首页 > 文献资料
-
β-榄香烯对人胰腺癌 Panc-1细胞凋亡的影响
目的：观察β-榄香烯对人胰腺癌 Panc-1细胞凋亡的影响，探讨其作用机制。方法β-榄香烯浓度设置为10、20、40、80、160μg/mL，作用于体外培养的 Panc-1细胞24、48、72 h。台盼蓝拒染法检测 Panc-1细胞抑制率；TUNEL 法检测 Panc-1细胞凋亡；Hoechst33258荧光染色观察 Panc-1细胞核变化；ELISA 检测Panc-1细胞 Caspase-3、8、9活性；Western blot 检测 Panc-1细胞 Fas、FasL、细胞色素 C（Cyt c）、凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达。结果与对照组比较，β-榄香烯作用 Panc-1细胞24、48、72 h，Panc-1细胞抑制率明显增加（P＜0.05，P＜0.01），细胞凋亡率明显增加（P＜0.01，P＜0.001），并呈时间/浓度依赖性；β-榄香烯作用 Panc-1细胞72 h，Panc-1细胞核可见明显碎裂，染色质浓缩，呈强蓝色荧光，形成凋亡小体；β-榄香烯作用 Panc-1细胞48 h，Caspase-3、8、9活性明显增加（P＜0.05，P＜0.01），Fas、FasL、Cyt c 及 AIF 蛋白表达明显增强（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。结论β-榄香烯能够抑制 Panc-1细胞增殖、诱导细胞凋亡，其可能激活细胞内死亡受体途径及线粒体凋亡途径发挥抗肿瘤作用。
-
十字孢碱对胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人的胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响及其机制.方法:采用CCK-8法检测ST对Panc-1细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察ST对Panc-1细胞凋亡形态的影响;流式细胞术检测不同浓度ST对Panc-l细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白质印迹法检测不同浓度ST对Panc-1细胞周期蛋白cyclin A、cyclin D1、Cdk4和P21表达的影响.结果:ST对Panc-1细胞的增殖有明显抑制作用(P＜0.05),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色观察发现,ST能明显诱导Panc-1细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞术检测发现,与对照组相比,ST可诱导Panc-1细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),并引起细胞周期阻滞于G1期(P＜0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,Panc-1细胞经ST处理后cyclin D1、Cdk4蛋白表达明显降低(＜0.05),P21蛋白表达则明显增加(P＜0.05)；低浓度ST上调Panc-1细胞中cyclin A的表达,而高浓度ST则下调cyclin A的表达(P＜0.05).结论:ST可显著抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期于G1期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡.
-
LY294002联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞p-Akt和.MRP表达的影响
目的:研究LY294002联合吉西他滨对体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞内p-Akt和MRP表达的作用.方法:半定量RT-PCR和Western blot检测不同浓度的LY294002联合吉西他滨用药后PANC-1细胞内MRP mRNA以及p-Akt和MRP蛋白表达水平的变化.结果:LY294002联合吉西他滨能显著抑制PANC-1细胞内MRP mRNA的表达(1.47±0.03,1.31±0.05,1.02±0.04,0.76±0.06,0.37±0.02,P＜0.05),亦显著抑制p-Akt和MRP蛋白的表达,并且这种抑制作用与药物浓度显著相关(p-Akt:0.80±0.02,0.63±0.01,0.52±0.01,0.41±0.02,0.35±0.02,P＜0.05; MRP:0.93±0.05,0.87±0.03,0.81±0.03,0.71±0.02,0.40±0.03,P＜0.05),在其浓度大组抑制效应达到大.结论:LY294002可能通过抑制PI3K/Akt信号途径抑制MRP mRNA和蛋白的表达,逆转肿瘤的耐药.
-
AMD3100对胰腺癌细胞Panc-1生物学行为 影响机制探讨
目的 趋化轴CXCL12-CXCR4特异性的抑制剂AMD3100在近年肿瘤防治研究中越来越受到重视.本研究探讨AMD3100对胰腺癌细胞Panc-1增殖、凋亡、移行和侵袭的影响.方法 0(对照组)、1、10、100μg/mL的AMD3100作用Panc-1细胞,CCK-8检测Panc-1细胞的增殖.AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Panc-1细胞凋亡.划痕实验和Tr-answell小室移行实验检测Panc-1细胞的移行能力.Transwell小室侵袭实验检测Panc-1细胞的侵袭能力.蛋白质印迹法技术检测Panc-1细胞中CXCL12、CXCR4、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)和血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)的表达水平.结果 在增殖实验中,1、10和100μg/mL的AMD3100作用24 h后,Panc-1细胞的增殖抑制率分别为(13.45±7.51)％、(15.53±7.28)％和(25.97±5.66)％,1和10μg/mL组比较,P=0.198;1和100μg/mL及10和100μg/mL比较,均P<0.001;作用48 h后,Panc-1细胞的增殖抑制率分别为(16.55±12.71)％、(28.06±9.97)％和(47.43±8.52)％,组间差异有统计学意义,P<0.05.24与48 h组相比差异有统计学意义,F时间=77.275,P<0.001;F浓度=62.716,P<0.001.在凋亡实验中,对照组早期凋亡细胞率平均为(5.41±0.42)％,AMD3100组为(19.31±1.27)％,P双侧<0.001;对照组总凋亡细胞率平均为(10.87±0.97)％,AMD3100组平均为(36.03±2.26)％,P双侧<0.001.在划痕实验中,对照组12、24 h的移行率为(45.27±5.29)％ 和(77.18±5.17)％,AMD3100组为(19.09±5.51)％ 和(43.92±6.57)％,各组间差异有统计学意义,F时间点=150.090,F浓度=165.552,均P<0.001.Transwell小室移行系统中0、1、10和100μg/mL的AMD3100作用Panc-1细胞24 h的穿膜细胞数平均为(361±34)、(264±34)、(238±13)和(185±11)个,F=51.145,P<0.001.在Transwell小室侵袭系统中,0、1、10和100μg/mL的AMD3100作用Panc-1细胞24 h后穿膜细胞数平均为(359±20)、(265±19)、(197±19)和(122±18)个,F=45.963,P<0.001.经蛋白质印迹法技术检测,AMD3100可显著降低Panc-1细胞中MMP-9(F=141.022,P<0.001)和VEGF-C(F=197.564,P<0.001)的表达水平,且随着AMD3100浓度的增高,抑制效果越显著;AMD3100对CXCL12、CXCR4的表达基本没有影响,AMD3100浓度增加,CXCL12(F=0.795,P=0.511)和CXCR4(F=2.363,P=0.102)表达差异无统计学意义.结论 AMD3100可能通过影响CXCL12与CXCR4的结合,下调MMP-9和VEGF-C的表达,从而抑制Panc-1增殖、移行和侵袭的能力,诱导其细胞凋亡.
-
结缔组织生长因子对胰腺癌细胞增殖和转移的影响
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组化方法,分别检测胰腺癌细胞株PANC-1和50例胰腺癌组织中CTGF的表达.采用重组腺病毒介导的CTGF转染PANC-1细胞使CTGF高表达,以RNA干扰方法使CTGF表达缺失,分别通过四甲基偶氮唑蓝(MMT)法、划痕实验、体外侵袭实验观察PANC-1细胞增殖和转移能力的变化.结果 实时定量PCR和免疫组化检测均显示,CTGF在PANC-1细胞及胰腺癌组织中高表达.CTGF转染后,CTGF转染组PANC-1细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显增强,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为34个,比空载体对照组(11个)明显增多.干扰CTGF后,siCTGF转染组细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显降低,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为6个,比空载体对照组(15个)明显减少.结论 CTGF在胰腺癌中高表达,其表达的高低对胰腺癌细胞的增殖和转移有显著影响.
-
姜黄素提高人胰腺癌PANC-1细胞放射敏感性的机制研究
目的 观察姜黄素对人胰腺癌PANC-1.细胞放射敏感性的影响.方法 γ射线照射人胰腺癌PANC-1细胞,同时联合应用姜黄素处理细胞,通过MTT法检测PANC-1细胞增殖活性的变化,利用流式细胞仪观察PANC-1细胞周期和凋亡率的变化,采用RT-PCR和Western blot分析PANC-1细胞中P21表达的变化.结果 与γ射线照射组比较,γ射线联合应用姜黄素可以显著降低PANC-1细胞的增殖活性(t=6.72,P＜0.01),同时影响细胞周期的变化,显著增加S期细胞(t=4.78,P＜0.05),PANC-1细胞凋亡明显提高(t=6.58,P＜0.01),并伴有P21蛋白和mRNA表达的变化(t=5.72、5.63,P＜0.01).结论 姜黄素可以显著提高人胰腺癌PANC-1细胞的放疗敏感性,这一特性与P21的表达有关.
-
氧化苦参碱对TGF-β1诱导的PANC-1细胞Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响
目的 研究氧化苦参碱(OM)对接受转化生长因子-β1 (TGF-β1)刺激的人胰腺导管癌PANC-1细胞中Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.方法 以TGF-β1刺激PANC-1细胞模拟胰腺纤维化模型,并观察给予OM干预对Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.通过细胞转染技术将Gli1及Smad3的RNA干扰质粒转染入PANC-1细胞;通过Western blotting技术检测Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,ELISA技术检测纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)在细胞培养上清中的表达.结果 与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著升高;与TGF-β1组相比,OM和TGF-β1共同处理组Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著降低.转染Smad3干扰质粒后,Gli1、α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著下降.与TGF-β1组比较,转染Gli1干扰质粒后加TGF-β1组α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著降低.结论 OM可能通过调节PANC-1细胞TGF-β1/Smad3/Gli1通路发挥抗胰腺纤维化作用.
-
氧化苦参碱通过促进胰腺星状细胞株中Gli2表达发挥抗胰腺纤维化作用
目的 研究氧化苦参碱(OM)对接受TGF-β1刺激的永生化的大鼠胰腺星状细胞(LTC-14)细胞和胰腺导管癌细胞(PANC-1)中Gli2表达的影响.方法 取LTC-14细胞和PANC-1细胞,分别分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1 +OM处理组、OM对照组,作用12h后提取蛋白,通过Westem blotting法检测相关蛋白表达.结果 与对照组相比,LTC-14细胞接受TGF-β1刺激后Gli2表达显著降低,但是α-SMA、FN和CoL-Ⅰ的蛋白表达显著上升;与TGF-β1处理组比较,OM预处理后使接受TGF-β1刺激的LTC-14细胞Gli2表达显著升高.与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Gli2表达显著升高,α-SMA、FN和CoL-Ⅰ的蛋白表达也显著上升;与TGF-β1处理组比较,OM预处理后使接受TGF-β1刺激的PANC-1细胞Gli2表达显著下降.结论 OM可能通过促进LTC-14细胞中Gli2表达而发挥抗胰腺纤维化作用.
-
大蒜素对人胰腺癌PANC-1细胞株的作用及机制的研究
大蒜素是新鲜大蒜中主要生物活性成分的总称,其中主要成分为二烯丙基三硫化物(DADS).大蒜除有健胃助消化的功能,还有抗真菌、抗细菌、降血脂、降血压、抑制血小板聚集和防止动脉粥样硬化等作用.近年来,大蒜的抗肿瘤活性受到越来越多的关注,本实验采用细胞增殖试验和流式细胞术观察大蒜素对胰腺癌细胞的效应并探讨其可能机制.
-
葛根素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨葛根素对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用及其机制.方法 取对数生长期的PANC-1细胞,分别用不同浓度的葛根素(0、50、100、200 μmol/L)干预48 h后,利用CCK-8检测PANC-1细胞增殖水平;Annexinv-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2、Caspase-7表达水平.结果 葛根素对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制呈浓度依赖性;不同浓度的葛根素干预PANC-1细胞48 h后,细胞凋亡率分别为2.47％±0.64％、6.37％±0.71％、8.33％±0.90％、12.40％±1.01％,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P ＜0.01);Western blot实验表明,葛根素对胰腺癌PANC-1细胞干预48 h后,随着葛根素浓度的增加,细胞中Fas、Fas-L、Caspase-7、Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2的表达量下调,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 葛根素可通过激活Fas/Fas-L信号通路诱导PANC-1细胞增殖抑制和凋亡.
-
姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶表达影响的体外研究
目的 探讨姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶(DNMTs)基因表达的影响及其作用机制.方法 将体外培养的PANC-1细胞分为对照组、吉西他滨组、姜黄素组和联合组.各组分别干预48 h后,采用CCK8法检测人胰腺癌PANC-1细胞的增殖情况,采用RT-PCR法检测DNMTs mRNA表达情况,采用Western blotting法检测DNMT1和Caspase-3蛋白表达水平.结果 ①联合组PANC-l细胞增殖抑制率高于姜黄素组和吉西他滨组(P＜0.05).②吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT1及DNMT3mRNA表达均较对照组降低(P＜0.05);联合组低于吉西他滨组和姜黄素组(P＜0.05).③吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT1蛋白表达均较对照组明显下调(P＜0.05,P＜0.01),Caspase-3蛋白表达均较对照组明显上调(P＜0.01);联合组与吉西他滨组和姜黄素组比较有显著差异(P＜0.05).结论 姜黄素可协同吉西他滨促进胰腺癌细胞的凋亡,其机制与调控胰腺癌PANC-1细胞癌基因的去甲基化作用有关.
-
MICA在NK细胞杀伤胰腺癌PANC-1细胞中的作用
探讨MHC I类链相关分子A(MHC class I chain-related A,MICA)在NK细胞杀伤胰腺癌PANC-1细胞中的作用.应用NK细胞分选试剂盒从外周血中分选高纯度NK细胞用于实验,体外培养PANC 1细胞和NK细胞,应用抗体封闭法,观察NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤PANC-1细胞中的作用.将健康志愿者NK细胞在含有sMICA阳性胰腺癌患者血清的培基液中培养,观察NK细胞对PANC-1细胞的杀伤作用.经MICA或NKG2D抗体封闭后,NK细胞的杀瘤活性较封闭前显著减弱(P＜0.01).胰腺癌患者血清sMICA水平显著高于健康志愿者和慢性胰腺炎患者(P＜0.01),胰腺癌患者血清中的sMICA可以显著降低NK细胞对PANC-1细胞的杀伤活性.NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤人胰腺癌PANC-1细胞中起重要作用;sMICA是造成胰腺癌免疫逃逸的重要分子机制之一.
-
miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药
目的:探讨miR-429靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制.方法:建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting实验检测miR-429和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测敲降miR-429对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429与PTEN的靶向关系,Western blotting实验进一步检测miR-429对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用.结果:miR-429在胰腺癌PANC-1细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7) (P＜0.05或P＜0.01),敲降miR-429可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429靶向作用PTEN并下调其表达水平(P＜0.05或P＜0.01);敲降miR-429可通过靶向上调PTN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性(P＜0.05或P＜0.01).结论:miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性.
关键词： 胰腺癌 Panc-1细胞 卡培他滨 miR-429 PI3K/Akt信号通路 -
FOXQ1介导TGF-β1信号通路调控胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成
目的:探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQD基因对胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成的影响及其在转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-p1)信号通路中的作用.方法:用FOXQ 1-shRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒(NC-shRNA)感染PANC-1细胞,流式细胞术检测感染率,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting法检测沉默效果.实验设FOXQ l-shRNA组、NC-shRNA组与空白对照组,用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)进行体外血管生成实验,荧光显微镜下观察细胞血管生成能力.用qPCR、Western blotting法检测VEGF-A、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平;用TGF-β1(终质量浓度5 ng/ml)诱导FOXQ 1-shRNA组和NC-shRNA组细胞,检测诱导前后细胞体外血管生成能力变化与FOXQ1、VEGF-A、MMP-2表达差异.结果:shRNA慢病毒感染率为90％左右,FOXQ 1-shRNA组PANC-1细胞的体外血管生成数目显著少于NC-shRNA组[(9.33±2.08)vs (28.67±2.52)条,P＜0.05],其VEGF-A、MMP-2表达下调(均P＜0.05).TGF-p1增强各组细胞体外血管生成能力,促进FOXQ1、VEGF-A、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平(均P＜0.05).结论:FOXQ1介导了胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成,其机制可能与VEGF-A和MMP-2的下调有关,且可能受TGF-β1通路的调控.
-
125Ⅰ粒子持续照射对Sw1990及Panc-1细胞生物学效应的影响
目的 采用125Ⅰ粒子对胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1行体外持续照射,研究其生物学效应,探讨连续照射对胰腺癌细胞增殖、DNA合成、细胞周期及凋亡的影响,并为胰腺癌放射实验细胞的选择提供参考.方法 将胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1体外培养至对数生长期,行125Ⅰ粒子持续照射,在初始剂量率为12.13 cGy/h时,分别给予总剂量为0、2、4、6、8 Gy的照射,采用克隆形成实验检测照射后细胞的增殖能力,绘制生存曲线,计算细胞存活率(SF2),检测细胞凋亡率和细胞周期,以及3H-TDR掺入实验探究照射后细胞DNA合成情况.结果 经过拟合,计算出Sw1990和Panc-1细胞的SF2值分别为0.766±0.063和0.729±0.045,随着照射剂量增高,两种细胞凋亡率也逐渐升高,Panc-1细胞的大凋亡率出现在6 Gy,Sw1990出现在8 Gy.G2/M期阻滞分数均逐渐升高,3H-TDR掺入放射量逐渐降低.结论 125Ⅰ持续照射胰腺癌细胞时,细胞凋亡及G2/M期阻滞是抑制细胞增殖的主要原因,在剂量为0、2、4、6、8 Gy时,Sw1990及Panc-1细胞生物学效应差异无统计学意义.
-
小干扰RNA沉默NF-κB P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响
目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB P65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖与凋亡的影响.方法:利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB P65的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC-1中.RT-PCR法测定胰腺癌细胞内NF-κB P65mRNA与细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达.ELISA法检测NF-κB亚单位P65的DNA结合活性的改变.MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况.流式细胞仪测定细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果:化学合成的人NF-κB P65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB P65与cyclinD1基因在mRNA水平上的表达(P＜0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).RelA siRNA组中细胞增殖减慢,凋亡率较对照组明显增加(P＜0.01),同时G1期细胞所占的比例较对照组增加了10%,S期和G2/M期细胞则分别减少了4%与6%.结论:体外实验初步证明NF-κB P65基因在胰腺癌细胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡.
-
雷公藤甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡
目的 探讨雷公藤甲素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用不同浓度雷公藤甲素(10、20、40、80、160 ng/ml)作用于体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞.MTT方法观察药物对细胞生长抑制作用；流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR法和Western blot法分别检测热休克蛋白70(HSP70) mRNA和蛋白表达；半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测分析其凋亡机制.结果 雷公藤甲素明显呈剂量依赖性抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖,诱导细胞凋亡(P＜0.05).应用雷公藤甲素后,PANC-1细胞内HSP70 mRNA和蛋白表达明显呈浓度依赖性降低,同时细胞质内Caspase-3活性随剂量增加而增加(P＜0.05).结论 雷公藤甲素体外能够抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长,诱导细胞凋亡发生.其机制可能与抑制细胞HSP70表达和增加Caspase-3活性有关.
关键词： 雷公藤甲素 Panc-1细胞 热休克蛋白70 半胱天冬氨酸蛋白酶3 -
冬凌草甲素逆转耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞耐药性的研究
目的 分析冬凌草甲素对耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞的影响,探讨其逆转耐药的机制.方法 诱导建立耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞;CCK-8法检测吉西他滨对人胰腺癌PANC-1/Gem及PANC-1细胞增殖的影响;采用Chou-Talalay计算药物联合指数(CI);Western blot检测干预前后耐药相关蛋白的表达水平建立皮下异种移植瘤模型,观测不同药物组别对肿瘤生长情况的影响;免疫组化法检测不同组别移植瘤中相关耐药蛋白的变化差异.结果 PANC-1/Gem细胞较PANC-1细胞对吉西他滨的敏感性降低(P<0.01);冬凌草甲素能明显抑制胰腺癌细胞增殖;冬凌草甲素与吉西他滨具有协同抗肿瘤作用;与空白组和吉西他滨组比较,冬凌草甲素及联合组中MRP1和GST-π表达量降低;冬凌草甲素对移植瘤具有抑制作用且能够降低移植瘤中MRP1蛋白的表达.结论 冬凌草甲素在体内外能够抑制人耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞的增殖,通过降低MRP1及GST-π耐药蛋白的表达逆转PANC-1/Gem对吉西他滨的耐药,增强其对吉西他滨的敏感性.
-
RNA干扰下调NF-κB p65基因表达诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡
目的 运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB p65基因表达,并评价其对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 利用阳离子脂质体Lipofectamine(TM) 2000 将化学合成的人NF-κBp65的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染入胰腺癌细胞株PANC-1中.采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变,运用Hoeehst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测p65基因表达下调对PANC-1细胞凋亡的影响.结果 化学合成的人NF-κB p65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB p65mRNA的表达(P<0.01).同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P<0.05).Hoeehst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测发现下调p65基因表达能够诱导PANC-1细胞的凋亡.结论 体外实验初步证明了NF-κB p65基因在胰腺癌细胞凋亡调控方面扮演重要角色.通过沉默其表达可诱导胰腺癌细胞的凋亡.
-
Livin shRNA 表达载体的构建及在胰腺癌细胞的效应研究
目的：构建Livin shRNA真核表达载体，探讨干扰质粒稳定转染的胰腺癌panc-1细胞系效应。方法合成Livin基因干扰序列并定向插入到RNA干扰（RNAi）真核表达载体pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi质粒，通过测序进行鉴定。干扰质粒经脂质体Lipofectamine 2000介导转染panc-1细胞。经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。定量RT- PCR检测所筛选克隆Livin mRNA的转录水平，采用western blot验证Livin蛋白表达水平改变。结果测序证明Livin干扰序列及读码框正确，干扰质粒稳定转染的panc-1细胞在倒置荧光显微镜下呈明亮绿色荧光，定量RT- PCR和western blot检测结果显示Livin shRNA序列对胰腺癌细胞系Livin mRNA及蛋白表达均有抑制作用。结论成功构建Livin shRNA真核表达载体，建立Livin shRNA质粒稳定转染的panc-1细胞系可为进一步研究Livin在胰腺癌细胞中的作用奠定基础。
