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重楼皂苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响
目的:观察重楼皂苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响.方法:采用不同浓度(0、1、10、50、100μg/ml)的重楼皂苷,分别作用于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)分析细胞增殖指数.结果:与空白对照和1 μg/ml的低浓度组相比,高浓度组(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)诱导RAW264.7细胞生长指数明显降低,表明高浓度药物明显抑制了RAW 264.7细胞的增殖,在加入药物24h后计算其IC50值为1.54 μg/ml.结论:高浓度重楼皂苷抑制细胞的增殖,形态可见细胞呈圆形、梭形和不规则形,细胞间接触变松,贴壁能力减弱,可见较长伪足,细胞增殖减慢.
关键词： 重楼皂苷 小鼠巨噬细胞RAW 264.7 增殖 -
滇重楼品质评价及其甾体皂苷类成分积累规律分析
目的:探讨滇重楼居群内品质差异及甾体皂苷活性成分的积累规律,为该药材的品质评价及优质种质资源筛选提供实验依据.方法:采用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定滇重楼居群内根茎、茎、叶中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ的含量,建立各部位的UPLC指纹图谱,分析该药材居群内的品质差异及其甾体皂苷类成分的积累规律.结果:滇重楼居群内根茎和叶中总皂苷含量均＞0.6％,不同部位中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅶ含量具有显著性差异,而重楼皂苷Ⅵ含量无显著性差异;UPLC指纹图谱中5个共有峰为根茎、茎、叶共有,各部位共有峰UPLC指纹图谱相似度均＞0.753.结论:重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ主要在植物的叶绿体中合成并进行储藏和分配,经茎向下运输,主要在根茎和叶中积累和储存,总皂苷含量在不同部位的积累规律为叶＞根茎＞茎;滇重楼不同部位中主要活性成分含量及种类差异较大.
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重楼克感胶囊中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ及金丝桃苷含量测定
目的:建立重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ及金丝桃苷的HPLC含量测定方法,并使用本方法测定3批重楼克感胶囊中5种化合物的含量.方法:Dikma C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1％磷酸(42∶58)为流动相,检测波长203,360nm,流速1.0 mL· min-1,柱温30℃.结果:重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ及金丝桃苷在0.1 ～10 μg线性关系均良好,加样回收率为98.91％ ～ 102.23％.结论:建立了重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ及金丝桃苷的HPLC测定方法,操作方便,结果准确,可用于重楼克感胶囊中5种化合物的含量测定.
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滇重楼贮藏期间化学成分的变化
目的:研究滇重楼贮藏期间化学成分的变化,为指导滇重楼采收、经营、贮藏、加工提供依据.方法:将9份滇重楼密封后在室温下贮藏1年;运用HPLC测定重楼皂苷在贮藏前后的变化.结果:滇重楼药材贮藏1年后化学成分发生了很大变化,必然引起药材质量和功效的变化.重楼皂苷Ⅵ含量有所增加,重楼皂苷Ⅱ含量有所减少,重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅶ含量变化无规律,增减均有.结论:为保证药材的质量和药用功效,滇重楼不宜久藏.
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多茎滇重楼地上叶和茎中主要次生代谢产物的积累
目的:探讨不同居群多茎滇重楼叶和茎中主要次生代谢产物的积累规律.方法:采用HPLC测定不同居群多茎滇重楼叶和茎中主要活性成分重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ的含量,流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～40 min,30％ ～60％ B;40～50 min,60％ ～ 30％ B),检测波长203 nm,运用单因素方差分析、聚类分析和HPLC图谱分析探讨其次生代谢产物的积累规律.结果:不同居群多茎滇重楼叶中重楼皂苷Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ含量及总含量具有显著差异;除个别居群外,不同居群多茎滇重楼茎中重楼皂苷Ⅶ含量差异较小.叶中主要检测到重楼皂苷Ⅱ和Ⅶ,茎中只检测到重楼皂苷Ⅶ.多茎滇重楼和滇重楼比较的地上部分叶和茎HPLC图谱相似度均较低,6个居群叶中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ总质量分数达到了2015年版《中国药典》规定的限量标准.结论:多茎滇重楼与滇重楼地上部分叶和茎存在一定差异,但多茎滇重楼叶中有效物质成分较高,该研究为多茎滇重楼地上部分叶和茎的开发利用提供了一定的参考依据.
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RP-HPLC测定中药复方癌痛平中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量
目的:建立RP-HPLC法同时测定癌痛平中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ和Ⅶ的含量测定方法.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为乙腈,B为水,梯度洗脱:0-40min(A:30％→60％),40-50min(A:60％→30％);检测波长203nm,流速1.0mL/min,柱温30C.结果:重楼皂苷I在0.0684-4.38μg,重楼皂苷Ⅱ在0.0675-4.32μg,重楼皂苷Ⅵ在0.0703-4.50μg,重楼皂苷Ⅶ在0.0691-4.42μ g范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.456％、100.593％、99.447％、99.812％;RSD(n=6)分别为1.771％、1.189％、1.682％、2.167％.结论:该方法精密度和重现性好,结果准确,可以用于癌痛平的质量控制.
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红外光谱法快速预测不同种类重楼中重楼皂苷含量
重楼皂苷是中药重楼主要的有效成分,为了快速评价重楼品质,保证重楼在临床治疗中的疗效,本文采用红外光谱结合偏小二乘回归法(partial least squares regression,PLSR)对重楼中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅶ进行定量分析,建立快速评价重楼品质的方法.采集78份不同产区、不同种类重楼样品的红外光谱,用高效液相色谱测定重楼样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ及重楼皂苷Ⅶ的含量,将重楼的红外光谱数据和液相数据进行拟合,快速预测3种重楼皂苷含量.原始红外光谱经多元散射校正(multiplicative signal correction,MSC)、标准正态变量(standard normal variate,SNV)、正交信号校正(orthogonal signal correction,OSC)、一阶求导(first derivative,1st Der)、二阶求导(second derivative,2nd Der)预处理后,运用偏小二乘回归分析建立重楼皂苷的定量预测模型.重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的佳预处理方法为MSC+OSC+2nd Der,重楼皂苷Ⅶ的佳预处理方法为MSC+SNV+OSC+2nd Der;重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅶ 3个指标成分定量校正模型的决定系数(R2)分别为0.930 8,0.934 8,0.912 3 mg·g-1;校正均方根误差(root mean square error of estimation,RMSEE)分别为1.855 0,0.632 3,0.001 6 mg·g-1;验证模型的决定系数(R2)分别为0.948 8,0.963 6,0.780 1 mg·g-1;预测均方根误差(root mean square error of prediction,RMSEP)分别为1.704 6,1.227 7,0.001 9 mg·g-1;定量模型的预测值与真实值比较接近,模型预测效果好,其中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ定量模型效果优于重楼皂苷Ⅶ.该方法无损、快速、准确,可用于重楼中重楼皂苷含量的快速测定.
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滇重楼皂苷对10种肿瘤细胞株的细胞毒谱及构效关系研究
滇重楼Paris polyphylla Snfith vat.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.为百合科重楼属植物的干燥根茎.重楼味苦,性微寒,有小毒,归肝经,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,用于痈疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、惊风抽搐等.已有研究表明,重楼的水、甲醇和乙醇提取物对A549(人肺癌)、MCF-7(人乳腺癌)、HT29(人结肠腺癌)、A498(人肾腺癌)、PACA-2(人胰腺癌)、PC-3(人前列腺癌)等多种人体肿瘤细胞均有抑制作用,甾体皂苷类是其主要活性成分[1].本实验将从滇重楼分离纯化得到的6种皂苷采用MTT检测方法,针对10种不同类型的肿瘤细胞株的细胞毒活性、构效关系进行了比较研究;
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滇重楼根际微生物分布与甾体皂苷含量的相关性
观察了滇重楼栽培中根际土壤细菌、真菌、放线菌和3类促生细菌数量的变化规律,探讨了根际土壤微生物数量与滇重楼品质的关系.结果表明,滇重楼植物根际土壤微生物资源丰富,不同产地滇重楼根际土壤细菌、真菌、放线菌、解钾细菌、解无机磷细菌和解有机磷细菌数量具有显著性差异(P＜0.05),根际土壤微生物数量的分布规律是:细菌数量＞放线菌数量＞真菌数量.随着种植年限的增加,真菌与解钾细菌数量呈逐年增加,细菌、放线菌、解无机磷细菌与解有机磷细菌数量呈逐年减小的变化趋势,土壤微生物类型由“细菌型”向“真菌型”过渡.不同产地滇重楼根茎的药用品质具有生境依赖性,种植年限的增加造成滇重楼药用品质下降作用明显.由此可见,种植年限增加会引起土壤微生态区系的变化,降低了滇重楼对营养物质的吸收利用,进而造成滇重楼药用品质下降.
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华重楼的形态多样性及其与单株产量和质量的关系
华重楼药材供应不足问题已严重制约下游产业的可持续发展.选育高产品种是生产上扩大华重楼药材供给的重要途径.合理株型是作物高产品种的生育基础和形态特征,也是品种选育的重要方向.该研究对99份华重楼野生种质资源的主要植物形态特征和根茎干重及其重楼皂苷含量进行考察分析,结果表明:①华重楼野生种质资源存在广泛的形态变异,变异幅度由高到低依次为皂苷含量、根茎干重、叶柄长、茎长、花瓣长、花梗长、萼片长、叶宽、叶长、萼片宽、叶片数、雄蕊数、花瓣数;②华重楼各形态性状之间存在较强的相关性,主成分分析显示其大体上综合反映了华重楼的光合部位发育和生殖部位发育特征;③重楼皂苷Ⅶ,Ⅵ,Ⅱ,Ⅰ总量介于0.02％～0.87％,平均0.13％,与其他各农艺性状无显著相关性.④华重楼高产选育应当重视具有大叶片、大萼片、高茎秆特征的种质资源的利用.
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关键词：
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HPLC-MASS法测定乳汁中宫血宁胶囊主要有效成分重楼皂苷
目的进一步了解宫血宁的主要有效成分重楼皂苷在乳汁中的含量及确定药物对婴儿的安全性.方法用HPLC-MASS测定.结果在各组乳汁中均未检测到相应的重楼皂苷原型药物的质谱信号.产妇在服药期间,无一例药物不良反应,婴儿也未见异常.结论宫血宁胶囊是一种对婴儿安全、可靠的,减少产后出血及促进子宫复旧的妇科良药.
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重楼皂苷的制备及其抗A型流感病毒活性
目的 研究重楼皂苷的制备及体内外对A型流感病毒(IAV)活性的影响.方法 采用柱层析和反相液相色谱分离技术,从重楼中提取重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,应用高效液相色谱法测定其纯度.采用MTT比色法测定重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的细胞毒性,并检测其体外对IAV的直接灭活作用、对IAV吸附和侵入细胞的阻断作用及对IAV在靶细胞内增殖的抑制作用.用IAV滴鼻法制备IAV感染小鼠模型,模型制备4 h后分别每天ig给予重楼皂苷Ⅰ 5和10 mg·kg-1及阳性对照药奥司他韦3 mg·kg-1,每天分2次给药,连续5 d,自给药后每天观察并记录小鼠发病情况和死亡数,共观察14 d,计算小鼠死亡率和生命延长率,评价其体内抗IAV作用.结果 提取分离得到的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的纯度分别为95.3%,90.2%,92.4%和86.8%.重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ浓度分别低于50,12.5,6.25和12.5 mg·L-1时,未见对靶细胞MDCK的细胞毒性.重楼皂苷Ⅰ 6.25,12.5,25和50 mg·L-1,重楼皂苷Ⅱ 6.25和12.5 mg·L-1,重楼皂苷Ⅵ 3.13和6.25 mg·L-1,重楼皂苷Ⅶ 6.25和12.5 mg·L-1及奥司他韦40 mg·L-1对IAV均有显著的直接灭活作用(P<0.01),对IAV吸附和侵入靶细胞亦具有一定的阻断作用(P<0.01),对IAV在靶细胞内的增殖具有抑制作用(P<0.01).重楼皂苷Ⅰ 5 和10 mg·L-1可明显降低IAV感染小鼠的死亡率(P<0.01),由流感病毒感染组的8/10均下降到2/10;并可延长IAV感染小鼠的存活时间(P<0.01),存活时间由(8.5±0.3)d分别延长到12.7±0.4和(13.2±0.5)d(P<0.01),生命延长率分别为49.4%和 55.3%,效果与奥司他韦近似.结论 从植物重楼中分离到高纯度的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,重楼皂苷Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ在体外具有较好的抗IAV活性,重楼皂苷Ⅰ在体内外均具有较好的抗IAV活性.
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20批重楼药材皂苷类成分分析与其TLC鉴别方法探讨
目的:对不同品种、不同产地的重楼药材中的皂苷类成分进行测定,以探讨其标准中TLC鉴别指标成分设定的合理性.方法:按《中国药典》2015年版一部重楼标准项下的TLC法和HPLC法分别检测皂苷类成分的组成和含量.结果:20批重楼药材中只有10批同时检出重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ和Ⅶ4种皂苷成分,其余10批只检出其中的3种成分.结论:建议修订重楼标准项下相关内容:只要总皂苷含量符合规定,TLC鉴别检出其中两种以上皂苷即可.
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滇重楼中重楼皂苷和重金属含量的相关性研究
目的:测定滇重楼中4种重楼皂苷和8种重金属元素的含量,探讨上述2种质量评价指标间的相关性.方法:采用电感耦合等离子体发射光谱法测定滇重楼根茎内铅、镉、铜、铬、钡和锑的含量;原子荧光光谱分析法测定汞、砷的含量;高效液相色谱法测定重楼总皂苷(包括重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ)的含量,并采用SPSS 23.0软件对数据进行相关性分析.结果:滇重楼根茎中铅、镉、铜、汞、砷、铬、钡和锑的平均含量分别为20.433、50.020、67.852和280.491μg/kg,1.632、1.982、9.356和15.875 mg/kg;重楼总皂苷含量为0.811%,其中重楼皂苷Ⅰ占总皂苷量的72.4%.相关性分析结果显示,重楼总皂苷的含量与8种重金属的含量无显著相关性,但重楼皂苷Ⅰ的含量与镉的含量呈极显著负相关,与铜、锑的含量呈极显著正相关,与砷的含量呈显著正相关.结论:滇重楼中活性成分的含量与重金属元素的含量有一定相关性,可为建立滇重楼全面质量评价体系提供数据依据.
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RP-HPLC法测定复方美登木片中重楼皂苷的含量
目的:建立测定复方美登木片中重楼皂苷含量的反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)方法.方法:色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6mm,5 μm);流动相:乙腈-水(42∶58);流速0.8 mL/min;检测波长为203nm,柱温35℃.结果:结果表明重楼皂苷Ⅰ在0.304 0～3.040 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为103.21%(n=9),RSD=1.26%;重楼皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.98%(n=9),RSD=2.56%.结论:本法操作简单、灵敏、准确,可用于复方美登木片的质量控制.
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重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对裸鼠卵巢癌的抑制及抗氧化作用
目的 建立裸鼠卵巢癌的研究模型,探讨重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对裸鼠卵巢癌的抑制及抗氧化性的影响.方法 采用腋部皮下接种人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 200μl建立裸鼠卵巢癌模型.重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体灌胃处理裸鼠15 d,观察裸鼠体重变化和肿瘤抑制情况以及血清抗氧化能力的影响.结果 与阴性对照组相比,重楼皂苷二氧化硅纳米复合体处理组的肿瘤抑制率明显升高,肿瘤抑制率为58％,重楼皂苷处理组的肿瘤抑制率为36％,复合体处理组的肿瘤抑制率高于重楼皂苷处理组和二氧化硅纳米复合体单独作用的结果;血清SOD和T-AOC含量,重楼皂苷二氧化硅纳米复合体处理组显著高于对照组以及重楼皂苷和二氧化硅纳米复合体单独作用的结果;血清MDA,重楼皂苷二氧化硅纳米复合体处理组与阴性对照组相比显著降低.结论 重楼皂苷二氧化硅纳米复合体可能是通过增强抗氧化能力从而对裸鼠卵巢癌的抑制有一定的逆转作用.
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HPLC法测定不同产地重楼属植物中7种甾体皂苷成分
目的 研究不同产地重楼属植物主要活性成分甾体皂苷量的差异性,为探讨品种及产地对重楼属植物活性成分的影响提供参考依据.方法 采用HPLC法测定不同产地的重楼属6种药材中偏诺皂苷-3-O-α-L-Rha(1→2)[α-L-Rha(1→4)]-β-D-Glc (PGRR),重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、H及纤细薯蓣皂苷的量.结果 不同重楼属植物中的皂苷种类及其量存在较大差异,滇重楼、巴山重楼以及长药隔重楼的皂苷种类及其量较多；同一品种不同产地的重楼药材,其皂苷的种类及其量亦不同,湖北恩施的金线重楼较重庆巫溪产的皂苷量高,贵州安顺的长药隔重楼皂苷量明显高于湖北来凤产.结论 重楼属植物的品种及产地对其活性成分的量及类型有很大的影响.
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重楼皂苷对肝纤维化大鼠纤维化标志物的影响及其相关性分析
目的：探讨重楼皂苷对四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化大鼠肝功能以及肝纤维化标志物的影响及其相关性。方法：SD大鼠随机分为正常组、模型组，重楼皂苷低、中、高剂量组，复方鳖甲软肝片组、秋水仙碱组。除正常组外，其余各组采用CCl4致肝纤维化造模。第7周后，正常组灌胃生理盐水，其余各组灌胃相应药物，1次/d。末次给药后，禁食8 h，处死动物取血，ELISA法检测大鼠血清ALT、AST、肝纤四项指标（CⅣ、PCⅢ、LN、HA）含量以及肝组织HYP水平。结果：与模型组比较，重楼皂苷各剂量组大鼠血清ALT、AST和肝纤四项指标含量、肝组织HYP含量降低（P＜0.05，P＜0.01）。ALT、AST含量与CⅣ、PCⅢ、LN、HA含量具有相关性（P＜0.05，P＜0.01）。结论：重楼皂苷具有一定的保肝降酶作用，能减轻肝纤维化程度。
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多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的研究
目的:探讨不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分的积累.方法:采用HPLC法测定不同居群多茎滇重楼根茎,茎,叶中主要活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量,建立HPLC图谱,运用单因素方差分析、聚类分析和HPLC图谱分析探讨多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的差异.结果:不同居群多茎滇重楼不同部位中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量及其总含量具有极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)性差异,根茎中只有一个居群重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量未达到《中华人民共和国药典》(2015年版)0.60％的限量标准;根茎中重楼皂苷主要以Ⅰ、Ⅶ的形式存在,茎中只检测到重楼皂苷Ⅶ,叶中皂苷活性成分分布不规律;不同居群多茎滇重楼不同部位HPLC色谱图相似度均较高.结论:不同居群多茎滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量除一个居群外均达到国家限量标准,且不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分差异较小.该研究为多茎滇重楼是否能够替代滇重楼入药提供了一定科学依据.
