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具有蛋白酶抑制剂活性成分中药的筛选
蛋白酶抑制剂(proteinase inhibitor,PI)泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质,广泛存在于动、植物和微生物中.蛋白酶抑制剂在体内能与相应蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化为有活性的酶,使体内蛋白酶抑制剂.蛋白水解酶形成一定的动态平衡,在生物的生理体系以及一系列的生理病理过程中起着关键性的调控作用,是生物体内免疫系统的重要组成部分[1].
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本周氏蛋白在多发性骨髓瘤患者肾损伤中的作用
肾功能损伤是多发性骨髓瘤(MM)患者常见的严重并发症之一,是导致MM患者易发生感染以及早期死亡的主要原因.本周氏蛋白(BJP)的催化活性是其致肾损伤的重要因素并影响MM患者病情进展.研究指出,BJP具有水解肽及裂解DNA的催化活性,并在体外细胞实验中导致猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)凋亡.将BJP经过丝氨酸蛋白酶抑制剂DFP处理后,其催化活性丧失的同时对细胞诱导凋亡的作用也随之消失.因此,深入研究阐明BJP的致病机制有助于了解MM患者肾损伤的发生,并可能对治疗MM肾损伤患者提供一种新的方法.本文就近年对BJP催化活性的基础研究及其进展作一综述.
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定向进化技术在蛋白质开发中的应用进展
定向进化技术是一种利用实验室手段通过反复改造遗传多样性,结合文库高通量筛选而获得理想性状生物体的过程,现已成为在基础生物学和应用生物学领域应用广泛和有效的技术之一。目前已成功应用于蛋白质的研究和开发。蛋白质在生物催化、生物医药等领域具有广泛的应用。如何提高目的蛋白的产量、改善蛋白质的理化特性以及构建具有新催化活性的蛋白质以满足日益增长的需求是亟待解决的问题。而定向进化技术的发展为实现这样的目的提供了强有力的技术支持。本文就定向进化技术在蛋白质开发中的应用进行了综述。
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重症急性胰腺炎早期判定指标的研究
我们通过动态监测急性胰腺炎(AP)患者血浆多形核粒细胞-弹性蛋白酶(PMN-E)、磷脂酶A2催化活性(CA-PLA2)、C-反应蛋白(CRP)的水平变化,对采用上述指标预测AP严重度的临床价值进行评价.
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铈掺杂活性炭载铂催化剂的制备及催化氧化冷凝废水研究
目的 制备用于催化氧化处理冷凝废水的铈掺杂活性炭载铂催化剂(Pt/CeO2/GAC),考察Ce的掺杂改性是否能提高催化剂的催化活性,并对催化氧化冷凝废水进行研究.方法 采用浸渍乙二醇还原法制备了掺杂Ce的Pt//GAC催化剂,并对其进行了结构表征.采用间歇实验研究催化剂的催化活性.结果 在反应温度为40℃和常压条件下,当该催化剂投加量为13.33 g·L-1,反应时间为2 h,冷凝废水中93.4%的乙醇被氧化为乙醛和乙酸;而使用不加Ce的Pt/GAC催化剂,冷凝废水中的乙醇的氧化率只有85.0%.结论 Ce的掺杂提高了催化剂的催化活性.催化剂中以Ce4+形式存在催化剂表面上的Ce不仅增加了化学吸附氧含量,而且使活性组分Pt在催化剂表面的含量也显著增加.
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雷帕霉素对U937细胞抗肿瘤效应的研究
雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是细胞生长中心的调控者,它介导的信号传导通路异常是某些白血病的重要发病机制[1].雷帕霉素进入细胞后与FKBP(他克莫司结合蛋白)形成"功能获得性"复合物RAP-FKBP,强烈抑制mTOR的催化活性.阻断了信号的下传,终引起细胞周期蛋白合成的改变[2],为雷帕霉素靶向杀伤肿瘤细胞提供了理论依据.
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TRAP银染显色法检测常见肿瘤组织端粒酶活性
端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构,人体端粒DNA是六个核苷酸序列(TTAGGG)n组成[1].端粒酶是由RNA和蛋白质组成的核糖核酸蛋白酶,它能以端粒的3'端为引物,以其RNA组份为模板,蛋白质组份具催化活性,反转录合成延伸端粒重复序列[2,3].为探讨端粒酶在临床常见肿瘤中的作用,我们应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测端粒酶活性,现将结果报告如下.
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离子液体在分离领域研究进展与展望
离子液体,又称室温离子液体,也称液态有机盐,即在室温或室温附近温度下由离子构成的有机液体物质.其极性、亲水、亲脂性、催化活性等可以通过阳离子和阴离子进行调节,因此被称为"可设计的溶剂",又称"功能化离子液体".离子液体与常用的有机溶剂相比有着独特的性质,归纳总结如下:①几乎无蒸气压,在使用、贮藏中不会蒸发散失,可以循环使用,不污染环境;②有高的热稳定性和化学稳定性,在较宽广的温度范围内为液态,有利于动力学控制;③具有良好的溶解性,它们对无机和有机化合物表现出良好的溶解能力;④与一些有机溶剂不互溶,可以提供一个非水、极性可调的两相体系;⑤其酸度可调,表现出布朗斯特酸、路易斯酸性及超强酸性;⑥通常含有弱配位离子,所以具有高极化潜力而非配位能力;⑦离子电导率高,电化学窗口大,达3~5 V;⑧无可燃性,无着火点等.
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葡多酚与硫辛酸对60Coγ致小鼠肝损伤拮抗作用
葡多酚(grape procyanidin,GPC),又称葡萄原花青素,是从葡萄籽中提取的一种天然植物多酚类物质,具有抗氧化、抗辐射、抗突变等生物学功效[1].硫辛酸(lipoic acid,LA)作为一种细胞线粒体的抗氧化剂,能有效清除内源性自由基多发的线粒体所输出的自由基,从而避免自由基对细胞结构造成的氧化损伤[2].本研究观察GPC和LA对电离辐射损伤的拈抗作用.用60Coγ线进行照射小鼠肝原代培养细胞,测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)催化活性和过氧化损伤产物丙二醛(MDA)含量变化.
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EZH2在胚胎干细胞和肿瘤方面的研究进展
PcG蛋白家族成SEZH2是PCR2复合物的催化活性亚单位,通过甲基化核小体组蛋白H3的27位赖氨酸残基,沉默下游基因.这些下游靶基因大部分具有抑制肿瘤发生和调控干细胞分化的作用,它们的沉默将导致肿瘤的发生和干细胞多向分化潜能障碍.EZH2介导的基因沉默机制和DNA甲基转移酶(DNMTs)以及组蛋白脱乙酰酶(HDACs)之间存在密切的联系.现就EZH2在胚胎干细胞、肿瘤研究和临床应用前景作一综述.
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临床酶学测定标准化
众所周知,酶催化活性浓度的检测是通过监测酶催化反应的底物或产物转化速率来推算酶的催化活性,结果不是酶蛋白的实际含量,而是酶蛋白催化能力的高低.
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核酶:肝脏疾病基因治疗的新途径
核酶是1981年由Cech和Alfman在研究四膜虫mRNA前体的剪接中首先发现,此二人由此获得1989年的诺贝尔奖.核酶是一类具有酶催化活性的RNA分子,它可与相应的特异序列的RNA底物结合,行使其切割功能[1].核酶切割RNA不仅是其自身的主要功能特点,也是其用于阻断基因表达和抗病毒治疗的主要依据.核酶作为基因治疗的新方法,已被用于控制多种病毒感染和治疗癌症的研究中.本文着重对核酶的作用机制及其在抗肝脏疾病基因治疗的研究近况及应用前景等做一介绍.
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ALT催化活性测定中不同厂家或批号试剂不确定度的评定
目的 研究不同厂家或同一厂家不同批号的L-丙氨酸、α-酮戊二酸、还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐(NADH)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)对丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化活性浓度的影响,评定ALT催化活性测定中不同厂家或批号试剂不确定度.方法 按照国际临床化学和检验医学联合会推荐的ALT参考测量程序(37℃),分别测定S1 ~S5共5个浓度水平血清,用Bland-Altman法分析其一致性,并计算不同厂家或批号试剂间的不确定度.结果 ALT试剂各成分(L-丙氨酸、α-酮戊二酸、NADH、Tris)不同厂家及批号的不确定度分别为0.90%、0.65%、0.58%、0.23%,对ALT催化活性浓度影响的扩展不确定度为2.54%(k=2).结论 要使各参考实验室所测定的ALT催化活性浓度结果更具可比性,应规定各使用试剂厂家及批号,并在不确定度评定中考虑不同厂家或批号试剂的不确定度.
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丁型肝炎病毒核酶对丙型肝炎病毒 RNA的抑制活性
核酶(ribozyme)是一类具有催化活性的RNA分子,可通过碱基配对特异地与相应的RNA底物结合,并在特定的位点切割底物RNA分子[1].是基因功能阻断剂,被称为"分子剪刀".美国科学家Cech和Altman分别于1982年先后发现这种只有催化活性但不含蛋白质的核糖体RNA前体和RNase的成分[2],后统一命名为"核酶".
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泛素-蛋白酶体通路:从理论到临床
真核细胞内大多数蛋白质降解过程的调控是通过泛素-蛋白酶体通路(UPP)进行的.该过程分为两个步骤:①蛋白质的泛素化:一个或多个泛素分子通过共价键连接在目标蛋白质上;②多泛素化的蛋白质被26S蛋白酶体降解成寡肽.26S蛋白酶体是一个多亚单位的蛋白酶复合体,它可分为一个19S具有调节功能的调节颗粒和一个20S具有蛋白酶体催化活性的核心颗粒.
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p3GnT8/β3GalT7催化活性的研究
目的 进一步验证β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)的催化功能.方法 将重组表达载体pGEX-6p-1-β3GnT8/GalT7转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,得到GST-β3GnT8/GalT7融合蛋白,分别进行β3GAIT7和β3GnT8反应体系的酶促反应,利用高效液相色谱(HPLC)进行检测.结果 HPLC检测结果表明,β3GalIT7同时具有β3GalT7和β3GnT8的活性.结论 β3GalT7具有双重酶活性,拟初步重命名为β3GnT8/β3GalT7.
关键词: β1 3半乳糖基转移酶 3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 催化活性 高效液相色谱 -
HPLC测定叶酸-青霉素G酰化酶对N-苯乙酰化阿霉素的催化活性
目的:利用高效液相色谱法测定叶酸-青霉素G酰化酶(PGA)对N-苯乙酰化阿霉素(DOXP)的催化活性,为叶酸导向的酶催化前体药物的肿瘤治疗(FDEPT)研究奠定理论基础.方法:色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水,用85%磷酸调节pH至2.4;梯度程序:0~3 min为24%乙腈,3~15min为80%乙腈;紫外检测波长:495 nm;流速:1 mL/min.结果:DOXP和酶解产物阿霉素的tR分别为5.5 min和12.3 min,原酶PGA和叶酸-PGA偶联酶对DOXP的Km和vmax分别为15μmol/mL,0.094μmol/(min·mg)和19μmol/mL,0.086μmol/(min·mg).结论:DOXP为PGA的较好底物,叶酸与PGA偶联对酶的催化活性的影响较小.
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新发现的细胞周期抑制剂-p27
细胞周期是指正常连续分裂的细胞从前一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的连续的动态过程,此过程的顺序经过G1期、S期、G2期、M期4个阶段.通过细胞周期,细胞实现DNA的复制、染色体凝缩和分离、中心体的复制和分离、纺锤体的形成和伸长、核膜的破裂与再形成等过程,协调上述过程的是细胞周期素-周期素依赖激酶(cycin-CDK)复合体,其中cyclins是调节亚单元,CDKs为催化亚单位,反应底物为Rb蛋白,通过Rb蛋白的磷酸化而实现细胞周期的转换(正调控);同时CDKs又受CDKIS(细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂)抑制CDKs催化活性而发挥作用.
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血清甲状腺过氧化物酶抗体检测在甲状腺功能紊乱中的临床探讨
甲状腺过氧化物酶是一种糖基化血红素蛋白,跨于甲状腺细胞顶缘的细胞膜上,伸向充满滤泡腔的部分具有催化活性,是甲状腺激素合成的关键酶,也是一个重要自身抗原,当其作为抗原刺激机体产生抗体时常引起自身免疫性甲状腺病[1].
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骨碱性磷酸酶免疫试剂盒在儿童缺钙检测中的应用
骨碱性磷酸酶(BALP)免疫试剂盒采用免疫渗滤和全血干化学技术原理研制而成,用于检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性,籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病.现将我科对7469名儿童应用骨碱性磷酸酶免疫试剂盒检测缺钙性情况报告如下.