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人端粒酶RNA在成釉细胞瘤中的原位表达
成釉细胞瘤(ameloblastoma)约占牙源性肿瘤的59.3%[1],WHO把成釉细胞瘤定为良性肿瘤,但由于其局部呈侵袭性生长,易复发,可恶变,可转移,有学者称之为交界性肿瘤.牙源性角化囊肿(odongtogenic keratocyst, OKC)由于其少见的生长方式和较高的复发率[1],日益受到人们的重视.我们采用原位杂交法对成釉细胞瘤、牙源性角化囊肿进行了hTR mRNA表达的检测,并探讨其与成釉细胞瘤临床生物学行为的关系.
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端粒酶核酶真核表达质粒pBBS212Rz的构建与鉴定
目的:构建含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达质粒pBBS212Rz,为以端粒酶为靶点的基因治疗消化系肿瘤研究奠定基础.方法:将人工合成的端粒酶核酶基因通过基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体pBBS212中.根据260nm的紫外光吸收值计算重组质粒pBBS212Rz浓度.结果:端粒酶核酶基因成功地定向插入了载体pBBS212,经酶切后用聚丙烯凝胶电泳鉴定确认.重组质粒浓度为1.77 g/L.结论:成功构建了含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达重组质粒pBBS212Rz.
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肝细胞生长因子及葡萄糖对人胰腺干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响/妊娠合并慢性骨髓增殖性疾病11例例临床分析/人端粒酶RNA基因荧光原位杂交检测在宫颈细胞学检查中的应用
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反义封闭胶质瘤端粒酶后c-myc活性研究
本实验探讨了端粒酶有效封闭后,在转录水平是否致使癌基因c-myc的活性下降.1 材料与方法1.1 主要材料阳离子脂质体Dosper(罗氏公司);ELISA端粒酶检验试剂盒(罗氏公司);端粒酶RNA反义硫代磷酸寡脱氧核甘酸(ASODN)(其序列为5'-CTCAGTTAGGGTTAGACA-3'互补于人端粒酶RNA第43号~60号核甘酸序列,上海生工生物工程公司合成);两步法RT-PCR试剂盒(Promega);Trizal(华舜生物);U251胶质瘤细胞系(购自中科院上海细胞生物研究所).
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FISH检测hTERC基因在宫颈腺癌中的扩增及意义
目的:探讨人端粒酶RNA(hTERC)基因在宫颈腺癌中的扩增以及在宫颈腺癌诊断和预后评估中的价值。方法:收集南京医科大学附属南京妇幼保健院2006年1月~2009年12月诊断为宫颈腺癌的石蜡标本38例,并随机抽取同时期诊断为宫颈鳞状上皮内瘤变而腺体正常的37例标本作为对照,采用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因在腺癌及对照组宫颈腺体中的扩增。结果:腺癌组hTERC基因扩增阳性率为84.21%(32/38),对照组阳性率为0%(0/37),两组差异有显著统计学意义(P<0.01)。hTERC基因扩增检测的灵敏度为84.21%(32/38),特异度为100%(37/37),阳性预测值为100%(32/32),阴性预测值为86.05%(37/43)。FISH检测结果显示,不同亚型的宫颈腺癌阳性检出率各不相同,高分化和中-低分化的宫颈腺癌hTERC基因扩增程度存在差异(P<0.05)。对照组杂交信号多为2:2,而腺癌组异常扩增类型有2∶3、2∶4、2∶5、3∶3、4∶4及N∶N。不同hTERC基因扩增程度的腺癌预后结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:hTERC基因在宫颈腺癌中扩增,病理分化程度不同hTERC基因扩增有差异,可作为宫颈腺癌的病理诊断辅助指标,尚未发现hTERC基因扩增程度与宫颈腺癌的不良预后有相关性。
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hTR反义寡核苷酸对人胰腺癌细胞Panc-1生物特性及端粒酶活性的影响
端粒酶持续激活导致恶性肿瘤细胞获得无限增殖能力,人端粒酶RNA组分(hTR)对端粒酶活性维持具有重要作用,破坏端粒酶RNA组分的模板功能,即可抑制端粒酶活性[1].我们针对hTR模板区设计合成反义寡核苷酸(ASODN),观察其对Panc-1端粒酶活性及细胞生长的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的实验依据.
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胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶mRNA表达及其临床意义
目的 研究胃癌患者外周血人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,并探讨其临床意义.方法 应用TaqMan实时定量RT-PCR法检测58例患者、20名健康对照者外周血hTERT mRNA的表达,随访2年.结果 胃癌患者外周血hTERT mRNA阳性率为55.17%,显著高于健康对照组(P<0.001);hTERTmRNA表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和临床分期相关,其中淋巴结转移和远处转移是影响hTERT mRNA表达的独立因素;近期疗效无效的患者hTERT mRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者(P=0.003).化疗前hTERTmRNA阳性与阴性患者的1年生存率分别是28.13%和76.92%.结论 外周血hTERT mRNA可作为检测胃癌患者微转移的分子标志,定期监测有助于评估化疗疗效和预测预后.淋巴结转移和远处转移与hTERT mRNA表达密切相关.
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乳腺癌MCD与hTR、hTRT表达的关系
0 引言研究表明肥大细胞(MC)与肿瘤的关系较复杂,一方面MC通过某种方式产生抗肿瘤作用,另一方面MC通过血管生成作用或其他方式促进肿瘤的生长和转移.端粒-端粒酶作为调节细胞分裂寿命的基础,近年来日益成为肿瘤生物学界关注的热点.乳腺癌人类端粒酶RNA(hTR)和人类端粒酶逆转录酶(hTRT)的表达与肥大细胞密度(MCD)的关系尚未见报道.我们运用原位分子杂交技术检测了hTR和hTRT在乳腺癌中的表达,用组织化学方法检测乳腺癌中MCD,探讨乳腺癌hTR和hTRT表达与MCD的关系.
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体液中肿瘤细胞的端粒酶活性
人类肿瘤及肿瘤细胞系研究表明端粒酶活性对于永生性肿瘤细胞生长可能起到关键作用.在18种组织细胞培养体系中,100株永生细胞系有98株表达端粒酶活性.当人Hela细胞培养物转种于抗人端粒酶RNA寡核苷酸抗血清培养体系中,端粒逐渐丢失,当端粒缩短到某一特定长度时,就会导致细胞死亡.端粒酶在人体癌症中的表达是在卵巢癌中首次得到证实的,继而约在多种人类肿瘤的85%样本中发现,例如乳腺癌(93%)、原发性肺癌(80%)、大肠癌(77%~97%)、肝细胞癌(85%)、胃癌(85%)、脑癌(66%~94%)、血液肿瘤(67%~100%)和子宫内膜癌(95%)等.正常体细胞大多未检出端粒酶活性,仅胚胎细胞、男性生殖细胞、造血干细胞和活化淋巴细胞中有表达.因此分析和研究端粒酶活性,对于癌变的诊断、作为癌症化疗策略的抗端粒酶药物的潜在作用,都是十分令人感兴趣的[1,2].
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人端粒酶逆转录酶调控的CD基因对卵巢癌细胞株的选择性杀伤作用研究
[目的]构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的自杀基因—胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶(CD-TK/5-FC)系统对人卵巢细胞及正常细胞株的体外杀伤作用.[方法]应用脂质体转染法将hTERT核心启动子启动质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC系统对上述3种细胞不同的杀伤作用;利用RT-PCR技术检测转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的不表达情况.[结果]卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为23.2%,与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5 -FC +GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显著增强,对于端粒酶阴性正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;pBTdel-279-TK转染后,3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性.[结论]人端粒酶逆转录酶启动子调控下的CD自杀基因对卵巢癌细胞株选择性杀伤作用治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗方式.