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EMAP-Ⅱ上调miR-429表达抑制人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力
目的 探讨内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及可能的机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,给予EMAP-Ⅱ处理不同时间后,采用CCK-8检测细胞活力的变化;应用real-time PCR方法检测miR-429在人U87胶质瘤细胞中的表达变化;利用LipofectAMINETM2000将antimiR-429及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,再给予EMAP-Ⅱ,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力.结果 与对照组相比,EMAP-Ⅱ显著抑制了人U87胶质瘤细胞的活力,上调miR-429在人U87胶质瘤细胞的表达水平,上述变化在EMAP-Ⅱ作用0.5 h时效果显著;与EMAP-Ⅱ作用0.5 h组相比,转染anti-miR-429后,EMAP-Ⅱ的作用被阻断,人胶质瘤U87细胞的细胞活力,以及迁移和侵袭能力基本恢复.结论 miR-429参与了EMAP-Ⅱ抑制人U87胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭的调控.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 人U87胶质瘤细胞 miR-429 迁移 侵袭 -
内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ上调LINC00263增强血肿瘤屏障通透性
目的 研究LINC00263在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增加血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制.方法 应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中LINC00263的表达以及EMAPⅡ处理后LINC00263的表达.应用Lipo3000将LINC00263过表达和沉默质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性.应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1(zonula occludens-1)、Occludin和Claudin-5的表达.结果 与ECs组相比,LINC00263在GECs中表达显著降低;EMAPⅡ作用后GECs中LINC00263的表达显著上调;与对照组相比,LINC00263(+)组TEER值显著降低,HRP渗透量显著升高,ZO-1、Occludin和Claudin-5的mRNA和蛋白表达水平显著降低;LINC00263(-)组的结果与之相反.结论 EMAPⅡ增强血肿瘤屏障的通透性可能与上调LINC00263的表达,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达相关.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 血肿瘤屏障 LINC00263 紧密连接 -
RhoA在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的作用
目的 探索信号分子RhoA在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ (endothelial monocyte activatingpolypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)通透性中的作用.方法 采集出生3～5d的Wistar胎鼠的大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)原代培养;将BMECs与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型;共培养后的BMECs随机分成3组(每组6例):对照组、EMAP-Ⅱ组和C3 exoenzyme+ EMAP-Ⅱ组.测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量评估各组BTB通透性变化情况;Western blot法检测BMECs上紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平;免疫荧光法检测ZO-1和细胞骨架蛋白F-actin在BMECs上的分布与表达.结果 与对照组相比较,EMAP-Ⅱ组BTB通透性显著增高,ZO-1和F-actin在BMECs上的表达水平显著降低,应力纤维形成明显增多;EMAP-Ⅱ的上述作用受到RhoA抑制剂C3 exoenzyme预处理的显著抑制.结论 信号分子RhoA在EMAP-Ⅱ增强BTB通透性中发挥着重要的作用.
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内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的信号机制
目的探索内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ( endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ, EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障( blood-tumor barrier, BTB)通透性的相关信号机制。方法采集出生3~5 d 的 Wistar 胎鼠的大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞( brain microvascular endothelial cells, BMECs)原代培养；将BMECs 与 C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型；共培养后的BMEC被随机分成5组(每组6例)：对照组、EMAP-Ⅱ组、H7+ EMAP-Ⅱ组、C3 ex-oenzyme+EMAP-Ⅱ组和C3 exoenzyme+ H7+EMAP-Ⅱ组。测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量评估各组 BTB 通透性变化情况；Western blot法检测 BMECs上紧密连接相关蛋白occludin 和 ZO-1的表达水平变化；免疫荧光法检测oc-cludin 和 ZO-1在 BMECs上的分布与表达。 Western blot法检测 BMECs上肌球蛋白轻链( myosin light chain, MLC)和磷酸化肌球蛋白轻链( phosphomyosin light chain, pMLC)的表达水平变化。结果与对照组相比较, EMAP-Ⅱ组 BTB的通透性明显增高,BMECs上occludin 和 ZO-1的表达水平明显降低,pMLC 的表达水平明显增高；EMAP-Ⅱ的上述作用受到蛋白激酶C ( protein kinase C, PKC)抑制剂 H7或(和) RhoA 抑制剂 C3 exoenzyme 预处理的明显抑制。结论信号分子PKC和RhoA在EMAP-Ⅱ增强BTB通透性过程中发挥着重要的作用,信号通路 PKC-pMLC 和 RhoA-pMLC参与调控该过程。
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磷酸化caveolin在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ开放血肿瘤屏障中的表达水平变化
目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2在低剂量内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的磷酸化水平变化.方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组12只):EMAP-Ⅱ0h、1h、2h和4h组.采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Westernblot和免疫荧光法检测大鼠脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平变化.结果:EMAP-Ⅱ作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平均显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常.结论:EMAP-Ⅱ可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与磷酸化caveo-lin-1和caveolin-2的表达水平上调有关.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 血肿瘤屏障 跨细胞途径 Caveolin 磷酸化 -
Caveolin-2在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的表达水平变化
目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-2在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(BTB)通透性过程中的表达水平变化.方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组16只):EMAP-Ⅱ处理0h、1h、2h和4h组.采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;RT-PCR、Western blotting、免疫组化和免疫荧光法检测脑胶质瘤组织毛细血管上caveolin-2的表达水平变化.结果:EMAP-Ⅱ作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;同时,EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上caveolin-2的表达水平显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常.结论:EMAP-Ⅱ可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与caveolin-2的表达水平上调有关.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 血肿瘤屏障 通透性 caveolin-2 跨细胞途径
