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DNMT3a单核苷酸多态性与噪声性听力损失易感性的关联研究
目的 探讨DNA甲基化转移酶3a基因(DNMT3a)的单核苷酸多态性与中国汉族噪声暴露工人的噪声性听力损失(NIHL)易感性之间的关联.方法 采用病例-对照的研究方法,以江苏省某化纤工厂和某能源公司2015年参加职业健康体检的噪声暴露的998名作业工人(男性908人,女性90人)为研究对象.通过问卷调查和现场噪声检测(GBZ/T 189.8-2007)获取研究对象的一般信息和噪声暴露情况,按照纯音气导听阈测试(GBZ 49-2014)的结果将其分为病例组(n=498,双耳高频平均听阈＞ 25 dB)和人为匹配的对照组(n=500,双耳高频平均听阈≤25 dB).采用TaqMan探针法对DNMT3a的单核苷酸多态性位点rs7590760进行基因分型.结果 显性模型中,rs7590760各基因型在病例组和对照组之间的分布差异具有统计学意义(P=0.001),运用Logistics回归模型对性别、年龄、吸烟和饮酒情况进行调整后,CC/CG基因型噪声性听力损失发病风险是GG基因型发病风险的1.56倍,调整OR=1.56(95％ CI 1.22～2.01).对接噪工龄和噪声暴露水平进行分层分析后发现,当噪声作业工龄≤16年和＞16年时,调整OR分别为1.67(95％CI1.17～2.38)和1.52(95％CI 1.06～2.17);在≤85 dB、86 ～92 dB和＞92 dB 3种噪声暴露强度下,对应的调整OR分别为1.56(95％CI 1.06 ～2.30)、1.67(95％CI0.94～2.99)和1.51(95％CI 1.01 ～ 2.26).结论 DNMT3a基因rs7590760位点的CC/CG基因型可能是中国汉族噪声暴露作业工人发生噪声性听力损失的危险因素.
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miR-200b靶向DNMT3A抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡
目的：探讨miR-200b是否通过靶向调控DNMT3A抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖与诱导凋亡。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达；将miR-200b mimics、scramble、DNMT3A-siRNA、control-siRNA分别转染于A549细胞，其中scramble与control-siRNA分别作为miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA的阴性对照组。采用Western blot检测A549细胞中DNMT3A蛋白表达；采用MTT与AnnexinV-FITC/PI染色法分别检测A549细胞的增殖与凋亡，比较miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA对A549细胞增殖与凋亡的影响。结果 qRT-PCR结果显示，miR-200b在非小细胞肺癌A549、H1299、L78、H460细胞中的表达均明显低于正常人支气管上皮16HBE细胞，其中以A549细胞下调为明显（P<0.05）。Western blot结果显示，外源过表达miR-200b或沉默DNMT3A能明显下调A549细胞中DNMT3A蛋白的水平。MTT结果显示，转染miR-200b mimics或沉默DN?MT3A 48 h、72 h、96 h后，反映细胞增殖的光密度（OD）值与各自阴性对照组比较明显减小（P<0.05）。AnnexinV-FITC/PI染色结果显示，转染miR-200b mimics或沉默DNMT3A后，A549细胞的凋亡率分别为（23.33%±0.90%、20.41%±0.70%）均高于各自阴性对照组（5.28%±0.55%、5.68%±0.47%，P<0.05）。结论 miR-200b通过下调DNMT3A抑制人非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡。
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成人急性髓系白血病中DNMT3A的表达及其意义
目的：比较DNA甲基化转移酶（DNMT）3A在初发成人急性髓系白血病（AML）与正常对照者间的差异，探讨DNMT3A表达与法美英（FAB）分型、核磷酸化蛋白1（NPM1）、FMS样的酪氨酸激酶3（FLT3）以及c-KIT之间的关系。方法运用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测78例初发成人AML患者和10例对照者的DNMT3A表达水平。结果初发成人AML患者DNMT3A表达低于对照组（P=0.002）。FAB分型与DNMT3A表达量具有相关性（r=0.342，P=0.002）。M3与M5患者间DNMT3A表达具有明显差异（P=0.001）。NPM1突变阳性患者DNMT3A表达高于野生型患者（P=0.001）。NPM1+/FLT3-内部串联重复（ITD）-患者DNMT3A表达高于其他类型患者（NPM1+/FLT3-ITD+、NPM1-/FLT3-ITD+、NPM1-/FLT3-ITD-）（P=0.007）。c-KIT突变阳性患者DNMT3A表达显著低于野生型患者（P=0.007）。DNMT3A表达量与骨髓涂片中原始细胞比例无相关（r=0.208， P=0.078）。DNMT3A表达在核型正常与异常患者（P=0.214），FLT3突变阳性患者与野生型患者间（P=0.397）差异无统计学意义。结论 DNMT3A在初发成人AML中表达降低，且在FAB各型间存在差异。DNMT3A低表达与NPM1野生型、c-KIT基因突变的协同作用可能在AML发病中起重要作用。
关键词： DNA甲基化转移酶3a 急性髓系白血病 荧光定量聚合酶链反应 基因突变 -
DNA甲基化转移酶3A调控心肌成纤维细胞活化过程中胶原的表达
目的 目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确.文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控.方法 选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试剂分为5组:DNMT3A组(CFs转染重组的DNMT3A基因过表达质粒)、空载体组(CFs转染pEGFP-C3空载体质粒)、DNMT3A siRNA组(CFs转染小干扰DNMT3A siRNA)、DNMT3A siRNA NC组(CFs转染DNMT3A siRNA NC空载体质粒)、空白对照组(CFs不作转染处理).ELISA检测空白对照组、DNMT3A组、DNMT3A siRNA组细胞上清液胶原变化.qRT-PCR检测5组相关mRNA的表达,Western blot法检测除DNMT3A siRNA NC组外其余4组CFs中ColⅠ、ColⅢ和DNMT3a蛋白的表达及CCK8法检测4组细胞的增殖活性.结果 DNMT3A组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原明显高于空白对照组(P<0.05),DNMT3A siRNA组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量明显低于空白对照组(P<0.05).DNMT3A组的ColⅠ、ColⅢ及DNMT3A表达量较空白对照组、空载体组明显升高(P<0.05),而DNMT3A siRNA组明显低于空白对照组及空载体组(P<0.05).DNMT3A组细胞活力(2.087±0.317)明显高于空载体组(1.063±0.223)、空白对照组(1.082±0.207),差异有统计学意义(P<0.05);DNMT3A siRNA组(0.463±0.087)明显低于空载体组、空白对照组(P<0.05).结论 DNMT3A可以促进CFs的活化增殖,并且能够增加胶原的表达,从而对心肌纤维化产生促进作用.
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TGF-β1刺激心肌成纤维细胞活化过程中DNMT3 A的表达变化
目的：探讨转化生长因-β1（TGF-β1）刺激大鼠心肌成纤维细胞活化过程中DNA甲基化转移酶3A （DNMT3A）的表达变化情况。方法将30只雄性SD大鼠处死，取大鼠心肌组织，以组织块酶消化法分离细胞，通过差速贴壁离心法收集、培养大鼠心肌成纤维细胞。模型组的心肌成纤维细胞分别给予TGF-β11、5、10μg · L-1，建立体外心肌成纤维细胞活化模型。MTT法检测细胞增殖活性，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液胶原含量，Western blot法检测DNMT3A和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达。结果与正常对照组相比较，模型组TGF-β1刺激细胞12、24、48 h后，血清中I型胶原和III型胶原的含量明显增高，细胞增殖活性明显增强，Western blot检测显示模型组DNMT3A和α-SMA的表达明显高于正常对照组。结论心肌纤维化的形成可能与DNMT3A表达上调有关，潜在的分子作用机制有待于进一步研究。
关键词： 心肌纤维化 转化生长因-β1 α平滑肌肌动蛋白 DNA甲基化转移酶3a -
miRNA-143通过DNMT3a介导血管平滑肌细胞增殖作用的研究
目的 探讨miRNA-143(miR-143)和DNMT3a在血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制.方法 分别用miR-143的前体和抑制物干预血管平滑肌细胞(VSMCs),MTT法检测VSMCs增殖情况,qRT-PCR法检测miR-143和DNMT3a的表达,Westem blot法检测DNMT3a的蛋白表达,巢式降落式特异性甲基化PCR法分析miR-143启动子区的甲基化状态,双荧光素酶报告基因检测系统分析荧光素酶活性.结果 miR-143的前体干预VSMCs后,细胞的增殖活性显著下降,DNMT3a mRNA和蛋白表达均降低,而miR-143的抑制物作用后细胞增殖活性明显增强,DNMT3a表达增加;转染miR-143前体后,荧光素酶活性减弱,而用miR-143抑制物作用细胞后,荧光素酶活性明显增强(P＜0.01);干扰DNMT3a后,miR-143的表达增加,但miR-143启动子区甲基化程度降低.结论 miR-143和DNMT3a相互调控可能是VSMCs增殖的重要机制.
关键词： miR-143 DNA甲基化转移酶3a 血管平滑肌细胞 增殖 -
DNMT3A R882突变在成人急性髓系白血病中的研究进展
DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)是重要的DNA甲基化转移酶之一,与血液系统恶性肿瘤的发生发展密切相关.近几年研究发现DNMT3A R882在成人急性髓系白血病(AML)中高频突变,并且成为研究热点.DNMT3A R882突变通过改变DNMT3A结构,使DNMT3A酶活性下降、全基因组DNA低甲基化,促进成人AML发生发展.DNMT3A R882突变在成人AML患者完全缓解(CR)时的长期存在,是预后不良的主要生物分子学标志,同时也意味着常规的微小残留病灶监测(MRD)不能作为R882突变的分子标志.现就近几年对成人AML患者中DNMT3A R882突变的研究进展做一综述.
关键词： 急性髓系白血病 DNA甲基化转移酶3a 突变
