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miR-200b调控糖尿病慢性创面血管再生的研究进展
microRNA是血管再生重要的调控因子,主要作用于转录后水平的调控.其中,miR-200b对糖尿病慢性创面血管再生的负调控作用研究日益深入.目前已知其作用靶点包括Ets-1、VEGF、VEGFR1、VEGFR2和GATA蛋白等.
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MiR-200b及miR-200c在三阴性乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨miR-200b和miR-200c在三阴性乳腺癌细胞中的表达及意义.方法 分别提取三阴性乳腺癌、LuminalA型乳腺癌及其周围正常乳腺中的miRNA,用实时荧光定量PCR法检测miR-200b、miR-200c的表达,并复习相关文献.结果 miR-200b在LuminalA型及三阴性乳腺癌中的表达均降低(P＜0.05).miR-200c在LuminalA型乳腺癌中的表达未见明显下降(P＞0.05),而在三阴性乳腺癌中的表达明显下降(P＜0.05).结论 miR-200b及miR-200c均可能参与了三阴性乳腺癌的侵袭、转移的过程,但miR-200c起着更主要的作用.
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MicroRNA-200b在吉西他滨诱导的胰腺癌细胞株MiaPaCa-2上皮间质转化中的作用
目的 探讨MicroRNA-200b (miR-200b)在吉西他滨诱导的胰腺癌MiaPaCa-2细胞上皮间质转化(EMT)过程中的作用.方法 应用不同浓度的吉西他滨诱导MiaPaCa-2细胞,选择50％细胞生长抑制时的药物浓度(IC50),获取耐药MiaPaCa-2细胞.采用脂质体法将miR-200b和无意义小分子片段(阴性对照)分别转染MiaPaCa-2细胞,再用IC50的吉西他滨诱导细胞,获取转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞及阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化；Transwell小室测定细胞侵袭能力；实时定量PCR检测细胞miR-200b表达；蛋白质印迹法检测细胞E-cadherin、Vimentin、Zeb1、Zeb2蛋白表达.结果 吉西他滨处理后细胞体积逐渐缩小,呈纺锤样,细胞间连接减少,伪足增多,呈现间质细胞特征.耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数从亲本细胞的(26±3)个上升至(85±6)个,Vimentin、Zeb1、Zeb2表达分别上升至亲本细胞的(1.87±0.17)、(2.57±0.21)、(5.24±0.83)倍,miR-200b表达下降至亲本细胞的(0.36±0.01)倍,E-cadherin表达下降至亲本细胞的(0.47±0.05)倍.而转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数下降至(42±4)个,Zeb1、Zeb2表达下降至阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞的(0.36±0.07)、(0.08±0.01)倍.结论 吉西他滨诱导胰腺癌MiaPaCa-2细胞过程中细胞出现EMT,其机制可能与miR-200b表达下调有关.
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miR-200b通过靶向PROM1抑制胶质瘤细胞侵袭
目的 探讨miR-200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR-200b抑瘤的分子机制.方法 构建PROM1 3’端非翻译区(3'UTR)荧光素酶报告载体,荧光素酶报告检测miR-200b对PROM1 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-200b模拟物转染胶质瘤U87细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测PROM1 mRNA和蛋白的表达水平.将PROM1 siRNA转染U87细胞,Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响.结果 双荧光素酶报告检测显示,miR-200b能特异性地与PROM1 3'UTR结合,抑制其荧光素酶活性,其荧光素酶活性强度下降了57.0％,差异有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低,转染miR-200b组和对照组中PROM1 mRNA的表达水平分别为0.64 ±0.05和0.95 ±0.09,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA于扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力.转染PROM1siRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为(85±9)个和(155±16)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力.
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miR-200b靶向DNMT3A抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡
目的：探讨miR-200b是否通过靶向调控DNMT3A抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖与诱导凋亡。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达；将miR-200b mimics、scramble、DNMT3A-siRNA、control-siRNA分别转染于A549细胞，其中scramble与control-siRNA分别作为miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA的阴性对照组。采用Western blot检测A549细胞中DNMT3A蛋白表达；采用MTT与AnnexinV-FITC/PI染色法分别检测A549细胞的增殖与凋亡，比较miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA对A549细胞增殖与凋亡的影响。结果 qRT-PCR结果显示，miR-200b在非小细胞肺癌A549、H1299、L78、H460细胞中的表达均明显低于正常人支气管上皮16HBE细胞，其中以A549细胞下调为明显（P<0.05）。Western blot结果显示，外源过表达miR-200b或沉默DNMT3A能明显下调A549细胞中DNMT3A蛋白的水平。MTT结果显示，转染miR-200b mimics或沉默DN?MT3A 48 h、72 h、96 h后，反映细胞增殖的光密度（OD）值与各自阴性对照组比较明显减小（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI染色结果显示，转染miR-200b mimics或沉默DNMT3A后，A549细胞的凋亡率分别为（23.33%±0.90%、20.41%±0.70%）均高于各自阴性对照组（5.28%±0.55%、5.68%±0.47%，P<0.05）。结论 miR-200b通过下调DNMT3A抑制人非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡。
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miR-200b抑制鼻咽癌CNE-2细胞放疗抵抗的作用观察
目的 探讨miR-200b介导鼻咽癌放疗抵抗,揭示miR-200b作为抑癌基因作用.方法 Real-time PCR检测miR-200b在鼻咽癌细胞系中的含量;将miR-200b模拟物转染CNE-2,miR-200b抑制剂转染CNE-2R,采用MTS检测其对CNE-2细胞生长的影响.结果 miR-200b在CNE-2R细胞中表达下调.特异性miR-200b模拟物具有逆转CNE-2R细胞的辐射抗性作用,而转染miR-200b抑制剂可增强CNE-2细胞的辐射抗性.过表达miR-200b可抑制鼻咽癌细胞的生长.结论 miR-200b参与了鼻咽癌细胞的放射抵抗,miR-200b可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的治疗策略.
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RMP7介导血肿瘤屏障通透性增加的机制研究
目的 研究miR-200b是否参与RMP7介导的血肿瘤屏障(BTB)通透性增加及可能机制.方法 测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变,应用Real-Time PCR检测RMP7作用BTB后大鼠脑微血管内皮细胞(ECs)miR-200b的表达,应用miR-200b mimic和miR-200b inhibitor分别转染GECs (ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞)后分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白zonula occludens-1(ZO-1)的表达;应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(F-actin)结构和分布的改变.结果 CRMP7诱导TEER值显著降低,HRP显著升高;RMP作用GECs后,使GECs内源性miR-200b表达显著降低;miR-200b-mimic和miR-200b inhibitor成功转染到GECs中;miR-200b mimic显著抑制RMP7诱导TEER值的降低,HRP的升高,以及ZO-1的表达,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少;miR-200b inhibitor结果与miR-200c mimic实验结果相反.结论 MiR-200b参与RMP-7介导的B1B通透性增加.
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MiR-200b对1型糖尿病大鼠胸主动脉炎症基因表达的影响
目的 探讨1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200b的变化及对炎症基因表达的影响.方法 研究分为正常对照组和糖尿病组.通过对SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建1型糖尿病大鼠动物模型,采用qRT-PCR和Western印迹方法测定1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200b、炎症基因环氧化酶-2(COX-2)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)及miR-200b靶基因转录抑制因子Zeb1的表达.结果 qRT-PCR显示糖尿病组大鼠胸主动脉miR-200b的表达较正常对照组明显上调(4.587±1.261对1.728±0.372,P＜0.05);炎症介质COX-2、MCP-1、TNF-α和IL-6的表达量显著升高(3.808±1.294对0.864 ±0.093, P＜0.05;3.203 ±0.402对1.485 ±0.433, P＜0.01;2.288 ±0.480对0.784±0.089,P＜0.01;6.334±2.683对0.981 ±0.176,P＜0.05);Western印迹显示正常对照组和糖尿病组Zeb1表达水平分别为0.496±0.031和0.264±0.012 (P＜0.01),糖尿病组较正常对照组下降46.7％.结论 1型糖尿病时大鼠胸主动脉中miR-200b上调,并抑制靶标Zeb1表达,进而增加调控通路下游相关炎症基因的表达,这可能是糖尿病血管并发症发生发展的重要机制之一.
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miR-200b调控肌球蛋白轻链激酶/磷酸化肌球蛋白轻链信号通路对肠上皮紧密连接的影响
目的：探究miR-200 b对肠上皮紧密连接的影响及作用机制。方法利用阴性对照慢病毒及表达miR-200 b的慢病毒感染Caco-2细胞形成NC株和200 b株，以10 ng/mL肿瘤坏死因子（TNF-α）处理建立体外肠上皮损伤模型，并分为NC组、NC+TNF-α组、200 b组和200 b+TNF-α组。测量4组细胞对肠上皮跨膜电阻抗（TEER）及对异硫氰酸荧光素-右旋糖酐（FITC-dextran）的通透性；Western blot检测肌球蛋白轻链激酶（MLCK）及磷酸化肌球蛋白轻链（P-MLC）表达。结果与NC组相比，NC+TNF-α组TEER值降低、对FITC-dextran通透量显著增高、MLCK和P-MLC表达上调，差异均有统计学意义（P
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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析
目的 在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况.方法 通过经优化后确定的佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析.结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同.结论 尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关.
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胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化及临床意义
目的 观察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化特点,探讨其临床意义.方法 回顾性分析浙江省舟山医院自2012年1月～2014年6月消化内科及胃肠外科收治的84例胃癌患者为研究对象(观察组),选择30例健康人为对照组.采用qRT-PCR检测所有研究对象血清miR-200b和miR-200c水平,比较2组间血清miR-200b和miR-200c水平差异,探讨胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平与其临床及病理特点之间的关系.结果 胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b和miR-200c水平差异无统计学意义;较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826(95％ CI:0.741 ～ 0.911,P＜0.001)和0.856(95％CI:0.778 ～0.935,P＜0.001).结论 胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明显降低,并且与临床分期和淋巴结转移密切相关,检测血清miR-200b和miR-200c水平有助于判断胃癌并判断预后.
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microRNA-200 b下调DNMT3 A的表达对SD大鼠心肌纤维化抑制作用的机制研究
目的 研究微小RNA200b(miR-200b)靶向下调DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对SD大鼠心肌纤维化的影响.方法 SD大鼠构建心肌纤维化模型,HE和Masson法观察病理学改变;qRT-PCR检测miR-200b的表达;Western blot法测定α-SMA、Col1A1、DNMT3A的表达.提取SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),将miR-200b促进剂和抑制剂分别转染于CFs中,同时设立空白及阴性对照组.qRT-PCR检测miR-200b、DNMT3A、Col1A1和 α-SMA水平;Western blot测定DNMT3A、Col1A1和α-SMA的蛋白表达;MTT法观察CFs的增殖情况.结果 HE和Masson染色结果显示,模型组SD大鼠心肌组织胶原纤维明显增多,心肌细胞排列杂乱;qRT-PCR显示miR-200b表达降低;Western blot显示,α-SMA、Col1A1、DNMT3A蛋白水平升高.体外实验qRT-PCR结果显示,α-SMA、Col1A1、DNMT3A在miR-200b促进剂组中的表达降低,miR-200b抑制剂组则相反;Western blot显示,miR-200b促进剂组中DNMT3A、Col1A1和 α-SMA的表达降低,miR-200b抑制剂组结果则相反;MTT结果显示,外源性过表达miR-200b 24、48、72、96 h后,CFs增殖水平降低,而miR-200b抑制剂组结果相反.结论 miR-200b可能通过下调DNMT3A来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化.
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上调miR-200b对人喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨上调miR-200b对人喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 培养人喉癌Hep-2细胞,随机分为miR-200b模拟物组、miR-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测各组细胞中miR-200b表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、β-catenin蛋白表达.结果 与空白对照组和miR-对照序列组相比,miR-200b模拟物组细胞中miR-200b相对表达量显著升高,差异有统计学意义(F=70.766,P＜0.001);与空白对照组[(0.22±0.05)、(0.45±0.07)、(0.59±0.06)、(0.72±0.08)和(0.85±0.07)]和miR-对照序列组[(0.24±0.06)、(0.46±0.08)、(0.61±0.07)、(0.70±0.05)和(0.84±0.06)]相比,miR-200b模拟物组细胞24、48、72、96 h时吸光度A值[(0.21±0.04)、(0.29±0.06)、(0.40±0.04)、(0.53±0.07)和(0.58±0.05)]均降低,差异均有统计学意义(F=0.134,P=0.876;F=6.449,P=0.010;F=37.299,P＜0.001;F=5.352,P=0.018;F=29.921,P＜0.001);与空白对照组[(140.2±2.3)、(127.9±6.0)]和miR-对照序列组[(141.0±1.2)、(130.4±7.4)]相比,miR-200b模拟物组迁移细胞数和侵袭细胞数[(98.5±2.4)、(90.9±2.8)]均减少,差异均有统计学意义(F=845.523,P＜0.001;F=88.859,P＜0.001);与空白对照组[(0.35±0.07)、(0.54±0.10)、(0.76±0.12)]和miR-对照序列组[(0.24±0.03)、(0.60±0.14)、(0.65±0.24)]相比,miR-200b模拟物组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量(0.54±0.14)升高,而N-cadherin、β-catenin蛋白相对表达量[(0.31±0.10)、(0.35±0.06)]降低,差异均有统计学意义(F=17.287,P＜0.001;F=10.083,P=0.002;F=10.434,P=0.001).结论 上调喉癌细胞中miR-200b基因表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制上皮-间质转化过程有关.
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二烯丙基二硫对非小细胞肺癌细胞miR-200b表达的影响及意义
目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人非小细胞肺癌A549（A549细胞）miR-200b表达的影响及意义。方法常规培养A549细胞、人支气管上皮16HBE细胞，连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量；将A549细胞分别与终浓度为0、25、50、100、200、400μmol／L的DADS共培养，连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量。将常规培养的A549细胞随机分为五组，scramble 组转染miR-200b无关序列，miR-200b组转染miR-200b模拟物，空白组仅加培养液常规培养，DADS组加入200μmol／L DADS处理，DADS＋miR-200b组转染miR-200b模拟物的同时加入200μmol／L DADS处理，各组均连续培养48 h时，采用MTT法检测细胞增殖情况（OD值）。结果16HBE细胞miR-200b相对表达量为1．364±0．031，高于A549细胞的0．673±0．023（P＜0．05）；0、25、50、100、200、400μmol／L DADS处理A549细胞48 h时miR-200b相对表达量分别为0．673±0．023、0．752±0．019、0．805±0．011、1．041±0．049、1．176±0．046、1．342±0．051，各浓度间比较P均＜0．05。 scramble组、miR-200b组、空白组、DADS组、DADS＋miR-200b组OD值分别为0．740±0．027、0．552±0．024、0．735±0．021、0．561±0．027、0．462±0．026，miR-200b组、DADS组、DADS＋miR-200b组OD值均低于scramble组及空白组，DADS＋miR-200b组均低于DADS组及miR-200b组，组间比较P均＜0．05。结论 DADS能够上调A549细胞miR-200b表达，进而抑制细胞增殖，发挥抗肿瘤作用。
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胃癌组织中miR-200a、miR-200b和miR-429的表达及临床意义
0 引言胃癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,2006年中国肿瘤发病和死亡资料分析显示,无论城市还是农村,胃癌的发病率和死亡率均居恶性肿瘤第二位,已成为我国今后恶性肿瘤防控的重点[1].目前,胃癌的病因尚不明确,加之滞后的临床表现和诊断,以手术为主、放化疗为辅的综合治疗手段亦未能显著提高患者的5年生存率[2].所以,探寻胃癌新特异性的分子标志物,为其早期诊断开辟新途径具有重要意义.
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miR-200b靶向VEGF抑制肺癌细胞侵袭
目的：探讨miR-200b是否通过靶向调控血管内皮生长因子( VEGF)抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭,以揭示miR-200b的抑瘤机制。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在非小细胞肺癌和癌旁正常肺组织中的表达；将非小细胞肺癌A549细胞分为miR-200b mimics组、miR-200b inhibitors组、scramble组、VEGF-siRNA组和control-siR-NA组,分别将 miR-200b mimics、miR-200b inhibitors、scramble、VEGF-siRNA、control-siRNA 转染于 A549细胞；采用Western blot检测A549细胞中VEGF蛋白表达,采用Transwell侵袭实验分别检测A549细胞侵袭能力。结果qRT-PCR检测结果显示,miR-200b在A549、16HBE细胞的表达分别为0.704±0.053、1.582±0.071,两者比较,差异有显著性( P<0.01)；Western blot结果显示,外源过表达miR-200b或沉默VEGF能明显下调A549细胞中VEGF蛋白的表达水平；Transwell侵袭实验显示,转染miR-200b mimics或沉默VEGF 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(127±6)和(136±8),与对照组(189±14)比较能明显抑制A549细胞的穿膜能力(P<0.05),而转染miR-200b inhibitors可拮抗VEGF-siRNA对A549细胞的侵袭抑制作用。结论 miR-200b通过靶向调控VEGF抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭。
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miR-200b通过调控KLF4作用于p21及Cyclin-D1对子宫内膜癌细胞周期的影响
目的:探讨miR-200b通过调控Krüppel样因子4(KLF4)作用于p21及Cyclin-D1对子宫内膜癌细胞周期的影响.方法:体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株,实验分为三组:(1)对照组:不做任何处理;(2)miR-200b组:转染miR-200b mimics;(3)KLF4组:同时转染miR-200b mimics和KLF4过表达质粒.检测细胞miR-200b、KLF4、p21和Cyclin-D1基因和蛋白的表达,检测细胞增殖和细胞周期.结果:与对照组比较,miR-200b组和KLF4组细胞miR-200b表达显著增加,组间比较,差异具有统计学意义(P＜ 0.05);miR-200b组细胞KLF4和p21基因和蛋白表达显著降低,Cyclin-D1基因和蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05);KLF组细胞KLF4和p21基因和蛋白表达显著增加,Cyclin-D1基因和蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);miR-200b组第24、36、48和72 h的A(OD)值显著增大,KLF4组A(OD)值显著减小,差异均具有统计学意义(P＜0.05);miR-200b组G1期细胞比例(40.3％)显著减少,KLF4组G1期细胞比例(68.5％)显著增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-200b很可能是通过调控KLF4及其下游p21和Cyclin-D1表达从而影响子宫内膜癌细胞的增殖和细胞周期.
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miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖
目的 研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制.方法 将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRT-PCR以及Western blot方法检测的CRKL的mRNA和蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3'UTR的结合位点.将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化.分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化.结果 与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的mRNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3'UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用.结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖.
关键词： 人胶质瘤U251细胞 miR-200b 接合蛋白家族 增殖 -
miR-200b在肝癌中靶向调控Bmi1基因的实验研究
目的 研究miR-200b在肝癌中对Bmi1的调控作用,并分析其结合位点.方法 首先利用生物信息学软件预测人Bmi1 3'-UTR上miR-200b可能的结合位点;然后构建Bmi1 3'-UTR野生型和突变型报告载体,应用双荧光素酶报告基因分析检测Bmi1 3'-UTR上miR-200b的结合位点;后利用real time PCR和Western blot在人肝癌细胞HepG2中验证miR-200b对Bmi1的调控作用.结果 人Bmi1 3'-UTR上存在3个miR-200b的潜在结合位点;双荧光素酶报告基因分析提示,转染miR-200b-3p mimic后野生型组荧光素酶活性明显低于突变型组;real time PCR和Western blot结果提示在HepG2细胞中过表达miR-200b可明显下调Bmi1的表达.结论 miR200b在肝癌中可通过靶向结合Bmi1基因3'-UTR特异性调控Bmi1基因的表达.
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SOX2和miR-200b对胶质瘤临床病理和预后的影响及其相互关系
目的 观察胶质瘤中miR200b和SOX2的表达情况,分析miR200b和SOX2与胶质瘤患者预后的关系及其相互关系.方法 选取河南省人民医院神经外科自2001年1月至2005年12月手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤标本123例,另取23例因颅脑外伤行颅内减压术的正常脑组织作为对照,实时定量PCR(qRT-PCR)检测标本miR200b的表达,免疫组织化学染色检测胶质瘤SOX2的表达;统计分析不同级别胶质瘤miR200b与SOX2表达的关系、胶质瘤患者临床参数与SOX2、miR-200b表达的关系,Cox比例风险回归模型分析miR-200b、SOX2的表达对患者生存时间的影响并比较miR-200b、SOX2表达不同患者的生存曲线.结果 胶质瘤的病理分级越高,miR-200b的表达越低,在Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤中,SOX2阳性表达组胶质瘤miR-200b的表达均低于SOX2阴性表达组,差异有统计学意义(P＜0.05).不同病理分级胶质瘤miR-200b高表达率、SOX2阳性表达率比较差异有统计学意义(P＜0.05).Cox比例风险回归模型显示miR-200b、SOX2是胶质瘤患者预后的独立危险因素.在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤患者中,miR-200b高表达患者的5年生存率高于miR-200b低表达患者,SOX2阴性表达患者的5年生存率高于SOX2阳性表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR200b和SOX2的表达仅仅在分化程度差的Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组织中有差异,对患者的生存时间有影响.
