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地黄叶片器官形态建成中几种内源激素的变化
地黄Rehmannia glutinosa Libosch.为玄参科草本植物,是我国著名的"四大怀药"之一[1].目前,地黄的组织培养多以叶片、块根和花粉等为外植体,经脱分化诱导生成愈伤组织,再分化成再生植株,但都存在植株再生率低、分化周期长、重复性差的问题[2],而且这一途径往往表现出遗传上的不稳定性[3],因此使得地黄组织培养技术在生产和育种上的应用受到限制.
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万古霉素耐药基因研究进展及纳米技术在提高万古霉素抗菌活性中的应用
万古霉素(vancomycin)是用于治疗由革兰阳性菌引起的严重感染疾病的抗生素。万古霉素能够与肽聚糖合成前体 lipoII中的 D-Ala-D-Ala末端结合,从而抑制转肽反应来阻断高分子肽聚糖的合成,造成细菌因细胞壁缺陷破裂而死亡[1]。自1986年首次分离得到具有万古霉素抗性的肠球菌菌株后,万古霉素抗性在肠球菌属中广泛传播。目前关于万古霉素耐药基因的研究已经取得了一定的成果。1990年,发现 vanA 基因能诱导生成相应的抗性蛋白 vanA,其具有 D-Ala-D-Lac连接酶活性。而后又陆续发现了vanH和vanX 等基因,且细胞壁合成途径的改变需要有 vanH、vanA、vanX 等基因的参与[2]。截止目前,有多种万古霉素耐药基因已被发现并鉴定了部分耐药基因在基因簇中的位置和编码产物,汇总于表1。针对万古霉素的耐药越来越普遍的现象,如何增强万古霉素的抗菌活性就显得尤为重要。目前以纳米颗粒装载万古霉素的给药方式显示出了巨大的优势[3]。本文将就近几年有关万古霉素耐药基因的研究以及提高其抗菌活性的研究进行综述。
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细胞因子诱导慢性乙型肝炎患者树突状细胞的免疫功能
目的:探讨体外培养诱导慢性乙型肝炎患者外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)功能状态改善的途径方法:以GM-CSF+IL-4诱生的慢性乙型肝炎患者外周血来源的DC作为对照组,三个实验组再分别加入TNF-α或IFN-γ或TNF-α+IFN-γ联合培养.FCM检测细胞表面免疫分子CD1a,CD83,CD80,CD86,CD40,HLA-DR的表达水平并进行细胞计数,MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增生能力及ELISA法检测DC培养上清中细胞因子IL-6,IL-12的分泌水平.结果:在培养6、9d,各实验组诱导生成的DC数量明显多于对照组(P<0.01).在培养8d,各实验组DC的CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40分子表达较对照组明显增高(P<0.01,P<0.05);各实验组DC表达的HLA-DR分子高于对照组(P<0.05;P<0.01),且以TNF-α+IFN-γ组表达高.各实验组DC刺激同种异体淋巴细胞增生的能力较对照组增强(P<0.05).培养6d各实验组DC培养上清中IL-12的浓度高于对照组(P<0.05),尤以IFN-γ组更为明显(P<0.01),而IL-6的浓度则显著低于对照组(P<0.01).结论:采用GM-CSF+IL-4联合TNF-α或IFN-γ或TNF-α+IFN-γ体外培养体系,能有效的改善慢性乙肝患者DCs的免疫功能状态.
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慢性粒细胞白血病树突状细胞激活的特异性抗白血病免疫反应的体外研究
树突状细胞(DC)是目前发现的抗原递呈功能强的抗原递呈细胞(APC).本实验从慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血单个核细胞(PBMNC)诱导生成既具有特异抗原,又表达共刺激分子的DC,探索其在诱导特异性抗CML免疫反应中的作用.
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骨髓基质细胞的生物学特性及生成新生心肌的能力
冠心病的发病率在近几十年不断增加,病损心脏因缺血引起左心室重塑,不断损失成活心肌,终引起充血性心力衰竭.骨髓基质细胞具有干细胞的分化能力,在已进行的实验中在体外可生成心肌细胞,在体内心肌细胞形成的微环境中可诱导生成新生心肌细胞,且具有诱导生成新生血管的能力,为重塑心肌提供了较为理想的细胞来源.
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基质金属蛋白酶与乳腺癌
乳腺癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,肿瘤的浸润和转移是导致死亡的重要原因.乳腺癌的转移包括:肿瘤细胞从原发灶脱离,穿过基底膜及细胞外基质,诱导生成新生血管,穿入邻近淋巴管和血管,在新的基质中形成转移灶等诸多步骤交杂的过程,研究发现,在这一系列复杂的过程中,均有基质金属蛋酶(MMPs)的协同作用.
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肿瘤血管生成拟态的研究进展
肿瘤需要机体血液供应来满足生长的需要和进行播散.经典的血管生成理论认为:当实体肿瘤直径大于2 mm时,需要诱导生成新的血管来获取血供,新的血管生成包括血管再生和血管形成两种方式,前者通过激活瘤体周围的宿主血管内皮细胞增生、迁移、芽生、向瘤组织内生长形成血管网;后者则是通过动员骨髓中血管内皮前体细胞,引导它们在瘤组织内集聚,原位分化成内皮细胞形成循环血管.
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组织工程化肌腱修复鸡趾屈肌腱缺损的生物力学特性研究
目的肌腱缺损的修复与功能重建是骨外科的研究重点之一.组织工程化肌腱为修复肌腱缺损开辟了一条新途径.它具有良好的生物相容性、生物活性、生物力学相容性并能诱导胶原生成.近年来,在组织工程化肌腱方面已开展了多方面的研究,初步临床应用也取得了较好的效果.但是,从组织工程化肌腱的研究和应用中发现,它在植入体内后,其抗拉强度始终达不到正常肌腱的数值.不难推断,材料在体内的降解速率及诱导生成的胶原纤维的数量和质量同新生肌腱的生物力学性能有密切关系.
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自身骨髓血注射+骨诱导生成蛋白微创治疗胫骨骨折不愈合17例临床护理
2006年1月~12月,我们采用自身骨髓血注射+骨诱导生成蛋白(BMP)微创治疗胫骨骨折不愈合17例,并给予精心护理,取得满意效果.现报告如下.
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008 抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响
目的: 探讨NFκB以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达的作用及其机制. 方法: 通过免疫组化染色ABC法用抗内皮细胞抗体CD31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定. Griess法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映NO的生成. Northernblot结合RT-PCR分析iNOS mRNA水平. EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性. 结果: TNFα(100 U/ml)加LPS(1 ug/ml)处理内皮细胞2 h后iNOS mRNA水平明显上升(P<0.05), 24 h后能明显增加NO的生成(P<0.01). 用放线菌酮(10 mg/ml)或抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC, 0.1 mmol/L)或氮乙酰基半胱氨酸(N-acetylcystenine, NAC, 20 mmol/L)处理内皮细胞能降低TNF-α和LPS诱导的亚硝酸盐(NO)生成和iNOS mRNA表达(P<0.05). 抗氧化剂PDTC和NAC对NO诱导生成的抑制作用呈现剂量-效应关系. TNF-α(100 U/ml)加LPS(1 μg/ml)能刺激内皮细胞中NFκB的激活和转位. 当内皮细胞培养体系中加入PDTC(0.1 mmol/L)或NAC(20 mmol/L)1.5 h后这种激活作用被阻滞. 结论: ① TNF-α加LPS能够在转录或转录后水平诱导iNOS基因表达. ② TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达依赖于NFκB的激活. ③抗氧化剂能够通过抑制NFκB的激活来抑制iNOS基因的诱导表达.
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伊班磷酸钠对破骨细胞功能的抑制作用
我们采用小鼠骨髓基质干细胞诱导生成破骨细胞(OCL),观察不同浓度的伊班磷酸钠对OCL形成的影响,确定其抑制OCL形成的低有效浓度,并观察此浓度伊班磷酸钠对OCL黏附、迁移、破骨功能的影响.
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线粒体DNA修复系统与神经疾病
Clayton曾报道线粒体不能清除粒体DNA(imtochondrical DNA,mtDNA)中由紫外钱诱导生成的嘧啶二体,因而一直认为线粒体没有mtDNA修复功能.近年来,通过对原核生物和低等真核生物的研究,人们对DNA修复系统有了深入的认识,证明mtDNA修复系统可保持mtDNA遗传物质的完整性和稳定性,避免遗传物质突变的产生,保证DNA复制的高保真度.
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造血干细胞和单核细胞来源的树突状细胞在形态、表型及功能的对照实验研究
背景:来自外周血单核细胞的自体DC疫苗作为一种很有前途的抗肿瘤免疫疗法,其面临的局限性包括细胞数量不足和功能缺陷。CD34+造血干细胞则是另一个理想的DC来源,已经有多种扩增CD34-DC的方法报道,都可以得到大量的细胞数和各种功能不同的DC。目的:本实验旨在探讨脐带血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞(CD34-DC)与外周血单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DC)在细胞形态、细胞表型、诱导生成的CTL细胞毒性方面的差异,并探讨不同来源的DC超微结构的变化与其抗原处理与抗原提呈功能之间的相关性,以期制备功能更加强大的DC疫苗。方法:取健康成人外周血,采用密度梯度离心法获取单核细胞后诱导生成DC(Mo-DC);取健康足月产孕妇脐带血,采用磁珠分选法分离纯化CD34+造血干细胞,并培养于含粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)/干细胞因子(SCF)的培养基诱导CD34+造血干细胞扩增及DC前体细胞的生成,GM-CSF/白细胞介素-4(IL-4)培养基进一步诱导前体细胞向DC细胞的分化(CD34-DC)。电镜下观察CD34-DC及Mo-DC的形态,比较其细胞突起数量、细胞核大小及内体小泡数量;流式细胞术检测不同培养时间(d1、d3、d5、d7)的CD34-DC及Mo-DC表面分子表达,并给予FITC-OVA257–264冲击,培养24 h后检测其抗原提呈能力;取培养至d5的CD34-DC及Mo-DC均负载CEA蛋白并加入肿瘤坏死因子(TNF-α)制备成CEA特异性的CD34-mDC、Mo-mDC(即DC疫苗),分别体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成,并利用MTS法检测其各自对CEA高表达的肿瘤细胞系Ls174-T的细胞毒性,以检测其激活T细胞的功能。结果:1)经过细胞因子和肿瘤抗原刺激之后的DC,悬浮生长而失去树突状外观,表现为类圆形,细胞膜清晰且光滑。2)与抗原提呈能力密切相关的内体小泡数量在CD34-DC中多于Mo-DC(P<0.05)。3)Mo-DC与CD34-DC经抗原及细胞因子刺激生成的Mo-mDC与CD34-mDC均可成熟(P>0.05)。4)CD34-DC比Mo-DC具有更强的抗原提呈能力(P<0.05)。5)CD34-DC与Mo-DC在刺激同种异体T淋巴细胞的增殖能力方面无差异(P>0.05)。6)CC-CTLs及CM-CTLs都可以杀伤CEA高表达的肿瘤细胞Ls174-T,但CC-CTLs比CM-CTLs有更高的杀伤率(P<0.05)。结论:1)经GM-CSF/SCF培养基可诱导脐带血CD34+造血干细胞扩增及生成DC前体细胞,并在培养d8开始贴壁生长,每3 d可收获一批DC前体细胞,用GM-CSF/IL-4培养基可进一步诱导生成CD34-DC,其表型与Mo-DC无差异。2)脐血造血干细胞来源的CD34-DC具有更强的抗原提呈、促淋巴细胞增殖及诱导激活CTL的能力。3)电镜下树突状突起数量、细胞核大小及内体小泡数量的变化是评估DCs功能差异的微观机制。4)脐带血来源的CD34-DC有望成为制备DC疫苗新的、理想的原料细胞。
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Nox2来源的活性氧促进小鼠诱导性多能干细胞向动脉内皮细胞分化
目的:活性氧( ROS)调节诱导性多能干细胞( iPSCs)向内皮细胞分化的分子机制还不清楚。本研究旨在探讨NADPH氧化酶2(Nox2)来源的ROS在iPSCs向内皮细胞分化中的作用和分子机制。方法和结果:我们利用野生型和Nox2基因缺失型小鼠胚胎成纤维细胞,诱导生成小鼠iPSCs,发现Nox2基因缺失的小鼠iPSCs分化的血管内皮细胞( Nox2-/-miPSC-ECs)中, ;ROS水平、VEGF表达、内皮和动脉内皮细胞标志物以及Notch信号通路分子的表达均明显下调,且这种下调能被Nox2或Notch1过表达所逆转。外源性低浓度的H2 O2或过表达Nox2激活Notch信号通路,促进动脉内皮细胞标志物的表达,这种作用可被ROS抑制剂或抑制Notch1表达所阻断。 Nox2基因缺失导致iPSCs分化的内皮细胞存活、增殖、迁移及管腔形成能力下降。将Nox2-/-miPSC-ECs移植到小鼠缺血下肢肌肉中,缺血肢的毛细血管和小动脉密度明显低于对照ECs组, VEGF和Notch1表达下降。结论:Nox2产生的ROS通过激活Notch信号通路促进iPSCs向动脉内皮细胞分化。
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胚胎干细胞诱导生成色素细胞的研究进展
多种器官来源的胚胎干细胞在其所需生长微环境合适情况下,可产生一系列不同的细胞类型.清楚了解胚胎干细胞如何发挥自身多分化功能形成某一特殊类型细胞,在细胞水平治疗各种疾病显得愈来愈重要.研究表明黑素细胞和视网膜色素细胞是可以由未分化胚胎细胞形成的.