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中国人3种常见缺失型α-地中海贫血快速检测及产前诊断
目的建立一种准确快速并能同时检测中国人3种常见缺失型α-地中海贫血(简称α-地贫)的聚合酶链式反应(PCR)技术并应用于产前α-地贫的人群筛查和高危胎儿的产前诊断中. 方法采用跨越断裂点PCR(gap-PCR)方案设计3组PCR引物,并对PCR反应条件进行优化以扩增代表这3种α-地贫存在的特异性DNA片段.应用血液学分析法对孕妇及其配偶各6 135例进行α-地贫表型的初筛,gap-PCR法用于α-地贫表型阳性病例的确诊和32例α-地贫高风险胎儿的产前诊断. 结果一次PCR同时成功地检出3种α-地贫的纯合子、杂合子或双重杂合子;孕妇及其配偶中共筛出541例携有--SEA突变基因,及其HbBart's和HbH病的高风险胎儿17例和15例,并对其中的31例进行了产前诊断,5例HbBart's水肿胎儿和4例HbH病胎儿被终止妊娠. 结论该法简便快速、准确可靠、重复性好,适合于人群筛查时检出α-地贫携带者和高风险重症α-地贫胎儿的产前诊断.
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广西壮族自治区平果县孕妇妊娠合并轻型α-地中海贫血对妊娠结局的回顾性分析
目的 探讨孕妇妊娠合并轻型α-地中海贫血(α-地贫)对妊娠结局的影响.方法 选择2011年1月至2015年12月在广西壮族自治区平果县妇幼保健院产前系统检查并患有轻型α-地贫的孕妇共445例作为地贫组,按1∶4比例随机选择同期本院就诊的健康孕妇作为非地贫组,收集研究对象临床特征和妊娠结局资料,使用t检验、x2检验、logistic回归模型和ROC曲线对资料进行回顾性分析.结果 两组孕妇年龄、BMI、孕周及文化程度差异无统计学意义,而地贫组血红蛋白明显低于非地贫组(P＜0.001),两组孕妇的产次、民族和职业差异有统计学意义;单因素分析,地贫组低出生体重儿、足月小样儿和1 min Apgar评分＜7所占比例高于非地贫组,而两组孕妇的早产、死胎、巨大儿等不良妊娠结局差异无统计学意义;非条件logistic回归分析,妊娠合并轻型α-地贫是低出生体重儿(aOR=2.29,95％C1:1.32 ～ 3.95)和足月小样儿(aOR=2.11,95％CI:1.16 ～3.84)的危险因素;受试者工作特征曲线结果表明,轻型α-地贫疾病联合多项指标对新生儿出生体重有一定的预测价值.结论 孕妇妊娠合并轻型α-地贫可能增加新生儿出生体重降低的风险,应加强地贫孕妇的产前检查,减少不良妊娠结局的发生.
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脐血血红蛋白电泳筛查α-地中海贫血的研究
目的 对脐血血红蛋白电泳筛查α-地中海贫血效果进行研究.方法 选取2016年4月1日到2018年9月1日期间送检的2000例α-地中海贫血新生儿脐带血标本,进行脐血血红蛋白电泳分析.疑似α-地中海贫血者进行基因检测.结果 2000例新生儿脐带血标本中异常例数为240,所占比例为12.0％,其中疑似α-地中海贫血者154例,所占比例为7.7％;血红蛋白电泳检测结果与基因检测结果符率为89.2％;154例新生儿脐血Hb Bart's带含量分析显示:Hb Bart's 1％-2％共30例(1.5％),HbBart's 3％-14％共117例(5.85％),Hb Bart's 15％-60％共6例(0.30％),HbBart's>61％者1例(0.05％);标准型、Hb-H病及Hb-Bart胎儿水肿综合征确诊率100％.结论 脐血血红蛋白电泳可作为筛查α-地中海贫血的有效方法.
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补肾生血汤治疗儿童血红蛋白H病38例
地中海贫血是α-珠蛋白合成障碍的一种遗传性溶血性贫血,血红蛋白H病是地中海贫血的一种常见类型,在广西、广东等地区发病率较高.2000年1月-2004年12月,笔者根据肾藏精主骨生髓的理论,应用自拟补肾健脾生血汤治疗儿童血红蛋白H病38例,取得较好疗效,现报道如下.
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益髓生血颗粒治疗血红蛋白H病随机对照临床研究
目的：评价益髓生血颗粒治疗血红蛋白H病(HbH病)的临床疗效。方法采用随机、单盲、安慰剂平行对照方法,将入选的59例HbH患者随机分为益髓生血颗粒组(27例)和安慰剂对照组(32例),分别予益髓生血颗粒和安慰剂口服,疗程3个月。治疗前后分别检测2组患者血红蛋白(Hb)浓度、红细胞计数(RBC)、网织红细胞百分比(Ret),对患者的中医证候进行量化评分,评价中医疗效及西医疗效。结果益髓生血颗粒组治疗后Hb、RBC 明显提高(P＜0.01,P＜0.05),中医证候总积分明显降低(P＜0.01),西医总有效率为77.8%(有效21例,无效6例),中医总有效率为90.9%(有效20例,无效2例)。安慰剂对照组Hb、RBC无明显改善(P＞0.05),中医证候总积分降低不明显(P＞0.05),西医总有效率为15.6%(有效5例,无效27例),中医总有效率为36.0%(有效9例,无效16例)。益髓生血颗粒组在升高Hb、降低中医证候总积分以及中西医疗效方面均明显优于安慰剂对照组(P＜0.01)。结论益髓生血颗粒治疗HbH病能有效改善患者贫血程度,减轻临床症状。
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MCV、RDW参数在筛查新生儿α地中海贫血中的意义
目的探讨新生儿α地中海贫血(地贫)标准型和静止型平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)的改变及其意义. 方法分析了32例标准型和26例静止型α地贫的MCV、RDW参数及32例正常组对比分析. 结果标准型MCV、RDW低于对照组(p均<0.01),静止型MCV低于对照组(p<0.05)、RDW与对照组无差异(p>0.05). 结论 MCV、RDW值可作为筛查新生儿α地贫的简单方法之一.
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孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测
本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断.选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血.结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7.结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义.
关键词： 缺失型α-地中海贫血 α-地中海贫血 游离胎儿DNA 单管多重PCR 孕妇血浆 -
中国武汉地区新生儿α-地中海贫血基因型分析
目的:调查中国武汉地区新生儿α-地中海贫血基因的基因分析,分析其分子流行病学特点.方法:采用PCR、流式细胞术荧光原位杂交法检测中国武汉地区1 376例地中海贫血,以筛查阳性新生儿α-地中海贫血基因.结果:检测出中国武汉地区新生儿α-地中海贫血436例,α-复合β-地中海贫血10例.α-地中海贫血以轻型和静止型为常见,其中--SEA/αα 237例(54.36％)、-α3.7/αα 135例(30.96％)、-α4.2/αα 30例(6.88％)在α-地中海贫血中高达92.20％,中间型-α3.7/--SEA仅1例;基因频率以--SEA/缺失、-α3.7/缺失和-α4.2/缺失为主,而αCS突变、αQ突变、αWS突变则较少,构成比分别为:54.12％、32.29％、7.13％、3.79％、2.45％和0.22％.结论:中国武汉地区新生儿地中海贫血以静止型和轻型为常见;基因频率中缺失型--SEA/αα、-α3./αα和-α4./αα较高.
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中国云南汉族和傣族育龄人群的地中海贫血基因分析
目的:了解云南汉族和傣族育龄人群地中海贫血(简称地贫)的常见基因突变类型.方法:对血液学筛查阳性的小细胞低色素携带者或贫血患者DNA样本,采用Gap-PCR方法和PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交法检测α-或β-珠蛋白基因常见突变类型;采用DNA直接测序法检测可能存在的未知突变;统计分析云南汉族和傣族人群中珠蛋白突变的类型.结果:在685例受检者中共检出40种基因型,其中α-地贫携带者前3位的基因型分别是--SEA/αα(占49.09％)、-α 3.7/αα(36.67％)和αCSα./αα(8.79％);β-地贫携带者前3位的基因型分别是CD26(GAG＞ AAG)/N(43.78％)、CD41-42(-CTTT)/N(20.1％)和CD17(AAG＞ TAG)/N(18.9％).在685例样本中,汉族348例,傣族212例,这2个民族的珠蛋白基因常见突变顺位各有不同,但傣族人群中地中海贫血基因突变类型比较集中.在38例α--地中海贫血复合β-地中海贫血双重杂合子中,傣族就有28例.结论:云南人群中α-和β-珠蛋白基因突变类型的多样性较为丰富,突变谱与国内其他地区的人群不同.
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β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的分子检测及血液学分析
本研究对β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子进行分子检测及血液学表型分析,以了解其检出情况及基因分布状况.采用单管多重gap-PCR技术检测3种常见的缺失型α-地中海贫血基因;采用PCR结合反向点杂交法检测β-珠蛋白基因17个位点的18种突变;进行血细胞常规分析.结果表明:81例β-地中海贫血杂合子中有15例复合缺失型α-地中海贫血,占18.52%.共有9种基因型,包括6例(7.41%)β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血-1基因(--SEA/αα);8例(9.88%)携带α-地中海贫血-2基因,其中6例(7.41%)为右侧缺失型(-α3.7/αα),2例(2.47%)为左侧缺失型(-α4.2/αα);1例(1.23%)携带缺失型HbH基因(--SEA/-α3.7).β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的各项红细胞参数与单纯β-地中海贫血杂合子比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:梧州市β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的发生率很高,而血液学指标缺乏特异性.采用gap-PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法,可以有效减少β-地中海贫血复合α-地中海贫血双重杂合子漏检的可能,对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义.
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多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测
为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α-地中海贫血中的临床应用,观察缺失型α-地中海贫血的基因分布频率,采用单管多重DNA扩增的方法(M-PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α-地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的145例患者进行基因检测.扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳,出现1.3及1.8kb条带者,提示为-SEA/αα;1.6及1.8kb条带者为-α4.2/αα;1.8及2.0kb条带者为-α3.7/αα;1.3及1.6或2.0kb条带,提示为缺失型HbH病(--SEA/-α4.2或-SEA/-α3.7).结果表明,145例受检者中发现100例--SEA/αα(68.9%),15例-α3.7/αα(10.3%),8例-α4.2/αα(5.52%),2例-α3.7/-α4.2(1.38%),-α3.7及-α4.2纯合子各1例(0.69%);14例--SEA/-α3.7(9.65%),2例--SEA/-α4.2(1.38%);另有2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿.结论:运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的-α3.7、-α4.2、--SEA 3种缺失型α-地中海贫血,这一技术对α-地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法.
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超声检测水肿胎儿静脉导管血流频谱的变化
目的 分析水肿胎儿的静脉导管(DV)血流参数,观察心源性水肿及重型α-地中海贫血引起的胎儿水肿者DV血流频谱改变.方法 选取产前超声检查发现的69胎水肿胎儿,根据病因分心源性水肿组(17胎)和重型α-地中海贫血组(52胎),分别测量DV血流频谱并进行参数分析.结果 心源性水肿组88.24％( 15/17)DV出现心室收缩期峰值速度(S)波降低、心房收缩期峰值速度(a)波缺失或反向,静脉峰值流速指数(PVIV)、DV搏动指数(DVPI)及DV阻力指数(DVRI)升高.重型a-地中海贫血组50.00％(26/52)表现为S波增高,59.62％(31/52)a波增高,69.23％(36/52) PVIV减低,80.77％(42/52)DVRI降低,86.53％(45/52)DVPI降低.两组比较,水肿胎儿DV血流频谱与相应孕周正常胎儿DV参考值的差值差异有统计学意义(P＜0.01).结论 两组水肿胎儿DV血流频谱改变不同.DV血流参数对于鉴别胎儿水肿病因及指导临床诊疗有重要意义.
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两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究
目的建立简便快速准确可推广使用的检测α-地中海贫血(α-Thal) 右侧缺失型(-α3.7)和左侧缺失型(-α4.2)的聚合酶链反应(PCR)方法.方法自行研究设计两组引物.优化PCR反应条件.PCR反应产物用1%琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙啶染色,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱.结果运用引物A′、B′、C3进行PCR, 出现1 700 bp扩增带表示-α3.7, 出现1 900 bp扩增带表示α-珠蛋白基因正常或为野生型.二条扩增带同时出现表示是-α3.7缺失杂合子.无任何扩增带表示是东南亚型缺失纯合子.运用引物G′、E、F′进行PCR, 根据出现1 580 bp扩增带和1 180 bp扩增带可诊断为-α4.2,还可区分杂合子与纯合子.结论本研究设计的两组引物及优化的PCR条件,可以简便准确地检测出α-Thal标本中有无-α4.2和-α3.7.
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罕见的血红蛋白H病同时合并异常血红蛋白Q和E家系分析
目的 对广州市一个罕见的血红蛋白H病同时合并异常血红蛋白Q和E家系进行分析.方法 采用美国HELENA公司全自动快速电泳分析系统测定血红蛋白(Hb)各种区带定量;同时进行异常Hb各项测定,包括吸收光谱试验、C结晶试验、溶解度试验、异丙醇试验、连二硫酸钠过筛试验、血红蛋白肽链裂解试验.首证者做了骨髓检查;4例均做外周血红细胞形态检查、常规血液检查、红细胞温育脆性试验、高铁血红蛋白还原试验、G6PD/6PGD酶比值法(紫外法)测定;α-THAL基因检测:多重PCR检测α-THAL基因缺失;β-THAL基因检测:DNA芯片反向点杂交(RDB)检测中国人较常见的18种β-THAL基因,鉴定β-THAL基因突变类型.结果 父亲的α-THAL基因型:αQα4.2/αα;β-THAL基因型:βE/N;表现型:轻型β-THAL携带者合并异常HbQ和异常Hb E多重杂合子;母亲的α-THAL基因型:α/--SEA/;β-THAL基因型:βN/βN.根据综合分析,母亲的表现型:轻型α-THAL复合轻型β-THAL携带者同时合并异常Hb F持续增高症(HPFH).首证者的α-THAL基因型:αQα4.2/--SEA;表现型:缺失型Hb H-Q病;β-THAL基因型:βEM/βEM;表现型:βE纯合子.根据综合分析,为缺失型异常Hb H合并异常Hb Q和异常Hb E多重杂合子.其弟的α-THAL基因型:αQα4.2/--SEA;β-THAL基因:βN/βN;表现型:缺失型异常Hb H病.母亲及其小儿子均同时合并G6PD缺陷.结论 广东省是α-THAL和β-THAL、异常Hb E和异常Hb Q以及G6PD缺乏症的发高区,从地域异常Hb的高发率上,Hb E和Hb Q是可能存在某种关联性,但是在非同源染色体上两种类型的异常Hb同时合并Hb H病在一个个体上,实为罕见.本研究提示对其配偶的婚前检查尤为必要.
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酶联免疫吸附测定法和血液学分析法筛查缺失型α-地中海贫血的比较研究
目的 评价并比较酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胎胚型ζ-珠蛋白链和传统的血液学分析法在诊断缺失型α-地中海贫血(地贫)中的临床诊断价值.方法 以双盲试验对287份珠海市妇幼保健院门诊需做血红蛋白(Hb)分析的血样同时采用ELISA法和血液学分析法分别检测--SEA携带者和α-地贫表型,并以基于聚合酶链反应(PCR)技术作为诊断标准,对两种方法筛查--SEA携带者的敏感度、特异度、准确性进行评估并比较其诊断--SEA携带者的临床应用价值.结果 ELISA法诊断--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确性、阴性预测值和阳性预测值分别为95.0%、100.0%、97.9%和96.5%及100.0%,显著高于血液学分析法的74.4%、96.4%、86.1%、83.5%和90.9%,P均＜0.01).ELISA法不但能有效地检出--SEA携带者,而且还能鉴定出--SEA合并β-地贫特征或异常Hb的个体,且不受缺铁的干扰,但其对HbH病和α-地贫-2和αT-地贫基因携带者的诊断价值不及血液学分析法(P均＜0.05).结论 ELISA法对--SEA携带者,特别是--SEA/αα的诊断价值优于传统的血液学分析法,加之该法简便快速、经济实用且易自动化,故非常适合于(--SEA)α-地贫的大样本人群遗传筛查和临床样品的常规检测.
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实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在α-地中海贫血基因诊断中的价值
目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法运用SYBR-Green1和ABI 7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBR-Q-PCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cut off 值定为PCR结果阳性.将PCR产物重组到T-载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBR-Q-PCR得出标准曲线.从而定量未知标本.结果优化了3个SYBR-Q-PCR反应的引物及其浓度,热循环条件等.检测--SEA等位基因的PCR产物长800 bp,Tm=82.5℃±1℃.αα等位基因的PCR产物长206 bp,Tm=83.0℃±1℃.非--SEA等位基因的PCR产物长436 bp,Tm=84.0℃±1℃.重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上.联合运用3个SYBR-Q-PCR反应可以为--SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH 病、α-地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断.结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用.
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多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的应用
目的初步评价使用单管多重PCR对缺失型α-地中海贫血(α-地贫)的诊断效能.方法使用单管多重PCR基因诊断试剂对202例血液学方法筛检疑似α-地贫患者进行基因检测,并对其中部分标本进行测序.结果疑似为α-地贫的202份临床标本,基因检测证实其中136例为α-地贫,其结果经序列分析证实.与PCR检测相比,一管法红细胞脆性、MCV、MCH与RDW-CV检测的灵敏度分别为85.29%、99.44%、73.53%和61.03%,特异性分别为69.70%、66.67%、62.12%和60.61%.在136例α-地贫患者中,--SEA/αα 104例、-α3.7/αα 14例、-α4.2/αα 4例、-α3.7/--4.211例和-α4.2/--SEA3例,分别占76.47%、10.29%、2.94%、8.09%和2.21%.结论与血液学方法相比,多重PCR检测具有快速、准确的优点,可用于人群和临床样品的缺失型α-地贫的分子筛查以及产前诊断.
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琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳及高分辨熔解曲线技术在α-地中海贫血新生儿筛查中的应用
目的 比较毛细管电泳与琼脂糖凝胶电泳2种方法在α-地中海贫血(α-地贫)新生儿筛查中的应用价值；探讨新生儿脐血Hb Bart's水平与α-地贫基因型的关系；探讨高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术用于筛查非缺失型α-地贫的可行性.方法 对1442例新生儿脐血样本同时采用琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳技术进行血红蛋白定量分析,将其中任意一种方法检出Hb Bart's区带(其中毛细管电泳技术Hb Bart's定量低为0.1％)的样本全部挑出进行Gap-PCR,若样本未检出异常则进一步行HRM分析,随后进行反向点杂交和基因测序.同时对2种电泳Hb Bart'ss均为阴性的样本进行2种常见静止型α地贫基因(-α3.7、-α4.2)的分子筛查.结果 1442例样本中,2种电泳方法HbBart's均为阳性的样本为151例,基因确诊150例.4例琼脂糖凝胶电泳检测Hb Bart's阳性而毛细管电泳检测Hb Bart's阴性的样本,基因检测未见异常.7例琼脂糖凝胶电泳检测Hb Bart't' s阴性而毛细管电泳检测Hb Bart's阳性的样本,基因检测均为静止型α-地贫.1280例两种电泳Hb Bart's均为阴性的样本检出10例静止型α-地贫.HRM技术将3种常见非缺失型α-地贫全部检出.结论 与琼脂糖凝胶电泳相比,毛细管电泳技术定量分析Hb Bart' s更为简便、准确.脐血Hb Bart's的含量随着α-基因缺陷的个数的增加而升高,其中α+-地贫中不同基因型的Hb Bart's水平亦存在差异.新生儿脐血毛细管电泳Hb Bart's含量0.1％应作为区分正常人与α-地贫携带者的指标.HRM技术可作为非缺失型α-地贫(尤其是αCSα和αQSα)的一种筛查方法.
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罕见α-地中海贫血的新生儿筛查与诊断
目的：探讨罕见α-地中海贫血的新生儿筛查与诊断。方法应用全自动毛细管电泳技术对6525例新生儿脐血进行血红蛋白定量分析，有 Hb Bart’s 区带的样本进行常规基因诊断（gap-PCR 和PCR-RDB），对于未检出异常的样本，用多重 PCR 技术检测4种罕见α-基因缺失（-- THAI、-- FIL、-- MED、-（α）20．5），用PCR 产物直接测序法检测罕见非缺失型α-地贫。结果6525例新生儿脐血样本中，检出Hb Bart’s阳性样本377例，其中基因确诊375例：包括14种基因型、383个α-地贫等位基因；发现罕见α-地贫7例，包括2例-- THAI/αα及5例罕见非缺失型α-地贫；发现1例α2-基因突变至与 Hb Bart’s区带峰同区域的异常血红蛋白（Hb J-Wenchang-Wuming）。结论毛细管电泳技术定量分析血红蛋白，准确、高效，应作为α-地贫高发地区的新生儿疾病筛查常规项目；在α-地贫高发地区应注意罕见α-地贫的筛查与诊断，防止漏诊导致重型地贫儿出生。
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α-地中海贫血的筛查进展
α-地中海贫血(简称α-地贫)是人类常见的单基因遗传病之一,严重危害人类健康.由于静止型和轻型α-地贫可无临床症状,但按照孟德尔遗传规律,可能孕育重型地贫的胎儿.因此在α-地贫高发区进行筛查尤为必要,有利遗传咨询、指导婚姻及优生优育.随着人们的不断总结、新技术的不断涌现及联合应用,α-地贫的筛查向敏感度和特异度更高的方向发展,本文主要总结α-地贫的筛查进展.
