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加味黄连温胆汤治疗小儿抽动障碍痰热动风证临床研究
目的 观察加味黄连温胆汤治疗小儿抽动障碍(TD)痰热动风证的临床疗效及安全性,检测其对外周血miR-429表达的影响.方法 采用随机数字表法将80例TD患儿分为治疗组和对照组各40例.治疗组予加味黄连温胆汤,每日1剂,每日2次,口服;对照组予氟哌啶醇片,起始剂量0.03 mg/(kg?d),根据症状调整剂量,大用量不超过0.08 mg/(kg?d).均30 d为1个疗程,共3个疗程.观察治疗前后耶鲁综合抽动严重程度量表(YGTSS)评分和中医证候评分,评价临床疗效及中医疗效,检测外周血 miR-429水平,观察不良反应.结果 治疗组临床疗效总有效率为82.5%(33/40),对照组为80.0%(32/40),2组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组中医疗效总有效率为92.5%(37/40),对照组为75.0%(30/40),2组比较差异有统计学意义(P<0.05).与本组治疗前比较,2组治疗后 YGTSS 评分及中医证候评分明显降低(P<0.01),治疗组治疗后中医证候评分明显低于对照组(P<0.05).与本组治疗前比较,2组治疗后miR-429水平明显升高(P<0.01),治疗组治疗后miR-429水平明显高于对照组(P<0.05).治疗组见轻微便秘、腹泻、纳差(分别1、2、2例),对照组见明显嗜睡、头晕(均3例).结论 加味黄连温胆汤治疗小儿TD痰热动风证疗效显著,可上调患者外周血miR-429水平.
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microRNA-429对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖抑制的影响
目的 探索microRNA-429(miR-429)对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖抑制的影响.方法 合成miR-429前体(Pre-miRTM miR-429 precursor),通过脂质体转染至SPC-A1细胞,荧光定量PCR法检测miR-429表达水平,CCK-8法检测细胞活性,Annexin V Assay检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期情况,Western-blot检测细胞周期蛋白情况.结果 pre-miR-429转染后,SPC-A1细胞miR-429表达较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.001);CCK-8检测结果显示,转染pre-miR-429 48、72 h后,细胞的增殖活性较空白组和对照组明显下降,差异有统计学意义(P=0.0167、0.0383,P=0.0320、0.0465);Annexin V Assay显示pre-miR-429转染24h后,pre-miR-429组与对照组比较凋亡率无明显区别,差异无统计学意义(P＞0.05);细胞周期结果显示pre-miR-429组G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞周期阻滞于S期,差异有统计学意义(P =0.0010,0.0006;P=0.0068,0.0133);pre-miR-429组Cyc-lin E蛋白表达与对照组比较无明显区别.结论 在肺腺癌细胞SPC-A1中增加miR-429表达量,可抑制肺癌细胞增殖,促进细胞周期阻滞.miR-429在肺腺癌SPC-A1细胞中可能发挥潜在的抑癌作用.
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EMAP-Ⅱ上调miR-429表达抑制人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力
目的 探讨内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及可能的机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,给予EMAP-Ⅱ处理不同时间后,采用CCK-8检测细胞活力的变化;应用real-time PCR方法检测miR-429在人U87胶质瘤细胞中的表达变化;利用LipofectAMINETM2000将antimiR-429及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,再给予EMAP-Ⅱ,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力.结果 与对照组相比,EMAP-Ⅱ显著抑制了人U87胶质瘤细胞的活力,上调miR-429在人U87胶质瘤细胞的表达水平,上述变化在EMAP-Ⅱ作用0.5 h时效果显著;与EMAP-Ⅱ作用0.5 h组相比,转染anti-miR-429后,EMAP-Ⅱ的作用被阻断,人胶质瘤U87细胞的细胞活力,以及迁移和侵袭能力基本恢复.结论 miR-429参与了EMAP-Ⅱ抑制人U87胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭的调控.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 人U87胶质瘤细胞 miR-429 迁移 侵袭 -
miR-429对肾透明细胞癌细胞侵袭能力的影响
目的 研究miR-429在肾透明细胞癌中的表达,及其对肾透明细胞癌Caki-1细胞侵袭能力的影响.方法 实时定量PCR检测肾透明细胞癌组织中miR-429基因的表达水平.培养肾透明细胞癌Caki-1细胞,将miR-429的前体转染Caki-1细胞,检测转染后Caki-1细胞的侵袭能力.结果 与癌旁组织相比,miR-429在肾透明细胞癌组织中的表达下调显著,且与肾透明细胞癌的分级和淋巴结转移相关.miR-429的前体能够使Caki-1细胞穿透滤膜的数量明显减少.结论 miR-429能够抑制肾透明细胞癌细胞侵袭,发挥转移抑制基因的作用.
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MiR-429通过CRKL靶向作用对U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine(R) LTX试剂将pre-miR-429质粒载体以及anti-miR-429质粒载体分别稳定转染人U87胶质瘤细胞;应用Real-time-PCR验证转染效率;应用CCK-8试剂盒检测miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖能力的影响;应用Real-time PCR和Western blot检测人U87胶质瘤细胞中接头蛋白CRKL(v-crk avian sarcoma virus CT10 oncogene homolog-like,CRKL)的mRNA和蛋白表达含量变化;将CRKL分别转染至U87胶质瘤细胞和miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用CCK-8试剂盒检测人U87胶质瘤细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,应用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的蛋白表达变化. 结果 与对照组相比,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞增殖,明显诱导了凋亡发生,显著降低了CRKLmRNA和蛋白在人U87胶质瘤细胞的表达水平,caspase-3的表达水平显著上调,Bcl-2的表达水平显著降低.CRK过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖能力并且抑制了细胞凋亡,caspase-3的表达水平显著下调,Bcl-2的表达水平显著增强;CRKL过表达有效阻断了miR-429上调caspase-3、降低Bd-2的作用,有效阻断了miR-429抑制U87胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用.结论 MiR-429抑制CRKL从而降低人U87胶质瘤细胞的增殖能力,诱导细胞凋亡.
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miR-429对CRKL表达的靶向调控作用研究
目的 探讨miR-429对CRKL的靶向调控作用.方法 构建双荧光素野生型psiCHECK-2-CRKL-3'-UTR-WT及突变型psiCHECK-2-CRKL-3'-UTR-MUT重组表达载体,双荧光素酶报告实验检测miR-429与CRKL-3'-UTR的靶向结合;瞬时转染miR-429模拟物及其抑制剂,qRT-PCR和Westernblot检测miR-429对内源性CRKL表达水平变化的影响;qRT-PCR检测CRKL上、下调对内源性miR-429表达水平变化的影响.结果 双荧光素报告实验结果表明miR-429直接靶向CRKL-3'-UTR第2个结合位点;同时与HepG2-miR-NC相比,miR-429上调使内源性CRKL蛋白下调了(55.0±1.5)％(P =0.0089),与HepG2-LNA-miR-429相比,miR-429下调使内源性CRKL蛋白上调了(44.3±1.0)％(P =0.0038),差异具有统计学意义,而miR-429上、下调对内源性CRKL mRNA表达变化无影响;且与HepG2-shNC相比,CRKL下调使内源性miR-429表达上调了(102.8±20.0)％(P =0.0069),与HepG2-PCDH相比,CRKL上调使内源性miR-429表达下调了(92.4±3.2)％(P =0.0009),差异具有统计学意义.结论 miR-429靶向作用于CRKL-3'-UTR在转录后蛋白翻译水平负性调控CRKL表达,同时CRKL负性调控内源性miR-429的表达.
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肿瘤干细胞标记物CD133与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究
目的:检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系.方法:采用荧光活化细胞分选法(FACS)分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133+和CD133-两个亚群细胞.再将细胞种植于非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT-PCR及蛋白质印迹检测CD133+和CD133+两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达.结果:血清检出CD133+细胞为67.9％,miR-429的表达量是CD133+细胞的(1.83± 0.91)倍(P＜0.05),CD133+比例与miR-429表达呈负相关(r=0.591,P＜0.05);miR-429+/CD133+组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异(P＜0.05),且miR-429+/CD133+组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429+/CD133+组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论:miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明.
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miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药
目的:探讨miR-429靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制.方法:建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting实验检测miR-429和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测敲降miR-429对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429与PTEN的靶向关系,Western blotting实验进一步检测miR-429对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用.结果:miR-429在胰腺癌PANC-1细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7) (P＜0.05或P＜0.01),敲降miR-429可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429靶向作用PTEN并下调其表达水平(P＜0.05或P＜0.01);敲降miR-429可通过靶向上调PTN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性(P＜0.05或P＜0.01).结论:miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性.
关键词： 胰腺癌 Panc-1细胞 卡培他滨 miR-429 PI3K/Akt信号通路 -
miR-429对头颈部鳞状细胞癌增殖的影响
目的：研究microRNA-429（miR-429）对人头颈部鳞癌细胞增殖的影响。方法：通过qRT-PCR分析19例头颈部鳞状细胞癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织标本中miR-429的表达。通过miR-429 mimics 或miR-429 ASO上调或抑制人喉癌细胞株（Hep-2）和人舌鳞状细胞癌株（SCC-9）细胞中miR-429的水平。用MTT实验分析上调或抑制miR-429的表达水平对Hep-2和SCC-9细胞增殖的影响，并利用生物信息学方法预测miR-429的靶基因。结果：qRT-PCR结果表明头颈部鳞状细胞癌组织中miR-429表达水平较低；上调miR-429表达能抑制Hep-2和SCC-9细胞的增殖，而抑制miR-429表达能促进Hep-2和SCC-9细胞的增殖。生物信息学方法预测miR-429的靶基因为ZEB1基因。结论：miR-429可能通过ZEB1基因抑制头颈部鳞状细胞癌的增殖。
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MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖
目的 观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响.方法 利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到EpCAM (CD326)阳性以及阴性的细胞.对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real-time PCR法检测其干预效果.利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线.分别利用干扰miR-429的EpCAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的EpCAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况.结果 干扰miR-429的表达能降低EpCAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使EpCAM阴性肝癌细胞转化为EpCAM阳性细胞.过表达miR-429可增强EpCAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低EpCAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长.与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-429能够在体外、体内水平影响EpCAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能.
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胃癌SUN-16细胞中miR-429影响ZEB1/2蛋白表达的方式及机制研究
目的:探讨胃癌细胞中miR-429影响ZEB1/2蛋白表达的方式及机制.方法:体外培养胃癌SUN-16细胞,分别转染miR-429表达和反义质粒,Western blot法检测胃癌细胞ZEB1/2表达;定量RT-PCR法检测胃癌细胞miR-429表达;荧光素酶报告基因检测法分析胃癌细胞内ZEB1/2 3'UTR荧光素表达强度.结果:SUN-16-miR-429组细胞miR-429表达较对照组明显增高,ZEB1/2 mRNA3'-UTR荧光素表达强度明显低于对照组;而SUN-16-as-miR-429组细胞miR-429表达较对照组降低,ZEB1/2 mRNA 3'-UTR荧光素表达强度明显高于对照组(P＜0.05).胃癌细胞中miR-429与ZEBmRNA的3'-UTR特异性结合能够抑制ZEB1/2蛋白翻译及表达.结论:miR-429在胃癌发生、进展过程中发挥重要作用,主要通过自身或与其它关键调节因子,如ZEB1/2协同作用而实现.
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miR-429与肿瘤相关性研究进展
微小RNA(microRNA,miR)是一类长度为20～25个核苷酸的小分子非编码RNA,以转录后调节的方式改变靶基因的表达水平,在多种肿瘤的发生、发展中起重要作用.miR-429在多种肿瘤中表达上调或下调,并通过与多个靶基因作用抑制或促进细胞增殖、凋亡、侵袭、转移及耐药,发挥类似癌基因或抑癌基因的作用.miR-429有望成为肿瘤治疗的新靶点,对肿瘤的诊断、耐药、治疗和预后有潜在临床应用价值.本文对miR-429与肿瘤相关性的研究进展作一综述.
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胃癌中微小RNA表达谱及miR-429表达水平的研究
目的 检测胃癌组织及胃癌细胞中微小RNA (miRNA)表达谱,并测定胃癌组织及胃癌细胞中miR-429的表达水平.方法 采用基因芯片技术检测胃癌组织、癌旁正常胃组织标本及胃癌细胞株( SGC-7901)、正常人胃上皮细胞(GES-1)中miRNAs的表达.挑选基因芯片结果中胃癌组织表达显著下调的miR-429,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测7例正常胃组织、52例胃癌组织、胃癌细胞SGC-7901、GES-1中miR-429的表达.结果 基因芯片结果表明,胃癌组织中有23个miRNA上调,如miR-21、miR-30b等,31个下调如miR-429、miR-200等.qRT-PCR检测显示,miR-429在胃癌组织中下降约63.4％ (P＜0.01),在胃癌细胞株SGC7901中下降约76.2％(P＜0.01).结论 miR-429在胃癌组织中表达显著下调,可能作为胃癌特异性miRNA,在胃癌的发生发展过程中有重要作用.
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胃癌组织中miR-200a、miR-200b和miR-429的表达及临床意义
0 引言胃癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,2006年中国肿瘤发病和死亡资料分析显示,无论城市还是农村,胃癌的发病率和死亡率均居恶性肿瘤第二位,已成为我国今后恶性肿瘤防控的重点[1].目前,胃癌的病因尚不明确,加之滞后的临床表现和诊断,以手术为主、放化疗为辅的综合治疗手段亦未能显著提高患者的5年生存率[2].所以,探寻胃癌新特异性的分子标志物,为其早期诊断开辟新途径具有重要意义.
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MiR-429及其目标基因HSPA4L在弱精症低活力精子中的表达
目的 探讨miR-429及其目标基因热休克蛋白A4L(HSPA4L)在弱精症患者低活力精子中的表达.方法 收集20份成年健康生育能力的精液标本和20份弱精症患者精液标本,按照WHO第五版规定的精液分级标准,对液化后的精液进行常规参数分析;利用qRT-PCR检测精子中miR-429的表达水平;通过生物信息学手法预测miR-429的靶点;构建HSPA4L 3'UTR双萤光素酶报告载体,采用双萤光素酶报告实验验证miR-429的靶基因;利用qRT-PCR和Western blot分别检测HSPA4L mRNA和蛋白的表达水平.结果 弱精症精子活力低于健康对照组,同时miR-429在弱精症精子中表达上调.通过生物信息学手法、双萤光素酶报告基因基检测以及转染实验发现miR-429通过作用于HSPA4L 3'UTR来抑制HSPA4L mRNA和蛋白的表达.进一步的qRT-PCR分析发现弱精症组的HSPA4L mRNA和蛋白的表达水平下调,并且HSPA4L mRNA表达水平与miR-429的表达水平呈负相关(r=-0.725,P＜0.05).结论 MiR-429在低活力精子中的表达上调,可能通过调控HSPA4L基因来影响精子的活力.
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miR-429对食管鳞癌细胞EC9706的影响及其分子机制探讨
目的:探讨miR-429对食管鳞癌细胞的影响及其靶向潜在的分子机制.方法:将miR-429 mim-ics、miR-429 mimics NC、miR-429 inhibitor和miR-429 inhibitor NC分别转染至食管鳞癌细胞EC9706,分别设为miR-429 mimics组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor组和miR-429 inhibitor NC组.利用实时荧光定量检测各组miR-429的表达情况,MTT法检测细胞增殖率,通过TargerScans Human7.1预测miR-429靶基因并利用荧光素酶活性检测对其进行验证,蛋白免疫印迹检测各组细胞中E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)蛋白的表达情况.结果:空白对照组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor NC组之间miR-429相对表达量差异不明显(P＞0.05).与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著上调(P＜0.05);与miR-429 inhibitor NC组相比,miR-429 inhibitor组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著下调(P＜0.05).与miR-429 mimics NC组相比,miR-429mimics组中EC9706细胞增殖率显著下降(P＜0.05),miR-429 inhibitor NC组中EC9706细胞增殖率无显著差异(P＞0.05),miR-429 inhibitor组中EC9706细胞增殖率显著增加(P＜0.05).预测miR-429靶基因为ZEB1,荧光素酶活性检测证实ZEB1为miR-429靶基因.与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著下调(P＜0.05),miR-429 inhibitor NC组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量无显著差异(P＞0.05),miR-429 inhibitor组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著上调(P＜0.05).结论:miR-429可通过靶向ZEB1抑制食管鳞癌细胞增殖.
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胰腺癌患者血循环miR-429的表达及其临床意义
目的:检测胰腺癌患者血浆miR-429表达水平,分析其表达与胰腺癌临床病理学特征的关系.方法:定量PCR检测BXPC-3、PANC-1细胞株以及3例胰腺癌组织中miR-429的表达水平.收集未经治疗的37例胰腺癌患者的血浆标本,采用实时定量PCR法检测miR-429表达水平,收集胰腺癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-429水平的临床病理参数分布差异.结果:相较于正常胰腺细胞、胰腺组织,miR-429在胰腺癌细胞株和癌组织中均处于低表达水平(P<0.05).miR-429表达与肿瘤大小、TNM临床分期、神经浸润以及生存期密切相关,均有统计学差异(P<0.05).结论:循环血miR-429的表达可能成为胰腺癌早期诊断、预后判断的标.
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miR-429在膀胱癌中的表达及作用机制
目的 探讨miR-429在膀胱癌中的表达及作用机制.方法 选取广东省内三家医院2014年1月～2016年12月期间收集的膀胱癌标本120例,同时选取距离肿瘤边缘大于2 cm的癌旁组织作为对照.SYBR green实时荧光定量PCR法检测miR-429在膀胱癌、癌旁组织中的相对表达量,并分析miR-429与临床相关参数的关系,同时观察miR-429过表达或者敲除时T24细胞(膀胱癌细胞系)增殖和凋亡情况.结果 膀胱癌组织miR-429的相对表达水平高于正常膀胱组织(P<0.05);miR-429的表达水平与膀胱癌的肿瘤大小、有无淋巴结转移,及TNM分期有关(P<0.05);肿瘤直径大于5 cm组miR-429的表达水平高于肿瘤直径小于5 cm组;有淋巴结转移的膀胱癌组miR-429的表达水平高于无淋巴结转移的膀胱癌组;Ⅲ+Ⅳ期膀胱癌组miR-429的表达水平高于Ⅰ+Ⅱ期膀胱癌(P<0.05).miR-429的表达水平与膀胱癌患者的年龄、性别无关(P>0.05).miR-429过表达时,膀胱癌细胞(T24细胞系)增殖增加,凋亡减少;而miR-429敲除时,膀胱癌细胞(T24细胞系)增殖减少,凋亡增加.结论 miR-429在膀胱癌的发生发展中起着重要作用,其表达水平对膀胱癌的严重程度及预后情况具有一定的参考价值.
