首页 > 文献资料
-
用原位杂交法鉴定人促红素基因整合到CHO细胞染色体内
目的探讨原位杂交法检测基因组中特定基因的可行性及检测效果.方法非放射性探针原位杂交法.结果该法灵敏、可靠,有效率可达90%以上,是检测目的基因的一种有效方法.
-
清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA基因表达的影响
目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响.方法:以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA基因表达,并进行比较.结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P<0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0.01).结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR-NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.
-
清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α mRNA基因表达的影响
目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m RNA基因表达的影响.方法:以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TNF-α的mRNA基因表达,并进行比较.结果:病毒对照组较正常细胞组之TNF-αmRNA基因表达明显增强(P<0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的m RNA表达(P.<0.01).结论:①腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TNF-αm RNA表达增高;②清肺口服液可下调TNF-α的m RNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.
-
胃喜康对乙酸性胃溃疡大鼠胃黏膜细胞生长因子蛋白、基因表达的影响
目的 观察胃喜康煎剂对乙酸致胃溃疡模型大鼠生长因子的影响.方法 40只大鼠随机分为空白对照组(空白组)、模型组、雷尼替丁组、胃喜康低剂量组(低剂量组)、胃喜康高剂量组(高剂量组)5组,每组8只.造模、采集标本,用免疫组化法检测表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达;用原位杂交法、RT-PCR方法观测EGFR基因表达的情况.结果 EGF、TGF-α、EGFR蛋白表达增加(P<0.05);EGFRmRNA表达增强(P<0.05).结论 胃喜康煎剂通过适当提高EGF、TGF-α、EGFR表达水平,在一定程度上起到抗胃溃疡并防止其复发的作用.
-
人端粒酶RNA在成釉细胞瘤中的原位表达
成釉细胞瘤(ameloblastoma)约占牙源性肿瘤的59.3%[1],WHO把成釉细胞瘤定为良性肿瘤,但由于其局部呈侵袭性生长,易复发,可恶变,可转移,有学者称之为交界性肿瘤.牙源性角化囊肿(odongtogenic keratocyst, OKC)由于其少见的生长方式和较高的复发率[1],日益受到人们的重视.我们采用原位杂交法对成釉细胞瘤、牙源性角化囊肿进行了hTR mRNA表达的检测,并探讨其与成釉细胞瘤临床生物学行为的关系.
-
原位杂交法快速检测末梢血中性粒细胞中的细菌
败血症是一种严重的全身性感染性疾病,死亡率较高.传统的诊断方法以血培养法为主,但血培养受采血量、皮肤消毒、抗生素使用[1]等诸多因素的影响,阳性率大约为10%左右.且无可避免地产生一定的假阳性[2].从标本采集接种至报告结果,大约需时1 d至2周左右,难以满足临床的需要.Hybrisep(R)试剂盒通过原位杂交法(in situ hybridization,ISH),针对末梢血中性粒细胞吞噬的细菌DNA,采用系列特异性的DNA探针,于8 h内可检测鉴定出病原菌的种类.
-
肝纤维化大鼠肝组织Smads基因表达状况及意义
目的:研究CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smad基因表达的变化及其意义.方法:80只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组(C组,n=40)和模型组(M组,n=40).以CCl4 sc 法诱导肝纤维化,HE和VG胶原染色观察肝脏胶原沉积情况,原位杂交法及免疫组化法检测肝组织Smads分子表达水平变化.结果:与C组比较,M组大鼠肝脏组织学积分显著增加(3.29±0.68 vs0,P<0.05),平均胶原面积显著增加(290.86±89.37 μm2 vs 56.12±21.45 μm2,P<0.01),肝组织Smad4蛋白表达率较C组明显增加(4.27%±0.43% vs 2.86%±0.86%,P<0.05),而Smad7蛋白表达虽然增加,但水平低下;Smad 3 mRNA表达A值明显增加(0.167±0.092 vs 0.010±0.002,P<0.05),Smad4 mRNA表达A值也明显增加(0.24 1±0.098 vs 0.021±0.004,P<0.05),Smad6、Smad7 mRNA虽然增加,但表达水平仍然低下.结论:实验性大鼠肝纤维化存在肝脏Smads分子表达水平的比例失调,TGF-Smad信号通路可能参与了肝纤维化的形成与发展.
-
中药健胃愈疡颗粒剂治疗大鼠实验性胃溃疡
目的:研究健胃愈疡颗粒治疗消化性溃疡的机制.方法:采用改良Okabe法复制大鼠胃溃疡模型.76只SD大鼠随机分为4组,除正常组外,其余三组均手术造模,每日灌胃分别饲以蒸馏水和不同药物,连续7 d或14 d后取溃疡胃组织,作常规病理检查,观察溃疡情况,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测各指标蛋白表达,原位杂交法法检测各指标mRNA表达.结果:JWYY治疗组在7 d和14 d后,溃疡指数(1.7±0.5,0.8±0.4)、凋亡指数(3.0±0.4,2.0±0.5)明显降低;MK蛋白(33.7±3.7,38.0±4.1)和mRNA(22.6±2.9,30.5±3.7)、EGFR蛋白(39.6±4.9,31.9±6.8)和mRNA(26.6±5.0,17.4±1.6)表达明显升高,较模型组和胃苏组有显著统计学差别(P<0.01或0.05).JWYY组7 d时TNF-α蛋白(18.7±3.3)和mRNA(11.4±3.0)表达显著低于模型组(26.1±3.8,;17.1±2.7;P<0.01),而高于正常组(4.0±0.9,3.3±1.0,P<0.01);14d时各组则无明显统计学差别(P>0.05).JWYY组7d和14d时Bcl-2蛋白(33.5±6.8,32.9±9.6)、mRNA(26.1±4.5,23.0±6.2)及mRNA Bcl-2/Bax(1.4±0.3,1.5±0.4),蛋白Bcl-2/Bax(1.3±0.3,1.7±0.7)均显著高于模型组(P均<0.05或0.01).结论:JWYY颗粒通过提高Bcl-2、Bcl-2/Bax抑制细胞凋亡,降低TNF-α表达,提高MK、EGFR表达而促进溃疡愈合,提高溃疡愈合质量.
-
中药抗纤软肝颗粒抑制PDGF诱导的肝星状细胞MEK-1和c-fos表达
目的:探讨抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的肝星状细胞MEKl和c-fos表达的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的抗纤软肝颗粒温育肝星状细胞24 h后,PDGF-BB(10 pg/L)刺激24 h,再加入上述浓度的抗纤软肝颗粒,3 h后,又加入PDGF-BB(10 pM)作用5 min,然后收集细胞.采用MTT法测定细胞增生,免疫印迹化学发光法检测MEK-l,原位杂交法检测c-fosmRNA.结果:无血清培养显示抗纤软肝颗粒对于PDGF诱导的细胞增生具有抑制作用,并呈剂量依赖性,抗纤软肝颗粒5 g/L、1.25 g/L各组的MTT测定值分别为0.28±0.03和0.43±0.04,与PDGF对照组(0.82±0.05)相比P<0.01;对PDGF诱导的MEK-1及c-fosmRNA表达均有显著的抑制作用:抗纤软肝颗粒5 g/L、1.25 g/L各组细胞的MEK-1表达水平分别为0.143±0.013、0.169±0.007,与PDGF组(0.186±0.010)比较有显著性差异(P<.01);c-fosmRNA表达水平分另为0.152±0.010、0.163±0.005,与PDGF组(0.183±0.014)比较也显著减弱(P<0.01).结论:在所应用的剂量范围内,抗纤软肝颗粒可抑制PDGF诱导的HSC增生,其机制与干扰Ras-MEK-MAPK信号通路有关.
-
食管反流大鼠肿瘤诱发过程中抑癌基因mRNA表达的变化
目的:研究胃及十二指肠内容物反流对食管组织内抑癌基因mRNA表达的影响,探讨反流导致食管肿瘤发生的机制.方法:通过不同手术方式制作单纯胃食管反流(G组)、单纯十二指肠食管反流(D组)、十二指肠胃混合食管反流(DG组)及对照组(c组)动物模型.术后均注射致癌剂甲基戊基亚硝胺(MANA),于20、26wk取出食管,用原位杂交法检测组织中p53、p16、p21等基因的mRNA表达.结果:各反流组大鼠食管上皮细胞中p53的mRNA表达均较C组显著增强,其中D组、DG组的表达较G组更强,D组与DG组结果相似;D、DG组的p16、p21基因mRNA表达较C组减弱,而G组与C组相比无显著差异.结论:胃液及十二指肠内容物反流可改变抑癌基因在转录水平的表达,增强致癌剂诱发大鼠食管肿瘤的作用,其中十二指肠内容物的作用较强.
-
肝硬化门静脉高压症大鼠脾脏血管内皮细胞生长因子的研究
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肝硬化门静脉高压症中的作用.方法:对18例肝硬化门静脉高压症大鼠(分早期、中期、晚期三期)和6例正常大鼠脾脏切除标本,使用原位杂交法检测VEGF的mRNA的表达情况.结果:门静脉高压组大鼠VEGF的mRNA高表达,其表达率分别为早期50.0%,中期66.7%,晚期100%.对照组阳性表达率为16.7%.结论:(1)VEGF是有力的血管生成因子.(2)VEGF随肝硬化门脉高压严重程度而阳性表达率有所增加.
-
幽门螺杆菌相关性胃炎中核因子-κB与IL-8,COX-2表达的意义
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染时胃黏膜组织中核因子-κB(NF-kB)p65蛋白、IL-8及环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白的表达间的关系.方法:采集Hpylori阴性慢性胃炎18例和Hpylori阳性慢性胃炎38例患者的胃黏膜活检标本,采用免疫组化法和原位杂交法检测胃黏膜中NF-kB p65蛋白、IL-8及COX-2mRNA和蛋白的表达情况.结果:NF-kBp65,IL-8和COX-2主要表达于胃黏膜上皮细胞,固有层炎性细胞也有不同程度的表达.Hpylori阳性胃黏膜中p65蛋白,IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达较Hpylori阴性组显著增强(5.6±3.3vs 3.0±2.5,3.7±2.6vs1.1±1.3,3.9±2.9 vs 1.9±1.6,3.0±2.4vs 1.5±1.1,2.8±2.3vs 1.0±0.7,P<0.01),三者的表达均与胃黏膜炎症程度之间具有显著相关性(P<0.01);胃黏膜NF-kB p65蛋白表达与IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达均呈正相关关系(rs分别为0.690,0.709,0.448,0.480,P<0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜NF-kB p65,IL-8及COX-2表达增加,NF-kB可能通过调控IL-8和COX-2的表达,参与了Hpylori相关性胃炎的病理生理过程.
-
实验性肝纤维化形成过程中几种基质金属蛋白酶表达的研究
目的:研究基质金属蛋白酶及基质金属蛋白酶抑制因子在大鼠实验性肝纤维化形成过程中的作用及表达.方法:应用免疫组织化学和核酸原位杂交法研究MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白及其mRNA和MT1-MMP mRNA在四氯化碳实验性大鼠肝纤维化形成过程中的表达变化.结果:在肝脏间质细胞和部分肝细胞中表达.在纤维化形成过程中MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白及其mRNA和MT1-MMP mRNA的表达程度与肝纤维化程度密切相关.结论:肝脏间质细胞是MMPs及TIMPs主要细胞来源,部分肝细胞也有表达.MMPs及TIMPs在肝纤维化形成过程中共同发挥作用.
-
原位种植肝癌新生血管的检测及血管内皮细胞生长因子mRMA的表达
目的:观察大鼠原位种植肝癌模型中的新生血管的生长情况,研究肿瘤血管生长因子基因的表达和肝癌新生血管之间的关系.方法:采用Walker256癌肉瘤接种40只Wistar大鼠制作原位种植肝癌模型,用微血管计数以及免疫组织化学染色法检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达来标志肿瘤新生血管.血管内皮细胞生长因子基因的检测采用原位杂交法进行.结果:Walker256癌肉瘤接种后1、2、3 wk肿瘤微血管密度分别为(15±4.3)/Hp、(17±3.6)/HP、(45±7.8)/HP.大血管及正常微血管(毛细血管除外)周围α-SMA呈强阳性染色.在肝癌组织中可见到一些形态不规则的微血管呈弱阳性或阴性染色是肿瘤诱导的新生血管,肝癌组织有大量新生血管形成,新生血管的数量与微血管密度呈正相关,Walkef256癌肉瘤接种后3 wk较前2wk有显著性增加.正常肝脏组织仅有少量VEGF mRNA表达,肝癌组织接种后1wk即有多种细胞表达VEGF.新生血管较密集的肿瘤组织VEGF的表达较多.VEGF的表达与微血管密度和肿瘤组织中新生血管的数量呈正相关.结论:原位接种肝癌中有大量新生血管形成,平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达可以用来标记肿瘤新生血管.肝癌组织中血管内皮细胞生长因子的表达增加可能和肿瘤新生血管的形成有一定的关系.
-
拉咪呋啶预防乙肝相关性肝硬化肝移植术后乙肝再感染的临床对照研究
目的:了解乙肝相关性失代偿肝硬化肝移植术后使用拉咪呋啶预防移植物乙肝再感染的疗效及乙肝标志物在血清及肝组织中的动态变化.方法:用酶联放免法,血清HBVDNA荧光定量法、肝穿组织免疫组化LSAB法及HBV DNA原位杂交法定期检测25例受体血清及肝穿组织,观察肝移植术后HBV标志物在血清及肝组织中的动态变化.本研究设计为前瞻的开放的非随机的临床对照研究.25例被分为乙肝病毒活跃复制(15例)及非活跃复制组(10例)两组,皆以拉咪呋啶100 mfd术前后服用预防,非活跃复制组中有3例未能及时服用拉咪呋啶作为对照组.结果:在HBV活跃复制组,术前口服拉咪呋啶平均2 wk能使80%以上的患者血清HBVDNA阴转;继续口服,术后表面抗原消失,部分血清乙肝病毒抗体(表面抗体HBsAb 9/15,核心抗体HBcAb 13/15及HBeAb 11/15)可在术后1-2 wk出现,至6 mo可逐渐消失;血清中HBVDNA荧光定量可一直维持阴转的状态;肝穿组织中HbsAg,HBcAg及HBVDNA原位杂交可长期维持阴性.10例乙肝病毒活跃复制受体其HBV血清标志物在12--44 wk之间完全消失;本组中2例(2/15,13.3%)在2 a时发生拉咪呋啶预防失败而致移植物再感染或乙肝复发;在HBV非活跃复制组,乙肝病毒抗原抗体表达同活跃复制组:表面抗原术后即消失,乙肝病毒抗体即在1-2 wk出现(BsAb4/7,HBcAb 6/7,HBeAb 2/7),6 mo左右消失.3例(43%,3/7)在近2 a时血清及肝组织中HBV标志即完全消失.本组无移植物再感染,乙型肝炎复发及乙肝病毒相关死亡.若血清中重新出现表面抗原或HBVDNA荧光定量阳性或肝穿组织免疫组化或HBVDNA原位杂交阳性则可诊断为HBV再感染.未能及时服用拉咪呋啶的3例非活跃复制的乙肝受体分别在术后8、10、12 mo移植物感染及复发新肝乙型肝炎,移植物再感染率及乙肝复发率为100%,其中1例死于纤维淤胆性肝炎,后二者经加用拉咪呋啶治疗为主的综合治疗而缓解.本研究除对照组外,拉咪呋啶预防下移植物总的乙肝再感染率为9.1%(2/22),受体HB复发率为4.5%(1/22),1-2 a生存率达87%.结论:拉咪呋啶能有效地预防失代偿期乙肝相关性肝脏疾病受体、尤其是乙肝病毒活跃复制受体肝移植术后移植物乙肝病毒的再感染及乙型肝炎复发,甚至使血清中及移植物的乙肝病毒达到临床清除.远期疗效正在进一步的评价中.
-
肝细胞癌变过程中cyclin D1的异常表达与端粒酶活性的相关分析及意义
目的:探讨肝细胞癌变过程中cyclin D1的异常表达与端粒酶活性之间的关系及其意义.方法:用0.5 g/L的2-AAF诱导Wistar大鼠建立肝癌动物模型,应用原位杂交法和PCR-TRAP-ELISA法检测大鼠肝脏在癌变过程中cyclin D1的异常表达和端粒酶的活性.结果:正常组8例中cyclin D1表达均正常,端粒酶均阴性.肝硬化组16例中有12例cyclinD1过表达,有4例cyclinD1表达正常;有9例端粒酶阳性,有7例端粒酶阴性.肝癌组11例中有4例cyclin D1过表达,有7例cyclin D1表达正常;有10例端粒酶阳性,有1例端粒酶阴性.结论:肝硬化组和肝癌组的cyclin D1异常表达、端粒酶活性均高于正常组,而且肝硬化组的cyclin D1异常表达与端粒酶活性呈正相关,肝癌组的cyclin D1异常表达与端粒酶活性呈负相关.
-
食管癌及癌前病变组织中hTERT基因的表达
目的:探讨肿瘤相关基因端粒酶逆转录酶(hTERT)基因在食管癌及癌前病变组织中的表达及与细胞增生核抗原Ki-67的关系;探讨hTERT基因对食管癌早期诊断及食管癌预后判定的价值.方法:采用原位杂交法检测食管癌组织42例、不典型增生组织37例及正常食管组织12例中hTERTmRNA的表达;用免疫组化S-P法检测Ki-67抗原表达.结果:在正常食管黏膜、不典型增生、食管癌组织中,hTERTmRNA的阳性表达率分别为0%,48.6%,83.3%;Ki-67抗原的阳性表达率分别为0%,56.8%,88.1%;癌组织与不典型增生组织中hTERTmRNA与Ki-67抗原阳性表达率较正常食管黏膜差异有显著性(P<0.01);癌组织中hTERTmRNA与Ki-67抗原阳性表达率较不典型增生组织差异有显著性(P<0.01);食管癌组织中hTERTmRNA与Ki-67抗原表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);结果还显示hTERTmRNA和Ki-67抗原表达具有显著相关性(P<0.05).结论:端粒酶逆转录酶基因的异常表达在食管癌的发生、发展过程中具有重要作用,hTERTmRNA的表达与细胞增生活性有关;hTERT基因表达的检测有助于食管癌的早期诊断以及食管癌预后的判定.
-
坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜细胞表皮生长因子及其受体表达的变化
利用大鼠坏死性胰腺炎模型,测定小肠粘膜上皮细胞内表皮生长因子(EGF)含量、及其受体与mRNA表达。探讨这些变化与坏死性胰腺炎肠粘膜屏障损伤的关系。 1.材料与方法:(1)动物与分组:采用雄性Spragure-Dawly大鼠50只,体重340~380 g,随机分为5组:虚拟手术组(Ⅰ组);其余4组分别为制模后3 h组(Ⅱ组)、6 h组(Ⅲ组)、12 h组(Ⅳ组)处死和自然死亡组(Ⅴ组)。(2)大鼠急性坏死性胰腺炎模型的制备:采用2.5%戊巴比妥钠,1 ml/kg腹腔内麻醉后,腹部正中切口打开腹腔,在胆总管进入十二指肠开口下缘处用金属夹夹住十二指肠,然后向胰管方向注入5%牛磺酸钠1 ml/kg,注射完毕后用丝线结扎胆总管,2 min后松开银夹及胆总管处的丝线,关腹。虚拟手术组,操作同试验组,注入等量生理盐水,术后自由饮水。(3)方法与步骤:切取1 mm×2 mm的空肠组织块,3%戊二醛固定,依次脱水、包埋、超薄切片及醋酸铀、枸橼酸铅双染色,在透射电镜下对小肠粘膜细胞超微结构进行观察。于屈韧带远侧取近段空肠2 cm,甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,5 μm连续切片,待作免疫组织化学及原位杂交染色。采用ABC法进行小肠粘膜细胞EGF及EGF受体的免疫组织化学染色,EGF受体mRNA采用地高辛随机引物原位杂交法。在单盲情况下应用四川大学研制的MIAS-300全自动图像分析仪,在每张免疫组织染色及原位杂交染色切片上任意选取20个阳性细胞进行吸光度扫描,计算平均吸光度值(A),即单位面积内EGF含量、EGF受体或EGF受体mRNA的表达。结果以均数±标准差表示,应用第四军医大学统计教研室SPLM统计软件进行统计学处理。
-
原位杂交法检测人乳头状瘤病毒感染与免疫球蛋白样转路子4水平的相关性分析
目的:分析原位杂交法检测卵巢癌患者人乳头状瘤病毒(HPV)感染率与免疫球蛋白样转路子4(ILT4)水平的相关性,为临床卵巢癌的治疗提供参考依据。方法对2012年7月-2014年12月医院189份正常卵巢标本及卵巢上皮良性肿瘤切除标本进行研究,对其中43份正常卵巢组织标本,43份卵巢上皮良性肿瘤(卵巢囊腺瘤)标本、卵巢癌标本52份、交界性肿瘤标本51份等4种标本进行 ILT4水平检测,并分析 ILT4与卵巢癌中的HPV 之间的相关性,数据采用 SPSS 18.0软件进行统计分析。结果卵巢癌中 HPV16/18感染率与交界性肿瘤比较,差异无统计学意义,但明显高于卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织(P <0.05);ILT4阳性表达与 HPV16/18感染具有较好的正相关性。结论 ILT4与卵巢癌 HPV16/18感染具有正相关性,ILT4可能对卵巢癌中 HPV16/18感染产生协同作用。
关键词: 原位杂交法 卵巢癌 人乳头状瘤病毒 免疫球蛋白样转路子 4 相关性 -
83例生殖器疱疹患者实验室诊断及感染情况分析
目前,GH的诊断主要依靠临床诊断,但对于非典型GH患者仍需借助实验室方法,作为GH诊断的"金标准"病毒培养法,以及其它如DNA分子原位杂交法、免疫印迹法等则多由于操作技术要求过高而不适于临床应用.近年来,PCR法,酶免疫法开始应用于临床,PCR检测皮损HSV核酸敏感性和特异性高,能大大提高生殖器溃疡病人中HSV的确证能力.