首页 > 文献资料
-
人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.方法 从孕16天SD大鼠胚胎脑组织中分离培养胚胎神经干细胞,免疫组化法进行神经干细胞的鉴定及增殖鉴定,采用稀释法筛选和检测人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.结果 剂量筛选结果显示,人参皂苷Rg1组(100、4、0.8 μmol/L)神经球数明显增加.选定人参皂苷Rg1 40,4、0.4 μmol/L作为高、中、低剂量进行进一步实验研究,与对照组相比,人参皂苷Rg1高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加.结论 人参皂苷Rg1可以明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用.
-
依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓横断损伤的修复作用
目的 在体内实验中观察钙依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓损伤以及神经干细胞移植的作用.方法 在成年大鼠全横断脊髓损伤的局部微量注射AnnexinⅡ,观察其对损伤的脊髓神经细胞存活、神经纤维生长和损伤后的功能恢复的影响,以及对联合移植的胚胎神经干细胞移植后存活和迁移的影响.结果 在动物脊髓横断损伤6周,神经干细胞移植4周后,损伤局部微量注射AnnexinⅡ+NSC移植组实验动物的运动评分结果较空白对照组和单独进行NSC移植组都有明显增高(P＜0.01),脊髓损伤处的空洞面积也较上述两组显著减小(P＜0.01);注射AnnexinⅡ+NSC组损伤节段以上荧光金标记神经细胞数目较空白对照组明显增多(P＜0.01).结论 AnnexinⅡ蛋白可能具有减小局部损伤空洞面积,保护损伤的神经元和神经纤维并防止其走向变性和死亡的效应,并对神经干细胞的移植效应有一定的促进和协同作用,使脊髓损伤大鼠的功能得到一定程度的恢复.
-
胚胎神经干细胞移植治疗脑出血后遗症疗效观察
目的 观察胚胎神经干细胞移植治疗脑出血后遗症的临床疗效.方法 5例患者,平均55岁,其中基底节出血术后2例,内囊出血2例,丘脑出血1例.选择胚胎神经干细胞治疗,在手术室腰椎穿刺植入3 mL内含108级的干细胞混悬液,同时注入0.9%氯化钠注射液1 mL;地塞米松注射液5 mg,每周1次,共4次.采用统一神经功能缺损评定评分.结果 胚胎神经干细胞移植后1 ～36 h 2例出现发热,体温为37.6 ～38.0°C,3例头痛、头晕,2例出现腰痛和腿痛.结论 胚胎神经干细胞移植对改善脑出血后遗症有效,显著提高生存质量.
-
体外培养胚胎神经干细胞的增殖及中药有效成分对其增殖能力的影响
[目的]探讨中药有效成分对神经干细胞(NSCs)增值能力的影响并探讨其作用机制.[方法] 从16天SD大鼠胚胎脑体外培养原代NSCs,增生并传代.用Neetin免疫细胞-化学染色(ICC)鉴定NSCs,用BrdU染色鉴定NSCs增生.限量稀释法观察了几种中药有效成分对NSCs增生的作用,如人参皂苷Rg1和黄芪皂苷(ASIV).[结果]不同剂量的人参皂苷Rg1和黄芪皂苷AS Ⅳ能促进神经干细胞的体外增殖.与对照组比较,Rg1和AS的3种剂量可使神经球生成数目增加(P<0.05或P<0.01).其中两种药物成分低剂量组比其他组效果更显著.Hes1,Hes5和细胞周期蛋白D1的实时定量逆转录-聚合酶链(RT-PCR)分析显示Rg1高剂量组的Hes1基因表达和AS高剂量组Hes5基因表达增长明显.同时,Rg1中剂量组的Hes5基因表达轻微增加(P>0.05).两药各剂量组的周期蛋白D1(CyclinD1)基因表达可见有增加,但无统计学意义(P>0.05).[结论]Rg1和ASⅣ可明显促进神经干细胞体外增殖,实时定量检测结果显示HeM、Hes5和周期蛋白D1与Rg1和AS促进神经干细胞增殖有一定关系.
-
不同生长基质对体外培养神经干细胞迁移的影响
[目的]建立神经干细胞培养的模拟体内条件,为寻找更合适的生长基质提供参考.[方法]体外培养获得的大鼠胚胎神经干细胞克隆球种植于用人血浆纤连蛋白和多聚-L-鸟氨酸处理的培养瓶内,观察细胞迁移及生长状况,分析人血浆纤连蛋白和多聚-L-鸟氨酸对神经干细胞生长迁移的影响.[结果]与未用以上两种基质处理的对照组相比,处理组都有细胞迁移,但多聚-L-鸟氨酸的效果比人血浆纤连蛋白的效果明显,二者协同作用对神经干细胞迁移效果更显著.[结论]生长基质对体外培养神经干细胞的贴壁生长及细胞迁移中具有重要作用.
-
大鼠胚胎神经干细胞异体移植对脊髓损伤的修复
目的 观察胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对成年大鼠脊髓损伤(spianl cord injury,SCI)的修复及对轴突再生的作用.方法 制作20只大鼠SCI(T7)模型,随机分为实验组和对照组.伤后2 d实验组移植经全离培养的Wistar大鼠NSCs;对照组只注入DMEM培养液.移植后第1、2、4、6周经电镜及免疫组化观察移植对脊髓轴突再生的影响.结果 实验组NSCs与宿主融合较好,损伤区可见幼稚的呈束状排列的再生轴突;对照组轴突变性未见再生轴突.结论 NSCs植入异体大鼠打击伤后的脊髓可存活,并产生髓鞘样物质促进宿主脊髓轴突再生.
-
舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡及分化的影响
目的：研究不同浓度舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡和分化的影响。方法从孕14 d的Wistar大鼠中分离胚胎神经干细胞并培养，采用神经干细胞标记蛋白Nestin免疫荧光染色对胚胎神经干细胞进行鉴定；BrdU渗入法检测不同浓度舒芬太尼对胚胎神经干细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测不同浓度舒芬太尼对胚胎干细胞凋亡的影响；NeuN／DAPI、GFAP／DAPI双染标记神经元细胞和星形胶质细胞以检测不同浓度苏芬太尼对胚胎干细胞分化的影响。结果从孕14 d的Wistar大鼠中分离得到大鼠胚胎神经干细胞，经过不同浓度的舒芬太尼处理后，发现低浓度（0.5 nmol／L）的舒芬太尼对胚胎神经干细胞的增殖、凋亡和分化没有明显影响，而随着剂量增大至中浓度（5 nmol／L）时可以引起细胞的凋亡和分化，增加至高浓度（50 nmol／L）时可以抑制胚胎神经干细胞的增殖。结论高剂量的舒芬太尼可能通过影响中枢神经系统发育过程中神经干细胞的增殖、凋亡和分化，进而影响神经系统发育。
-
胚胎神经干细胞在出血性脑卒中大鼠脑内移植的实验研究
目的 研究胚胎神经干细胞出血性脑卒中大鼠脑内移植对神经功能缺损改善作用.方法 30只SD大鼠随机分配到单纯脑出血组(A,10只)、培养液移植组(B,10只)及NSCs移植组(C,10只).制作脑出血模型后3d,C组将神经于细胞经Hoechst标记后移植到病灶区,B组注射等量培养液.通过移植前后神经功能评分检测神经功能缺损修复情况,以及冰冻切片后组织免疫荧光检测移植神经干细胞的分化情况.结果 实验中分离、培养的神经干细胞经标记移植人大鼠脑内后,经免疫荧光检测证实能够在血肿腔周边分化成神经元和星形胶质细胞.移植术后2周内3组间大鼠神经功能改善无明显差异.但从移植术后第21天到第28天,神经干细胞移植组大鼠的神经功能改善显著好于培养液移植组和单纯脑出血组P＜0.001,有统计学意义.结论 神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内后能够存活并分化为神经元及星形胶质细胞,促进改善大鼠的神经功能,是一种很有发展前途的治疗方法,值得进一步深入研究.
-
胚胎神经干细胞分化为神经丝蛋白阳性神经元的实验
神经干细胞(neural stem cell,NSC)可以为神经退行性疾病提供取之不尽、用之不竭的细胞供体[1],在不同的环境条件下可以分化为神经元及神经胶质细胞并表达不同的标志蛋白.神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)特异性地分布于神经元胞体及突起中,是轴突成熟的标志之一[2].但是,WFP蛋白在胚胎神经干细胞分化过程中的表达还不清楚.本实验从孕(E11)天大鼠胚胎分离神经干细胞,在体外培养中检测其NFP的表达,以观察胚胎神经于细胞分化为NFP-阳性神经元的状况.
-
纳米磁化标记神经干细胞的MRI大鼠活体示踪实验研究
目的:探讨用MRI活体示踪移植磁化标记神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布的可行性.方法:建立大鼠脑部左侧半球脑损伤模型.2周后将磁化标记胚胎神经干细胞立体定向移植入大鼠脑部右侧半球.在移植后1、3 d及1、2周分别行大鼠头部MRI.结果:移植后行头颅MRI可见移植部位FSE T2WI和GRE T2序列呈环形低信号.实验组大鼠头颅MRI脑内有一低信号线,指向对侧脑挫伤部位.结论:用MRI活体示踪移植磁化标记神经干细胞在TBI模型大鼠脑内迁移和分布是可行的.
-
溶血磷脂酸促进离体大鼠胚胎神经干细胞的增殖及其向胆碱能神经元分化
溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)是一种细胞外磷脂信号.本研究用[3H]-胸腺嘧啶掺入法、免疫细胞化学和Western blot等技术,观察了LPA对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的增殖以及向MAF2标记的一般神经元和ChAT标记的胆碱能神经元的分化的影响.结果显示:(1)在特殊的无血清培养基中加入低浓度的LPA(0.01～1.0 gmol/L)后,NSCs对[3H]-胸腺嘧啶的摄入呈剂量依赖性增加,表明LPA对NSCs有显著的促增殖作用;(2)在培养基中加入胎牛血清以诱导NSCs的分化,发现低浓度的LPA增加MAP2阳性和ChAT阳性神经元的比例,0.1 gmol/L LPA引起的增加达到峰值;(3)Westem blot分析显示LPA促进了MAP2和ChAT的表达;(4)在诱导NSCs出现分化早期,用倒置显微镜观察到低浓度的LPA明显促进细胞突起的生长和细胞的迁移.以上结果表明,低浓度LPA在一定范围内可以促进NSCs的增殖、并分化为一般的MAP2阳性神经元和特殊的胆碱能神经元,而且LPA可以促进在分化早期出现的神经元或神经胶质细胞前体细胞的迁移和突起生长.
-
胚胎神经干细胞移植及胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤的修复作用
将胚胎神经干细胞(neural stem cells, NSCs)移植至成年大鼠损伤的脊髓, 观察移植后NSCs的存活、迁移以及损伤后的功能恢复.实验结果显示: 动物NSCs移植4周后, 斜板实验平均角度和运动评分结果比对照组均有明显增高(P<0.05), 而脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)处的空洞面积显著减小(P<0.05); 在NSCs中加入胶质细胞源性的神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)后, 上述改变更加显著.移植后的NSCs不仅能存活, 而且向损伤的头端和尾端迁移达3 mm之远.这些结果表明, 移植的NSCs不仅可以存活、迁移, 还可减小 SCI空洞面积, 促进动物神经功能的恢复; 此外, 我们的结果还表明GDNF对SCI功能恢复有促进作用.
关键词： 脊髓损伤 胚胎神经干细胞 移植 胶质细胞源性的神经营养因子 -
JNK通路促进乳化异氟烷引起的大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制
目的 探讨乳化异氟烷( EI)对原代培养的SD大鼠胚胎神经干细胞增殖的影响以及JNK通路在此影响中的作用. 方法 建立体外培养胚胎神经干细胞接受EI处理的模型,分为6组(n=8):正常组(N组)、脂肪乳组(F组)、EI处理组(8. 12 、9. 80 、12. 04 mmol/L EI)、9. 80 mmol/L EI组+20 μmol/L SP600125组( EISP组). 细胞处理12 h后,采用噻唑蓝( MTT)法分别检测6组胚胎神经干细胞的细胞活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot 法定量检测Caspase-3蛋白表达. 实验重复3次. 结果 与N组比较,F组各项指标无显著差异, EI组细胞增殖的抑制率明显升高(P<0. 01),EI组细胞的凋亡率明显升高(P<0. 01),EI 组明显上调Caspase-3的表达量( P<0. 05 );EI组内3 个浓度之间比较,细胞增殖的抑制率( P<0. 01 )、细胞的凋亡率以及Caspase-3 的表达量差异均有统计学意义( P<0. 05 );与EI组比较,EISP组细胞增殖的抑制率明显下降 ( P<0. 05 ) , EISP组细胞的凋亡率明显降低 ( P<0. 01 ) , EISP组明显下调Caspase-3的表达量( P<0. 05 ). 结论 EI引起的SD大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制具有一定的浓度依耐性,并且与JNK通路相关.
-
全反式视黄酸促进胚胎神经干细胞诱导分化的研究
目的 本研究观察全反式视黄酸(atRA)对于体外分离培养的胚胎神经干细胞(ENSCs)生长增殖和诱导分化的作用及其可能的分子机制.方法 分离培养孕15 d SD大鼠(E15 d SD Rattus)海马回ENSCs,采用不同组合成分的神经干细胞培养基培养ENSCs,利用MTT法检测其对于ENSCs存活和增殖的影响;采用不同组合成分的神经细胞诱导分化培养基培养ENSCs,利用细胞免疫荧光染色法鉴定ENSCs及atRA对于其诱导分化的影响.结果 MTT实验结果表明,atRA+组、atRA-组和DMSO组均出现ENSCs的增殖效果,而对照组则没有明显的增殖现象,其中atRA-组明显,DMSO组次之,atRA+组弱.AtRA+组与atRA-的ENSCs经过诱导分化后产生的神经细胞类型有较明显差异,并且atRA组处理产生的神经元是对照组的3倍左右.结论 atRA能够抑制ENSCs的增殖,并且抵消神经生长因子对于ENSCs的促进有丝分裂作用,atRA还可以促进ENSCs定向诱导分化为神经元.
-
骨髓间充质干细胞体外诱导神经干细胞分化的观察
来源于人胚脑组织的神经干细胞及来源于16岁非造血系统疾病患者的胸骨骨髓间充质干细胞(BMSCs),采用Transwell培养板在体外共同培养(共培养组),观察神经干细胞的形态变化,在共培养第7天用免疫荧光染色检测神经干细胞中神经元细胞特异性标志物特异性烯醇化酶(NSE),并与单纯低糖DMEM培养基培养的神经干细胞(对照组)进行比较.结果显示,共培养组中的NSE阳性细胞达32.7%±11. 5%,而对照组未见NSE阳性细胞,两组相比,P＜0.05.认为BMSCs在体外可诱导神经干细胞分化为神经元.
-
丙泊酚对鼠胚胎神经干细胞凋亡的影响及作用机制
目的：探讨丙泊酚对鼠胚胎神经干细胞凋亡的影响及作用机制。方法：选择孕14～16 d Wistar大鼠，分离培养胚胎神经干细胞，分别用5、25、50、100μmol／L丙泊酚进行处理，同时设立脂肪乳剂组和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率；流式细胞术观察丙泊酚对胚胎神经干细胞凋亡的影响；提取对照组、脂肪乳剂组、50μmol／L丙泊酚、50μmol／L丙泊酚＋caspase抑制剂培育12 h后的全细胞蛋白， Western-blot检测激活的细胞色素c、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达。结果：丙泊酚可引起胚胎神经干细胞凋亡，其效应呈剂量依赖型（P＜0．05）；丙泊酚处理后的胚胎神经干细胞激活的 caspase-3、CytochromeC、caspase-9、caspase-8蛋白表达水平显著增加（P＜0．05）。结论：丙泊酚主要通过激活caspase依赖的内源性和外源性凋亡通路引起鼠胚胎神经干细胞凋亡。
-
神经干细胞移植治疗对损伤脊髓大鼠神经生长因子表达的影响
目的:检测胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs) 移植治疗对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)修复中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)定位及定量表达,探讨NSCs移植治疗SCI的作用机制.方法:将72只雌性成年SD大鼠随机分为正常组、损伤组、移植组,各组分14、28d两个时间点,应用免疫荧光和蛋白质免疫印迹分别对NGF定位和定量分析.结果:SCI后,NGF阳性神经元多于正常组,与正常组相比有统计学意义(P < 0.05),经NSCs移植治疗后可发现阳性神经元明显增加,分别与正常组、损伤组(SCI)组有统计学意义(P < 0.05);蛋白质印迹结果显示SCI后NGF表达量增加,与正常组相比有统计学意义(P < 0.05),经NSCs移植治疗后可发现其NGF表达量明显增加,分别与正常组、SCI组有统计学意义(P < 0.05).结论:NSCs移植治疗可能通过促进损伤处NGF阳性神经元和蛋白表达量增加,营养神经纤维再生,促进脊髓功能的恢复.
-
小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用
目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.
-
缺氧对胚胎神经干细胞的影响
胚胎缺氧可导致胎儿大脑严重的损伤,目前仍为神经系统残疾的主要原因之一.传统认为神经系统受损后一般不具修复功能,而神经干细胞(neural stem cell NSC)的发现改变了这一观点.人们在成体和胚胎大脑中均发现有神经干细胞的存在,其激活后能产生神经元和胶质细胞,这对疾病的恢复具有重要意义.正是这一特性使神经干细胞成为神经领域中的研究热点,并取得可喜成果.2005年5月,北京海军总医院为一名出生70多天的小儿脑性瘫痪女婴进行了神经干细胞移植手术,成功治疗缺血缺氧性脑病-小儿脑性瘫痪.本文就神经干细胞在缺氧性脑病中的研究状况作一综述.
-
大鼠胚胎神经干细胞的低温保存
目的 建立大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的低温保存方法,探讨经冻存后NSCs的存活及生物学特性变化.方法 使用二甲基亚砜(DMSO)做NSCs的冷冻保护剂于液氮中冻存.复苏后用间接免疫荧光染色方法对细胞的存活、形态及分化能力做鉴定.结果 不同冻存时间及代数的NSCs复苏后存活率无明显差异(P＞0.05),且仍能在体外多次传代,并可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.结论 大鼠NSCs低温冻存、复苏并不影响其原有的形态、增殖及多向分化等生物学特性.
