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扶正抑瘤方联合替莫唑胺抑制大鼠脑胶质瘤生长及调控血肿瘤屏障相关蛋白的作用研究
目的 探讨扶正抑瘤方联合替莫唑胺对C6脑胶质瘤大鼠肿瘤生长及血肿瘤屏障相关蛋白(zonula odluden,ZO-1)、P-糖蛋白(glycoprotein,gp)及细胞质膜微囊蛋白Caveolin-1的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、替莫唑胺组、扶正抑瘤方组和扶正抑瘤方联合替莫唑胺组.采用立体定位法建立C6大鼠脑胶质瘤模型,造模当天开始,各组大鼠每天给予相应药物灌胃处理,观察其体重、生存状态,第21天时,计算大鼠生存率,采用HE染色法观察胶质瘤脑组织的病理变化,免疫组织化学法检测大鼠脑肿瘤浸润区胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)和半胱天冬酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3的表达,Western blot法检测脑肿瘤浸润区血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、ZO-1、P-gp及Caveolin-1蛋白表达的变化.结果 与模型组相比,替莫唑胺、扶正抑瘤方及联合用药组肿瘤浸润区GFAP和Caspase-3的表达显著上升(P<0.01),ZO-1和P-gp的表达显著下降(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,扶正抑瘤方和联合用药组VEGF的表达显著下降(P<0.05,P<0.01),与模型组相比,联合用药组Caveolin-1的表达明显下降(P<0.05).结论 扶正抑瘤方联合替莫唑胺对脑胶质瘤具有明显的防治作用,可促进胶质瘤细胞的分化和凋亡,抑制血管新生,开放血肿瘤屏障,限制肿瘤生长.
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冰片对血肿瘤屏障通透性的影响及机制
目的 观察天然冰片对体外血肿瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)模型通透性和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号转导通路相关激酶表达与激活的影响.方法 大鼠C6脑胶质瘤细胞与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养建立BTB模型后,设空白组,冰片低、中、高剂量组(25、50、100 μg/mL),每组7个时点(0、10、30、60、120、180、240 min),每个时点3个样本.空白组在冰片组给药同时更换空白培养基,冰片组给不同剂量冰片,给药后不同时间点收集细胞.辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)流量测定BTB通透性,Western blot 检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK),磷酸化ERK(phosphorylation extracellular signal regulated protein kinase,P-ERK),P38MAPK,磷酸化P38MAPK(phosphor-P38,P-P38MAPK),氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和磷酸化JNK(phosphorylation c-Jun N-terminal kinase,P-JNK)的表达.结果 与本组0 min比较,低、中、高剂量组各时间点通透率升高(P＜0.01),P-ERK表达先升高,在30 min达极高值,逐渐恢复初始水平(P＞0.05).与空白组比较,低剂量组10～240 min HRP通透率升高(P＜0.01),30、60 min P-ERK蛋白表达升高(P＜0.05),低、中、高剂量组180 min P-JNK表达升高(P＜0.05),240 min P-JNK表达降低(P＜0.05).与低剂量组比较,中剂量组10～180 min P-ERK表达升高(P＜0.05),30～180 min通透率升高(P＜0.05),180 min和240 min P-JNK表达降低(P＜0.05).与中剂量组比较,高剂量组10～180 min通透率升高(P＜0.05),10～ 180 min P-ERK表达升高(P＜0.05),180 min和240 minP-JNK表达降低(P＜0.05).结论 冰片通过激活MAPKs信号通路的ERK磷酸化进而可逆性下调相关蛋白的表达,达到调节可逆性BTB开放的效果.
关键词： 天然冰片 丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路 血肿瘤屏障 -
冰片对血脑肿瘤屏障开放程度及紧密连接蛋白表达的影响
目的：探讨冰片对血脑肿瘤屏障（BTB）开放程度和紧密连接蛋白表达的影响。方法建立体外BTB试验模型，分为空白对照组（培养基）、冰片低剂量组（25μg/ml）、冰片中剂量组（50μg/ml）、冰片高剂量组（100μg/ml）。采用辣根过氧化酶（HRP）流量和酶联免疫吸附法（ELISA）测定不同时间点BTB的通透性及紧密连接相关蛋白的表达。结果随着时间延长，低、中、高剂量组各时间点通透率均逐渐升高（P﹤0.01）；低、中、高剂量组10～240 min通透率高于空白组（P﹤0.01）；中、高剂量组30～180 min通透率高于低剂量组（P﹤0.05）；高剂量组10～180 min通透率高于中剂量组（P﹤0.05）；不同时间点间和不同组别间Occludin蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；各组ZO-1和F-actin蛋白表达量均先降低后逐渐升高（P﹤0.05）；低剂量组30 min后，中、高剂量组60 min后蛋白表达量缓慢上升，且均至240 min时基本与给药前水平一致（P﹥0.05）；中、高剂量组在30、60 min时ZO-1和F-actin蛋白表达量低（P﹤0.01），并存在剂量依赖趋势，即高剂量﹤中剂量﹤低剂量﹤给药前。结论冰片可以增加BTB的开放程度，从而提高化疗药物的透过率，其机制可能是通过调控紧密连接蛋白ZO-1和F-actin的表达而实现的。
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联合应用缓激肽与罂粟碱开放血肿瘤屏障作用
目的 探讨缓激肽与罂粟碱( papaverine, PA)联合应用对血肿瘤屏障通透性和紧密连接( tight junctions, TJ)相关蛋白之闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达的影响.方法 应用大鼠胶质瘤模型,伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验检测血肿瘤屏障通透性,免疫组织化学法测定ZO-1 蛋白表达,RT-PCR 法测定ZO-1 mRNA 表达.结果 与对照组大鼠脑肿瘤组织中EB 含量 [(0.182 ± 0.026)μg/g]比较,缓激肽、罂粟碱、缓激肽+罂粟碱组(联合组)大鼠脑肿瘤组织中EB 含量[分别为(0.487 ± 0.031)、(0.503 ± 0.029)和(0.875 ± 0.040)μg/g]均明显升高(P ＜ 0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中EB 含量进一步增加(P ＜ 0.01).与对照组(0.379 ± 0.011)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 蛋白表达[分别为(0.259 ± 0.008)、(0.252 ± 0.010)和(0.135 ± 0.015)]均明显下降(P ＜ 0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 蛋白表达进一步降低(P ＜ 0.01).与对照组(0.876 ± 0.062)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠肿瘤组织中ZO-1 mRNA 表达[分别为(0.735 ± 0.036)、(0.695 ± 0.050)和(0.420 ± 0.047)]均明显降低(P ＜ 0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 mRNA 表达进一步降低(P ＜ 0.01).结论 缓激肽与罂粟碱联合应用对血肿瘤屏障的开放作用具有协同效应,此作用与紧密连接相关蛋白ZO-1 表达水平下调有关.
关键词： 缓激肽 罂粟碱 血肿瘤屏障 闭锁小带蛋白1(ZO-1) -
低频超声辐照联合小剂量缓激肽选择性开放大鼠血肿瘤屏障及其可能机制
目的 研究应用低频超声辐照和小剂量缓激肽颈内动脉灌注非侵袭性、可逆性、靶向大限度开放血肿瘤屏障的可行性.方法 应用伊文氏兰检测血肿瘤屏障通透性,透射电镜观察吞饮小泡数量,Western blot法检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2的蛋白表达,RT-PCR法检测caveolin-1和caveolin-2的mRNA表达.结果 低频超声辐照联合应用小剂量缓激肽后伊文氏兰检测血肿瘤屏障通透性显著增加(P<0.01),透射电镜示吞饮小泡数量显著增加(P<0.01),RT-PCR法、S-P免疫免疫组织化学法、Western blot法检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2的mRNA和蛋白表达表达显著增加(P<0.01).结论 低频超声辐照联合应用小剂量缓激肽通过增加胞吞饮转运显著增加血肿瘤屏障通透性.
关键词： 血肿瘤屏障 吞饮小泡 Caveolin-1 caveolin-2 低频超声 大鼠 -
HCG11靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性
目的 研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制.方法 应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中HCG 11和miR-543的表达以及二者的结合作用.应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性.应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达.荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用.结果 HCG11在GECs中表达显著增加,miR-543在GECs中表达显著降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显著降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平.MiR-543与HCG11存在靶向结合作用.HCG11表达沉默显著增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性.结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性.
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缓激肽对大鼠脑胶质瘤微血管中NF-κ B活性和表达的影响
目的 研究缓激肽(bradykinin,BK)对脑胶质瘤大鼠肿瘤微血管内皮细胞中转录因子核因子-κ B(nuclearfactor-kappaB,NF-κ B)的活性和表达的影响.方法 雌性Wistar大鼠96只,随机分为6组,即对照组、BK 5min组、BK 10min组、BK 15min组、BK 30min组和BK 60min组.每组16只.建立大鼠C6胶质瘤模型,颈动脉给药,应用TransAMTMNF-κ B p65试剂盒检测NF-κ B(p65)的活性;应用免疫组织化学法检测大鼠脑肿瘤微血管上NF-κ B(p65)的分布和表达水平变化;应用western blot法检测肿瘤微血管内皮细胞中NF-κB(p65)蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,BK显著增强了NF-κ B的活性;在脑肿瘤组织,NF-κB(p65)主要表达在肿瘤微血管和肿瘤细胞上,BK能够增加NF-κ B(p65)在肿瘤微血管上的表达,并且上调肿瘤微血管内皮细胞细胞核中NF-κ B(p65)的蛋白表达,在BK作用15 min时效果显著(P＜0.01).结论 缓激肽能够增强脑胶质瘤大鼠肿瘤微血管中NF-κ B的活性和表达水平,NF-κ B可能是BK开放血肿瘤屏障机制之一.
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ROCK介导缓激肽开放SD大鼠血肿瘤屏障
目的 利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障.方法 应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变；应用Westernblot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达；应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变.结果 Y-27632显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高；Y-27632显著抑制ZO-1的表达；Y-27632抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,应力纤维形成明显减少.结论 ROCK介导缓激肽开放血肿瘤屏障.
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内皮-单核细胞激活多肽酶Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的机制
目的 研究内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ(endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)选择性开放血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)的作用机制.方法 荷瘤大鼠被随机分成4组(每组12只):对照组,EMAP-Ⅱ组,寡霉素组和寡霉素+EMAP-Ⅱ组.采用伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Western Blot法检测脑微血管内皮细胞上紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平变化;双重免疫荧光法检测EMAP-Ⅱ和α-ATP合成酶在脑微血管内皮细胞上的分布.结果 EMAP-Ⅱ组BTB通透性显著高于对照组和寡霉素组(P＜0.01),紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平显著降低(P＜0.01),其作用受到ATP合成酶抑制剂寡霉素( Oligomycin)的显著抑制(P＜0.05);EMAP-Ⅱ与α-ATP合成酶在胶质瘤微血管内皮细胞上共定位.结论 EMAP-Ⅱ可能通过开放紧密连接增强BTB的通透性,脑微血管内皮细胞上的α-ATP合成酶是其可能的作用位点.
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siRNA-Tie1下调紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1增加血肿瘤屏障通透性
目的 研究Tie1 AS和Tie1表达变化对血肿瘤屏障通透性的影响和相关机制.方法 建立体外血脑屏障和血肿瘤屏障模型,Real-time PCR检测hCMEC/D3细胞中Tie1 AS和Tie1的表达水平.转染pIRES2-EGFP-Tie1 AS表达载体上调体外血肿瘤屏障模型hCMEC/D3细胞中Tie1 AS的表达,Western blot检测Tie1的表达变化.将siRNA-Tie1转染人hCMEC/D3细胞并建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测hCMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1的表达和分布变化.结果 和正常脑微血管内皮细胞相比,体外血肿瘤屏障模型hCMEC/D3细胞中Tie1的表达显著增加,而Tie1 AS的表达显著降低.上调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1 AS的表达水平,能够显著降低Tie1的表达.下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1的表达后屏障通透性显著下降,伴有claudin-5、occludin和ZO-1的表达下调以及在细胞膜上呈不连续分布.结论 体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中低表达的Tie1 AS能够负性调控Tie1的表达,进而通过调节紧密连接相关蛋白的表达和分布影响屏障的通透性.
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RMP7介导血肿瘤屏障通透性增加的机制研究
目的 研究miR-200b是否参与RMP7介导的血肿瘤屏障(BTB)通透性增加及可能机制.方法 测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变,应用Real-Time PCR检测RMP7作用BTB后大鼠脑微血管内皮细胞(ECs)miR-200b的表达,应用miR-200b mimic和miR-200b inhibitor分别转染GECs (ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞)后分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白zonula occludens-1(ZO-1)的表达;应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(F-actin)结构和分布的改变.结果 CRMP7诱导TEER值显著降低,HRP显著升高;RMP作用GECs后,使GECs内源性miR-200b表达显著降低;miR-200b-mimic和miR-200b inhibitor成功转染到GECs中;miR-200b mimic显著抑制RMP7诱导TEER值的降低,HRP的升高,以及ZO-1的表达,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少;miR-200b inhibitor结果与miR-200c mimic实验结果相反.结论 MiR-200b参与RMP-7介导的B1B通透性增加.
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内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ上调LINC00263增强血肿瘤屏障通透性
目的 研究LINC00263在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增加血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制.方法 应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中LINC00263的表达以及EMAPⅡ处理后LINC00263的表达.应用Lipo3000将LINC00263过表达和沉默质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性.应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1(zonula occludens-1)、Occludin和Claudin-5的表达.结果 与ECs组相比,LINC00263在GECs中表达显著降低;EMAPⅡ作用后GECs中LINC00263的表达显著上调;与对照组相比,LINC00263(+)组TEER值显著降低,HRP渗透量显著升高,ZO-1、Occludin和Claudin-5的mRNA和蛋白表达水平显著降低;LINC00263(-)组的结果与之相反.结论 EMAPⅡ增强血肿瘤屏障的通透性可能与上调LINC00263的表达,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达相关.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ 血肿瘤屏障 LINC00263 紧密连接 -
miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响
目的 研究miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响.方法 将miR-19a模拟物转染至人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3,应用real-time PCR法检测miR-19a的表达.用过表达miR-19a的hCMEC/D3细胞和人U251胶质瘤细胞建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统检测血肿瘤屏障跨内皮阻抗值的变化;Western blot和免疫荧光法检测体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达.结果 经miR-19a模拟物转染后,hCMEC/D3细胞中miR-19a的表达水平显著升高;血肿瘤屏障跨内皮阻抗值显著下降;体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达水平显著降低,在细胞膜上呈不连续分布.结论 miR-19a过表达能显著增加血肿瘤屏障的通透性,其机制之一可能与降低紧密连接相关蛋白相关.
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RNA干扰沉默神经轴突导向因子受体4基因增加血肿瘤屏障通透性
目的 研究神经轴突导向因子受体(Robo4)对血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响.方法 建立了体外BTB模型,应用Real-time PCR和Western blot检测Robo4在正常人脑微血管内皮细胞和胶质瘤微血管内皮细胞中的表达变化.设计合成针对Robo4基因的小干扰RNA,转染至人脑微血管内皮hCMEC/D3细胞,下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Robo4的表达,跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗透试验分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测hCMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达和分布变化.结果 和正常人脑微血管内皮细胞相比,Robo4在胶质瘤微血管内皮细胞中的表达显著上调.下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞Robo4的表达后,TEER值显著降低,辣根过氧化物酶透过率显著增高;同时胶质瘤微血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达显著降低,在细胞膜上呈不连续分布.结论 RNA干扰沉默Robo4表达能够显著降低紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达,增加BTB通透性.
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Y-27632抑制缓激肽选择开放血肿瘤屏障的研究
目的 研究Rho associated kinase(ROCK)特异性抑制剂Y-27632是否抑制缓激肽开放血肿瘤屏障.方法 应用EVOM测定仪测定跨内皮阻抗值,分析血肿瘤屏障的通透性;应用辣根过氧化物酶渗漏实验分析血肿瘤屏障的通透性;应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞丝状肌动蛋白结构和分布的改变.结果 BK作用15min时,跨内皮阻抗值低,辣根过氧化物酶流量高,血肿瘤屏障通透性高;此时大鼠脑微血管内皮细胞边界的丝状肌动蛋白分布不连续,应力纤维形成增加.ROCK的特异性抑制剂Y-27632显著抑制了由缓激肽引起的血肿瘤屏障通透性升高和应力纤维的增加.结论 Y-27632抑制缓激肽引起的血肿瘤屏障通透性升高,可能与丝状肌动蛋白结构和分布的改变和应力纤维的增加相关.
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缓激肽对脑胶质瘤大鼠紧密连接影响的形态学观察
目的 研究缓激肽(BK)对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障紧密连接的影响.方法 采用伊文氏兰(EB)法检测缓激肽作用后血肿瘤屏障(BTB)通透性的变化;应用透射电镜(TEM)观察BK作用后内皮细胞间紧密连接的变化,同时应用硝酸镧[La(NO3)3]和辣根过氧化物酶(HRP)作示踪剂,检测缓激肽作用后,小分子和大分子示踪剂通过紧密连接的情况.结果 缓激肽可使血肿瘤屏障对伊文氏兰的通透性增加,在15 min时达到高峰,以后逐渐下降.透射电镜显示缓激肽作用15 min时,肿瘤组织毛细血管内皮细胞间紧密连接的完整性明显破坏,缝隙指数显著增加,同时可见硝酸镧和辣根过氧化物酶在紧密连接处沉积.结论 缓激肽能够通过开放紧密连接选择性增加血肿瘤屏障的通透性.
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蛋白激酶C在内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的作用
目的 探索信号分子蛋白激酶C( protein kinase C,PKC)在内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ( endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)通透性中的作用.方法 荷瘤大鼠被随机分成3组C每组8只):对照组、EMAP-Ⅱ组、H7+EMAP-Ⅱ组.采用伊文思蓝( Evans blue,EB)渗透性实验评估实验各组BTB通透性的变化；Western Blot法、免疫组织化学法及免疫荧光法检测脑微血管内皮细胞上紧密连接相关蛋白occludin表达水平的变化.结果 与对照组和H7+EMAP-Ⅱ组相比较,EMAP-Ⅱ组BTB通透性显著增高,紧密连接相关蛋白occludin的表达水平显著降低,EMAP-Ⅱ的作用受到PKC抑制剂H7预处理的显著抑制.结论 信号分子PKC在EMAP-Ⅱ增强BTB通透性中发挥着重要的作用.
关键词： 内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ 血肿瘤屏障 通透性 蛋白激酶C -
RhoA在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性中的作用
目的 探索信号分子RhoA在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ (endothelial monocyte activatingpolypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)通透性中的作用.方法 采集出生3～5d的Wistar胎鼠的大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)原代培养;将BMECs与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型;共培养后的BMECs随机分成3组(每组6例):对照组、EMAP-Ⅱ组和C3 exoenzyme+ EMAP-Ⅱ组.测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量评估各组BTB通透性变化情况;Western blot法检测BMECs上紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平;免疫荧光法检测ZO-1和细胞骨架蛋白F-actin在BMECs上的分布与表达.结果 与对照组相比较,EMAP-Ⅱ组BTB通透性显著增高,ZO-1和F-actin在BMECs上的表达水平显著降低,应力纤维形成明显增多;EMAP-Ⅱ的上述作用受到RhoA抑制剂C3 exoenzyme预处理的显著抑制.结论 信号分子RhoA在EMAP-Ⅱ增强BTB通透性中发挥着重要的作用.
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TRPV4通道激活增加大鼠血肿瘤屏障通透性
目的 研究TRPV4通道激活对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)通透性的作用效果及机制.方法 制备脑胶质瘤模型,应用伊文氏蓝(EB)渗透评估TRPV4激动剂GSK1016790A作用后血肿瘤屏障通透性的变化;RT-PCR和Westen blot法检测脑胶质瘤组织中质膜微囊结构蛋白caveolin-1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 GSK1016790A可引起脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性的改变,灌注15min后BTB通透性开始增加,灌注45min时达高峰,而后有所下降,3h基本恢复灌注前水平.在灌注GSK1016790A 15min后,caveolin-1mRNA和蛋白表达水平开始增加,在45min时表达多,而后有所下降,在3h基本恢复到灌注前水平.结论 TRPV4通道激活选择性开放血肿瘤屏障可能与跨细胞途径标志蛋白caveolin-1表达水平上调相关,本研究可为人脑胶质瘤的化疗提供新思路.
关键词： TRPV4 血肿瘤屏障 Caveolin-1 GSK1016790A -
脑肿瘤药物转运的研究进展
脑胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤.血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)的存在极大地限制了抗肿瘤药物进入脑肿瘤组织,降低了脑肿瘤的治疗效果,因此有效开放BTB成为提高脑胶质瘤化疗疗效的重要策略.近年来,越来越多的研究证实了多种转运药物到达肿瘤组织的方法,如脑室内给药、对流增强转运法、干扰BTB法以及选择性调控BTB的通透性等.其中,通过选择性调控BTB通透性,转运药物进入脑肿瘤组织具有效果好、副作用小的优点,是恶性脑肿瘤化疗中极具前景的治疗方法.本文概述了转运药物进入脑肿瘤组织的研究进展.
