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HPLC分析天山雪莲组培苗与实生苗3种有效成分含量
菊科植物天山雪莲,又称新疆雪莲 Saussurea involucrata Kar.et Kir,属多年生的高山草本植物,5～8年一次开花结实,是我国珍稀名贵中药材,具有极高的临床应用和食疗保健价值.近年来,天山雪莲在抗炎镇痛、抗早孕、抗衰老及抑制癌细胞增生方面的作用备受关注[1].
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正交试验法在乌头组织培养中的应用
乌头Aconitum carmichaeli Debx.为毛莨科乌头属多年生草本植物.其子根为常用中药附子.乌头的组培快繁研究已见报道的有胡延玉[1]利用茎尖和带腋芽茎段培养并获得再生植株,但所用培养基成分复杂,生长周期长.林静等[2]利用叶片和幼茎进行培养,叶片只诱导出愈伤组织阶段而未分化出芽.关文灵等[3]以试管苗的叶片为外植体,成功培养出组培苗.本研究以乌头叶柄为外植体,利用多因子正交试验法,确立了乌头叶柄通过愈伤组织再生植株的一整套方法.
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不同移栽条件对金线莲组培苗成活率及生长的影响
观察金线莲幼苗的生长状况,统计不同移栽基质配比、种植密度、遮荫率和营养液条件下金线莲幼苗的成活率及植株高度、地径和植株鲜重的增长量.结果表明不同移栽条件对金线莲组培苗的生长状况影响差异较大,其中泥炭-河沙2∶1,种植密度为3cm×3 cm,遮荫率70％,1/4MS营养液的条件下,金线莲组培苗的成活率高且长势较好,为金线莲组培苗的人工栽培提供良好的技术方案.
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用RAPD方法鉴定薯蓣组培苗的来源
薯蓣是制备激素类药物的主要原料,近年来野生资源正在逐渐减少,当前人工栽培原料植物是保障原料药来源的佳途径.药用植物研究所云南分所自1997年以来通过测定皂苷含量及观测生物学性状,确定在西双版纳地区佳栽培种为菊叶薯蓣(Dioscorea composita),目前已选择出多个品系,并成功诱导出组培苗转移到大田栽培.
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白及组培苗移栽技术研究
目的:建立白及组培苗移栽方法.方法:以4个类型的白及组培苗、2种栽培基质为试验材料,统计移栽成活率和初期生长情况.结果:无块茎的白及组培苗不能成活,直接移栽于大田中与人工基质中的组培苗成活率基本一致.结论:白及组培苗质量好坏是由组培苗的块茎大小决定的,块茎越大成活率越高.透气又保水的移栽基质有利于白及组培苗的成活.
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野生与组培金线莲有效成分的比较及RAPD分析
目的 研究人工栽培金线莲替代金线莲野生资源的可行性.方法 比较金线莲组培苗与野生金线莲药材中多糖、氨基酸及总黄酮的量,采用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对金线莲组培苗及野生药材进行了基因组DNA多态性分析.结果 多糖和总黄酮的比较表明,金线莲组培苗与野生品(台湾)的多糖和总酮量相近；总氨基酸比较表明,金线莲组培苗中总氨基酸达9.17％,高于野生品的总氨基酸量；通过随机扩增多态性DNA (RAPD)技术,从中筛选出了能用于鉴别金线莲组培苗的特异性引物.结论 初步证明通过组织培养获得的金线莲组培苗可以代替其野生品,它是解决金线莲资源紧缺的有效途径之一.
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厚叶岩白菜组织培养再生苗中熊果苷测定
目的 测定厚叶岩白菜组培苗、种子苗和野生苗不同部位中熊果苷,为人工种植厚叶岩白菜的质量评价提供科学依据.方法 采用反相C18色谱柱,甲醇-水为流动相洗脱,对不同厚叶岩白菜苗的主根、须根和叶片等不同部位中的熊果苷进行HPLC分析比较.结果 厚叶岩白菜不同部位的熊果苷量存在一定差异,叶片中熊果苷高;但组培苗和种子苗与野生苗的主根与须根中熊果苷的量差别很大,组培苗主根和须根熊果苷质量分数分别7.18%、6.12%.结论 本研究表明采用组培或种子人工种植的厚叶岩白菜其有效成分能够满足临床和美容行业应用的要求.
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三叶半夏组培苗生长情况调查
目的为半夏快速繁殖技术体系的建立提供理论依据.方法通过一步成苗法获得半夏组培苗后进行移栽实验,并进行形态学观察和产量统计.结果半夏组培苗三种不同叶形的叶柄上均可萌生珠芽,块茎越大的植株大多出现三出复叶的时间较早,其产生的珠芽数也越多,且在移栽的当年就可长出佛焰苞;在一个生长期之后,母块茎的收获重量可达到栽种量的31.7倍;两批半夏组培苗的无性繁殖系数分别达到了12.8个/株和10.1个/株.结论半夏组培苗具有生长速度快,繁殖系数高的特点.
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铁皮石斛快繁及多糖含量测定
目的 测定铁皮石斛组培苗的多糖含量. 方法 对铁皮石斛进行组织培养,用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛组培苗的多糖含量. 结果 铁皮石斛组培苗的多糖含量为25.09％. 结论 铁皮石斛组培苗的多糖含量达到2010版《中华人民共和国药典》的规定标准,具有一定的药用价值.
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珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测
目的 研究珍稀药用金钗石斛DNA指纹图谱,初步探讨直接扩增长度多态性(DALP)分子标记技术在石斛组织培养过程中遗传稳定性检测上的应用.方法 采用直接扩增长度多态性(DALP)技术对金钗石斛野生移栽苗和组培苗进行基因组DNA多态性分析.结果 从12对引物组合中筛选出6对能获清晰条带的引物组合,分别利用琼脂糖和聚丙烯酰胺对DALP-PCR产物进行凝胶电泳,发现两组苗扩增的DNA带型基本一致,未发现明显变异,说明金钗石斛茎尖离体继代培养具有较高的遗传稳定性.结论 DALP分子标记技术可用于石斛遗传稳定性和遗传多样性研究.
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独蒜兰组培苗炼苗和移栽技术研究
目的 探讨影响独蒜兰组培苗移栽成活的关键因子.方法 从种球大小、育苗基质、移栽月份、营养液配方等4个方面设计试验,分析不同处理对独蒜兰组培苗成活和生长的影响.结果 适宜移栽的组培苗标准应达到:球茎直径≥0.6cm,百粒重≥20g,炼苗基质以腐熟木屑*蛭石(1∶1)佳,炼苗移栽时间以3～4月为佳,1/3B5营养液促进组培苗生长效果佳.结论 筛选出适宜炼苗的种球级别以及适宜的移栽时间、育苗基质和营养液,建立了独蒜兰组培苗炼苗关键技术.
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声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响
目的:测定特定的声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响程度.方法:以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量.结果:连续刺激24天后多糖含量明显高于对照组.结论:特定的声波刺激可以明显地促进铁皮石斛多糖的合成,对石斛多糖代谢途径有显著的影响.
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广豆根组培苗与野生植株有效成分的对比分析
用薄层层析法对室外栽培前后的广豆根组培苗植株与野生引种植株的药用有效成分苦参碱和氧化苦参碱对比分析表明,组培苗具有正常生物合成苦参碱和氧化苦参碱的能力.因此,广豆根组培苗可以作为种源推广应用.
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金钗石斛种苗分级质量标准研究
目的:制定金钗石斛的种苗质量标准.方法:采集贵州赤水石斛种苗基地不同类型的金钗石斛种苗(组培苗、扦插苗),测定苗高、茎粗、节数等指标,利用数理统计方法,确定种苗分级的主要指标,并制定不同类型种苗质量标准.结果:苗高、株数/丛是评价金钗石斛组培种苗质量分级的主要指标；苗高、芽点数是评价金钗石斛扦插种苗质量分级的主要指标.结论:组培苗中,Ⅰ级种苗的苗高不低于17 cm,株数不低于3；Ⅱ级种苗的苗高不低于11 cm,株数不低于2；达不到Ⅱ级种苗标准的为不合格种苗.扦插苗中,Ⅰ级种苗的苗高不低于12 cm,芽点数不低于3；Ⅱ级种苗的苗高不低于6 cm,芽点数不低于2；达不到Ⅱ级种苗标准的为不合格种苗.
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四倍体太子参种苗繁育技术体系的建立
目的:建立四倍体太子参工厂化育苗技术体系.方法:采用植物组织培养技术,以优良的四倍体太子参萌发的芽为外植体,开展其组培苗诱导培养、迅速增殖、生根壮苗、微块根形成、种苗移栽等一系列技术研究.结果:四倍体太子参微小茎尖诱导适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;芽苗继代增殖适培养基为MS+0.5 mg,/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;生根壮苗适堵养基为MS+0.2 mg/L NAA.微块根形成适培养基为MS+4.5%蔗糖.微块根和组培苗直接移栽大田培养,成活率分别为98%和85%,扩繁系数约10.结论:确立一套培养扩繁迅速、移栽管理便捷、成活率高、成本低、规模化生产应用的四倍体太子参种苗大量繁育的周年生产技术流程.
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影响铁皮石斛组培苗驯化的关键因素探析
目的:研究铁皮石斛组培苗驯化的几个关键因素,为优质组培苗的大规模驯化提供技术依据.方法:以铁皮石斛组培苗为实验材料,探索季节气温、基质种类、基质厚度、定植方式和适应性锻炼对驯化苗成活的影响,及采用不同的方法诱捕基质中的蜗牛、蛞蝓,选择出佳的驯化方案.结果:以松树皮碎片作基质时较好的驯化季节是夏季(盛夏除外)、秋季,较合适的基质厚度为6 cm左右；水苔作基质的驯化效果明显优于松树皮；穴盘驯化的效果明显优于苗床；适应性锻炼能克服初春和盛夏驯化组培苗的不利影响.白菜叶蘸取蔗糖水对蜗牛、蛞蝓的诱捕效果好.结论:研究结果为规范铁皮石斛组培苗的驯化技术提供参考依据.
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响应面试验优化铁皮石斛组培苗生根培养基
目的:为提高铁皮石斛组培苗移栽成活率,利用响应面法对其生根培养基条件进行了优化.方法:通过单因素试验确定6-BA的浓度、NAA的浓度、马铃薯的量和香蕉泥的量对苗生长状况的影响,利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析.结果:确定其优生根培养基为1/2MS+6-BA 0.24 mg/L+NAA 0.52 mg/L+香蕉泥87.63g/L+马铃薯89.30g/L+蔗糖20.0 g/L+活性炭4.0 g/L+琼脂7.0g/L,pH5.8,光照强度2 000 Lx.结论:通过响应面法建立的模型预测性良好,可用于铁皮石斛组培生根培养基条件的优化.
关键词： 铁皮石斛 组培苗 生根条件 响应面试验优化 Box-Behnken试验设计 -
羌活植物离体培养及植株再生研究
目的:建立羌活植物的离体培养方法及植株再生体系,为保护羌活野生植物资源和发展人工育种技术提供新的途径.方法:通过组织培养方法,对羌活根茎、幼叶、幼芽及芽鞘进行研究,并研究不同植物激素对佳外植体形成愈伤组织、分化不定芽和诱导不定芽生根形成完整植株的影响,筛选出佳培养基配方.结果:羌活芽鞘是诱导愈伤组织的适外植体,芽鞘愈伤组织诱导佳培养基为MS +2,4-D 1.5 mg/L+ KT 0.2 mg/L+ NAA 0.4mg/L,30 d后诱导率为73.33％;诱导不定芽的佳培养基为MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L,30 d后诱导率为65.54％;诱导无根苗生根的佳培养基为1/2 MS+ NAA 0.3 mg/L+ IBA 0.3 mg/L,30 d后生根率为81.11％;选取根系生长良好的组培苗,先在沙砾基质中栽培1周,再移栽到有机质土壤中,30 d后成活率100％.结论:在筛选出佳外植体的基础上,通过诱导出愈伤组织,并进一步完成对不定芽的诱导及无根苗生根培养,筛选出培育羌活组培苗的佳条件.
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罗汉果组培苗的生根培养
目的了解罗汉果组培苗生根所需的佳条件.方法在1/2 MS的培养基中分别附加植物激素IAA、IBA、NAA0.1 mg/L后,接入罗汉果无根小苗,置于不同温度条件下培养.结果以附加NAA效果好,诱导率高,达到90%.培养温度对诱导生根和根伸长有影响,低温(16℃～22℃)有利于诱导发根,高温(30℃)于利于根伸长;在日夜变温(16℃～30℃)的培养条件下,罗汉果组培苗发根多,根较长,生长粗壮.结论在本试验中罗汉果组培苗以1/2 MS附加NAA0.1 mg·L-1,日夜变温(16℃～30℃)培养的的条件下生根好,诱导率高,根多、长,生长粗壮.
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萘乙酸浓度对铁皮石斛组培苗生长发育的影响
目的 研究培养基中添加不同浓度的萘乙酸(NAA)对诱导铁皮石斛组培苗的影响.方法 以铁皮石斛种子为材料,在4种培养基(Ⅰ ～Ⅳ)中诱导出原球茎,再以预实验优选出的1/2MS+活性炭1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L为基本培养基,配制成0～5.0 mg/L的6种不同NAA浓度的培养基(Ⅴ ～Ⅹ)进行原球茎增殖分化和继代培养,筛选促进组培苗根茎叶生长发育佳的NAA浓度和培养基配方.结果种子在Ⅳ号培养基中的萌发率高,达94.2％以上;在NAA添加量为4.0 mg/L的Ⅸ号培养基中,原球茎分化后根长、叶长、叶宽、株高、茎粗、单株鲜重分别为1.516 cm、0.943 cm、0.365em、2.991 cm、0.264 cm、0.102 g,各指标均显著优于其它NAA浓度的培养基.另外,在Ⅸ号培养基中添加100 g/L土豆和80g/L香蕉能够显著地促进生根壮苗阶段组培苗根茎叶的生长发育,各指标可增加1～3倍.结论培养基1/2MS+NAA0.2 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂7.0g/L适宜铁皮石斛种子萌发,当NAA浓度为4.0 mg/L时更能促进组培苗根茎叶的生长发育.
