶细菌检测方法及与耐药质粒关系研究
目的:建立一种准确、快速、低廉的检测超广谱β-内酰胺酶(ESBL)细菌方法.方法:以克拉维酸为ESBL的抑制剂、3种第三代头孢菌素(TGC)和氨曲南为底物、某些药敏结果为补充,建立了多底物协同方法,并与E-test方法进行了对照,符合率80%,不符合菌株用质粒提取、细菌转化、接合传递试验进行验证.结果:对116株疑产ESBL细菌用多底物协同方法和E-test方法同时检测,前者比后者阳性率高.结论:该方法准确、快速、价格低廉,特别适于常规应用.
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超广谱β-内酰胺类抗生素的耐药性与耐药质粒介导
目的:观察超广谱β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐药质粒的关系,探讨耐药质粒在细菌之间传递的方式.方法:(1)配制耐药质粒提取试剂;(2)对LB细菌培养液进行耐药质粒的提取与检测;(3)对从12株ESBL细菌中提取的质粒进行质粒转化、质粒接合传递及药敏试验.结果:(1)此12株ESBL细菌中提取的耐药质粒进行电泳显示此质粒较大,约20.0 kb.(2)质粒转化后,其转化子对β-内酰胺类抗生素全部耐药,对氨基糖甙类、喹诺酮类和磺胺类全部敏感.质粒结合传递体的耐药谱与以上相同.结论:β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐药质粒介导密切相关,耐药质粒能把耐药基因传递给其他细菌,在细菌之间相互传递.
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肺心病假单孢菌感染的现状及耐药与耐药质粒的研究
以绿脓杆菌(PA)为代表的假单孢菌群属条件致病菌,其耐药性的增加成为治疗的难题,现将贵州省肺心病感染本菌的现状及耐药性与耐药质粒的研究报告如下.
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呼吸机相关肺炎病原菌超广谱β-内酰胺酶的检测
目的:研究呼吸机相关肺炎(ventilator-associated pneumonia,VAP)病原茵来源、分布特点及医院内产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β lactamases,ESBLs)细茵的流行特征.方法:采用保护性双套管标本刷(protected specimens brush,PSB)收集76例机械通气(mechanical ventilation,MV)患者下呼吸道分泌物,进行细茵定量培养及抗生素敏感性测定,同时用E-Test法对G-杆茵产生ESBLs进行检测及质粒酶切图谱进行监测.结果:VAP病原茵以G-杆茵为主,占92.3%.在所测试的10种抗生素中,亚胺培南耐药率低(11.1%),而其它β-内酰胺类抗生素耐药率都在60%以上.36株G-杆菌中检出产ESBLs细茵9株,主要由肠杆菌科细茵产生,产酶株组均不同程度表现为多重耐药,但对亚胺培南无一耐药.5株来源于RICU产ESBLs肺炎克雷伯氏茵经质粒酶切图谱分析证实为同一克隆起源.结论:VAP主要是由G-杆菌引起,细菌耐药率普遍较高,质粒在耐药茵的传播中起重要作用.
