首页 > 文献资料
-
血管紧张素转移酶基因缺失型与妊娠高血压综合征的关系
对妊娠高血压综合征(PIH)孕妇的ACE基因分布进行初步研究,以探讨PIH遗传倾向的分子生物学基础.1.研究对象:PIH组60例,年龄24~33岁,平均27.8岁,其中重度18例,中度20例,轻度22例,按乐杰主编<妇产科学>第四版诊断标准分类.对照组110例,以随机原则,抽取健康孕妇,年龄23~30岁,平均25.7岁.两组孕妇均为单胎、初产,既往无高血压、心脏病和肾病史.2.方法:用新鲜全血(EDTA-2NA抗凝)3 ml,取富含白细胞层,蛋白酶消化白细胞,后用盐析法,冷乙醇提取絮状DNA.采用PCR技术检测血管紧张素转移酶基因的多态性,引物为5′- CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT -3′及5′- GATGTGGCCATCACACATTCGTCAGAT- 3′.扩增产物在含有0.5 μg/ml 溴乙锭的2% 琼脂糖凝胶中电泳,紫外灯下观察(图1).
-
基因功能的抑制
随着人类基因组测序工作的完成,人类基因组109碱基序列中具有功能的基因约3万个,其功能基因的序列已经明了,这些基因功能的研究正在轰轰烈烈的进行中.生物体内编码基因要执行其功能,需要经历DNA的复制、转录和翻译,即基因表达的过程.因而,要了解基因的功能,可以采用转基因、诱导突变观察基因缺失型的表现,进而推测它的功能;或是从基因的DNA、RNA或蛋白水平进行干预,抑制其表达,观察基因抑制后表型变化,研究其功能.转基因和诱导特异的基因突变效率低,相对而言,随着生物技术的发展,后一种方案就简单多了,因此生命科学研究中,出现了多种在DNA、RNA和蛋白水平上抑制某个或某些特定基因发挥功能的方法,而且这些方法也越来越多地应用于基因过度表达的疾病的治疗中.
-
两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究
目的建立简便快速准确可推广使用的检测α-地中海贫血(α-Thal) 右侧缺失型(-α3.7)和左侧缺失型(-α4.2)的聚合酶链反应(PCR)方法.方法自行研究设计两组引物.优化PCR反应条件.PCR反应产物用1%琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙啶染色,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱.结果运用引物A′、B′、C3进行PCR, 出现1 700 bp扩增带表示-α3.7, 出现1 900 bp扩增带表示α-珠蛋白基因正常或为野生型.二条扩增带同时出现表示是-α3.7缺失杂合子.无任何扩增带表示是东南亚型缺失纯合子.运用引物G′、E、F′进行PCR, 根据出现1 580 bp扩增带和1 180 bp扩增带可诊断为-α4.2,还可区分杂合子与纯合子.结论本研究设计的两组引物及优化的PCR条件,可以简便准确地检测出α-Thal标本中有无-α4.2和-α3.7.
-
基因芯片用于检测缺失型α地中海贫血
地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血,地贫)是我国长江以南发病率高、危害大的一种遗传病.我国南方地区常见的3种缺失型α地贫分别是由-α3.7、-α4.2和--SEA基因的缺失引起的.传统的缺失型α地贫基因分析检测方法主要是用Southern杂交、聚合酶链反应(PCR)法.但由于α地贫珠蛋白基因缺失型的不同所需试剂及反应条件也不同,须分别进行检测,给临床筛查及快速诊断带来不便;同时,全套检测的累加费用较高,给患者造成了一定的经济负担.近年来基因芯片技术的发展给疾病的基因诊断提供了广阔的应用前景.我们运用基因芯片技术,完成了40份已知基因分型血液样品的基因诊断,报道如下.
-
谷胱甘肽S转移酶M1基因缺失与喉癌易患性的相关性研究
目的:建立聚合酶链反应(PCR)方法检测谷胱甘肽S转移酶(GST)M1基因,并探讨GST M1基因缺失(无效基因型)与喉癌易患性的相关性.方法:观察组选择确诊的喉癌42例,正常对照组108例;取被检者外周静脉血白细胞,抽提制备脱氧核糖核苷酸(DNA);选择优化后的PCR反应体系和循环参数扩增GSTM1, 扩增后的基因产物用2%琼脂糖凝胶电泳, 紫外线灯下观察并记录结果.结果:(1)成功建立聚合酶链反应结合琼脂糖凝胶电泳技术检测GSTM1基因的方法.(2)喉癌组GST M1基因缺失率(71.4%)明显高于正常对照组(48.1%)显示两组之间差异存在显著性(χ2=6.61,P<0.05).结论:(1)聚合酶链反应是一种简单敏感,准确可靠的分析GST M1基因多态性的方法.(2)该地区GST M1基因缺失与喉癌的易患性相关联.
-
用mPCR检测江西籍三种常见的缺失型α-Thal基因
目的用单管多重聚合酶链技术(mPCR)检测江西省缺失型á-Thal基因.方法用单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术检测-SEA、-á3.7和-á4.2缺失型á-Thal基因.结果用mPCR技术可检测-SEA、-á3.7和-á4.2.12例江西籍á-Thal检出-á3.74例(33.3%)、-á4.22例(16.6%)、-SEA 1例(8.3%).三种突变占12例缺失型á-Thal基因57.9%.末定型6例.结论 mPCR是一种简单、省时、经济、准确的检测3种常见á-Thal缺失基因的方法.
-
Nox2来源的活性氧促进小鼠诱导性多能干细胞向动脉内皮细胞分化
目的:活性氧( ROS)调节诱导性多能干细胞( iPSCs)向内皮细胞分化的分子机制还不清楚。本研究旨在探讨NADPH氧化酶2(Nox2)来源的ROS在iPSCs向内皮细胞分化中的作用和分子机制。方法和结果:我们利用野生型和Nox2基因缺失型小鼠胚胎成纤维细胞,诱导生成小鼠iPSCs,发现Nox2基因缺失的小鼠iPSCs分化的血管内皮细胞( Nox2-/-miPSC-ECs)中, ;ROS水平、VEGF表达、内皮和动脉内皮细胞标志物以及Notch信号通路分子的表达均明显下调,且这种下调能被Nox2或Notch1过表达所逆转。外源性低浓度的H2 O2或过表达Nox2激活Notch信号通路,促进动脉内皮细胞标志物的表达,这种作用可被ROS抑制剂或抑制Notch1表达所阻断。 Nox2基因缺失导致iPSCs分化的内皮细胞存活、增殖、迁移及管腔形成能力下降。将Nox2-/-miPSC-ECs移植到小鼠缺血下肢肌肉中,缺血肢的毛细血管和小动脉密度明显低于对照ECs组, VEGF和Notch1表达下降。结论:Nox2产生的ROS通过激活Notch信号通路促进iPSCs向动脉内皮细胞分化。