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泛素C-末端水解酶-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达
肿瘤转移机制及防治已成为当今肿瘤研究领域的热点.高淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)、低淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-P)是由大连医科大学病理教研室自行建立的肿瘤转移机制实验模型.它们是一对高度同源的来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆,经615小鼠局部皮下注射后,特异地向引流淋巴结转移.
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ANXA11表达稳定下调小鼠肝癌Hca-F细胞株的构建
目的:构建膜联蛋白A11 (annexin A11,ANXA11)稳定下调的小鼠肝癌高淋巴转移力细胞株Hca-F.方法:合成2条针对ANXA11的发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)序列shRNA1和shRNA2,连接到pGPU6/GFP/Neo质粒中,并转染到Hca-F细胞,获得了稳定转染的pGPU6/GFP/Neo-ANXA11-Hca-F细胞株.通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并利用RT-PCR和蛋白质印迹法验证ANXA11的表达变化.结果:成功构建了pGPU6/GFP/Neo-ANXA11重组表达质粒,并筛选出单克隆细胞；RT-PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,与空白对照组比较,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-A11-Hca-F-1和2在mRNA水平,对ANXA11干扰率分别为(27.3±5.9)％和(58.3±12.4)％,P=0.001;在蛋白质水平,对ANXA11的下调率分别为(57.4±0.9)％和(87.1±6.1)％,P＜0.001；shRNA-2对ANXA11的表达抑制效果更为显著,P＜0.001.结论:成功建立了ANXA11表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株,为进一步研究ANXA11在淋巴转移中的作用奠定前期基础.
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黄丹兰颗粒剂对肝癌Hca-F荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其机制
目的：研究黄丹兰颗粒剂对小鼠 Hca - F 肝癌的生长抑制作用及机制。方法：建立小鼠Hca - F肝癌模型，口服灌胃不同浓度的黄丹兰颗粒剂连续10 d。称重检测黄丹兰颗粒剂对肿瘤生长、脾脏和胸腺指数的影响；采用 ELISA 法分析黄丹兰颗粒剂对荷瘤小鼠脾巨噬细胞的吞噬活性、细胞因子分泌等免疫指标的影响。结果：黄丹兰颗粒剂对小鼠实体瘤生长具有抑制作用，黄丹兰颗粒剂中剂量组与对照组相比有显著差异（P ﹤0.05）；实验组小鼠脾指数和胸腺指数均高于对照组。黄丹兰颗粒剂中剂量组即可明显促进 IL -2的产生，降低 VEGF 蛋白的表达。结论：黄丹兰颗粒剂对 Hca - F肝癌小鼠肿瘤生长有抑制作用，可能与提高荷瘤小鼠细胞和分子免疫活性有关。
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膈下逐瘀汤联合环磷酰胺诱导Hca-f肝癌小鼠细胞调亡的实验研究
目的:研究膈下逐瘀汤联合环磷酰胺(CTX)对Hca-f肝癌小鼠的抑瘤作用及其机制.方法:无菌条件下抽取Hca-f肝癌小鼠腹水,予生理盐水稀释,调细胞浓度为2×107个瘤细胞/mL,分别接种于每只小鼠右腋下皮部0.2 mL,24 h后随机分成模型组、CTX组、中药组、中药+CTX组,每组10只,给药8天后处死小鼠,剥离并称量瘤重计算抑瘤率.光镜下观察肿瘤细胞形态变化,电镜下观察凋亡小体.结果:膈下逐瘀汤联合环磷酰胺抑瘤率达到47.75%,能够有效诱导肿瘤细胞凋亡.结论:膈下逐瘀汤联合环磷酰胺对Hca-f肝癌小鼠有明显的抑瘤作用,其抑制肿瘤的可能机制是诱导肿瘤细胞凋亡.
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巨噬细胞在榄香烯复合瘤苗对HCa-F的免疫效应中的作用
目的:研究巨噬细胞(Mφ)在榄香烯复合瘤苗(EC-TCV)对小鼠肝癌HCa-F的免疫保护效应中的应用.方法:榄香烯复合瘤苗主动免疫3次,体内用多聚甲醛固定的HCa-F致敏后3d检测腹腔巨噬细胞(Mφ)的抗肿瘤细胞毒活性、一氧化氮(NO)、细胞增殖活性的功能变化.结果:与对照组比较,腹腔巨噬细胞(PEMφ)对HCa-F的细胞毒活性增强,而在NO产生和细胞增殖方面无明显差异.结论:榄香烯复合瘤苗腹腔免疫可增强腹腔巨噬细胞的杀瘤活性.
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应用表达芯片筛选小鼠肝癌淋巴道转移相关基因
目的采用表达芯片比较高、低淋巴道转移力小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F和Hca-P的基因表达谱,以筛选出与肿瘤淋巴道转移相关的基因.方法分别提取Hca-F和Hca-P细胞的总RNA,反转录合成生物素标记的cRNA探针,并与Affymetrix GeneChip MOE430A(包括22 690个转录本,对应于约14 500个小鼠已知基因和4 371个EST)杂交,检测结果利用生物信息学进行分析.结果 Hca-F和Hca-P相比,在14 500个已知基因中,有901个(6.2%)表达上调幅度≥2倍;在4 371个EST中,有129个(3%)上调幅度≥2倍.公布了差异表达≥8倍的37个基因并根据Gene Ontology(GO)分类和TreeView分析,按照其参与的生物学过程和具有的分子功能进行了功能分类.其中有19个基因参与了组织发生、细胞黏附、信号转导、细胞生长、分化及代谢等的生物学过程,29个基因分别具有转运、移动、蛋白激酶、蛋白结合及受体活性等分子功能,7个基因的生物学功能尚不清楚.结论表达芯片检测与肿瘤淋巴道转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供新方法、新思路,一些过量表达的基因将为肿瘤转移机制的研究提供新线索.
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枸杞多糖对肝癌Hca-F 荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及其机制
目的 研究枸杞多糖(LBP)对小鼠Hca-F 肝癌的生长抑制作用及机制.方法 建立小鼠Hca-F 肝癌模型,腹腔注射不同浓度的枸杞多糖连续10 d.称重检测枸杞多糖对肿瘤生长、脾脏和胸腺指数的影响;采用MTT 法、ELISA 法分析枸杞多糖对荷瘤小鼠脾巨噬细胞的吞噬活性、细胞因子分泌等免疫指标的影响.结果 枸杞多糖对小鼠实体瘤生长具有抑制作用,枸杞多糖40 mg·kg-1 与对照组相比有显著差异(P<0.05);实验组小鼠脾指数和胸腺指数均高于对照组.枸杞多糖40 mg·kg-1 即可明显促进IL-2 的产生,降低VEGF 蛋白的表达.结论 枸杞多糖对Hca-F 肝癌小鼠肿瘤生长有抑制作用,可能与提高荷瘤小鼠细胞和分子免疫活性有关.
