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正交优化超声-微波协同萃取金线莲中阿魏酸的工艺研究
目的:优化超声.微波协同萃取金线莲中阿魏酸的工艺.方法:以阿魏酸提取率为评判标准,溶剂种类(甲醇、乙醇和水)、料液比、提取时间、提取次数为考察因素,采用正交实验法对超声.微波协同萃取金线莲中阿魏酸的工艺进行优化.结果:提取次数为大影响因素,其次为溶剂、提取时间,而料液比在所考察范围内影响小.结论:超声-微波协同萃取金线莲中阿魏酸的佳工艺条件为料液比1:6的水提取30min,提取2次.
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金线莲菌根真菌的分离和鉴定
目的 分离及鉴定野生金线莲根内菌根真菌.方法 采用平皿点种法进行金线莲菌根真菌的分离,提取菌株的总DNA,采用丝状真菌ITS通用引物对其rDNA相应区段进行PCR扩增,产物经纯化后测序.结果 结合各菌株的形态特征和ITS区域基因序列特征,将A12菌株、5号菌株、2号菌株、6号菌株、A46菌株和A55菌株鉴定为丝核菌(Rhizoctonia sp.),其有性态为Thanatephorus sp.或Ceratobasidium sp..结论 通过对金线莲菌根真菌的分离鉴定,有望将其应用到金线莲及兰科其它濒危药用植物繁殖中去.
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福建药用植物金线莲研究进展
福建药用植物金线莲具有丰富的营养物质,为高效安全的天然药物.本文对金线莲的化学成分、提取分析、生物活性等方面的新研究进展进行综述,并讨论金线莲药用植物的研究与开发.
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基于UHPLC-TOF-MS技术建立金线莲的指纹图谱及金线莲苷的含量测定方法
目的:建立野生、组织培养和种植等14批不同来源金线莲药材的超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC-TOF-MS)指纹图谱,建立金线莲苷的UHPLC-TOF-MS含量测定方法,为完善金线莲药材的质量标准提供实验依据.方法:依据高分辨质谱提供的精确相对分子质量鉴定化学成分,选择[M+ HCOO]-作为专属离子对金线莲苷进行含量测定.采用SPSS22.0软件对各批次药材中化学成分指纹图谱进行相似度考察和聚类分析,评价不同因素对金线莲药材质量的影响.结果:建立了金线莲药材UHPLC-TOF-MS指纹图谱并从中指认出36个化学成分,包括金线莲苷类5个、黄酮类18个、核苷类5个、有机酸类6个、长寿花糖苷C和天麻苷各1个.指纹图谱相似度考察、聚类分析及金线莲苷含量测定结果表明对药材中化学成分种类及含量产生显著影响的因素为产地和栽培时间.金线莲苷质量分数处于4.85％ ～ 16.18％.结论:建立的金线莲化学成分指纹图谱及金线莲苷含量测定方法稳定可行,为金线莲药材的质量评价提供了切实可行的检测方法.
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金线莲的鉴别与应用
目的 论述珍稀中草药金线莲的鉴别和应用.方法 对金线莲,从药物基源、性状鉴定、真伪鉴别、功效、临床应用等方面进行辨析.结果和结论 金线莲的鉴别可以作为临床调剂简便而有效的鉴别方法,提高从业人员的鉴别水平.金线莲的应用为深入研究和合理开发利用金线莲提供参考.结论 金线莲的鉴别与应用对提高临床安全用药具有一定意义.
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福建金线莲与菌根真菌互作过程中的蛋白质组研究
目的:通过蛋白质组差异研究菌根真菌促进植物生长的机制.方法:采用蛋白质双向电泳结合MALDI-TOF/TOF质谱方法研究了接种瘤菌根菌属Epulorhiza sp.的福建金线莲的蛋白组.结果:MALDI-TOF/TOF质谱分析了27个差异蛋白点,在数据库中以绿色植物为检索范围,确定了22个差异蛋白,功能大多涉及植物的信号传导、代谢调节等,光合作用及物质代谢中的功能蛋白及酶类等也有涉及.结论:菌根真菌通过影响植物的调控系统作用于植物,积极的调控使得植物物质代谢、光合作用等增强,进而表现出植株健壮、抗性增强；研究还表明植物与菌根真菌互作时可能发生某些基因的沉默.
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基于不同栽培阶段金线莲的代谢组学分析
金线莲是传统的中药及保健品,其人工栽培分为组织培养和土壤栽培2个阶段,但后者对于金线莲保健功能成分的积累是否必要尚缺乏定论.该研究以组培至壮苗及组培壮苗后再经3个月土壤栽培的金线莲为试验材料,利用GC-TOF-MS和UPLC-Q-TOF-MS对其代谢成分进行非靶向分析,找出了2个栽培阶段的差异代谢成分.结果表明,初级代谢产物中的醇类及有机酸等,在组培苗中含量较高.而寡糖、核苷类、酯类及次级代谢产物中黄酮类、萜类化合物含量在栽培苗中有明显提高.黄酮类和多糖被认为是金线莲的主要活性成分,因此土壤栽培对其有益成分的积累十分必要,经土壤栽培金线莲药用价值更高.
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金线莲种苗繁育及栽培模式研究现状与展望
实地考察福建、浙江、江西、台湾、广西、云南等金线莲生产种植基地,查阅相关文献,对金线莲基原植物及主要栽培类型、种苗繁育技术、栽培模式的研究现状进行了较为系统的报道.种苗繁育方式主要包括种子无菌培养、离体快繁、人工种子以及生物反应器扩繁,栽培模式主要包括设施栽培、林下仿野生栽培、盆栽等模式.后结合自身研究对金线莲生产过程中存在的一些问题进行了探讨,为金线莲产业发展与提升提供参考.
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不同移栽条件对金线莲组培苗成活率及生长的影响
观察金线莲幼苗的生长状况,统计不同移栽基质配比、种植密度、遮荫率和营养液条件下金线莲幼苗的成活率及植株高度、地径和植株鲜重的增长量.结果表明不同移栽条件对金线莲组培苗的生长状况影响差异较大,其中泥炭-河沙2∶1,种植密度为3cm×3 cm,遮荫率70％,1/4MS营养液的条件下,金线莲组培苗的成活率高且长势较好,为金线莲组培苗的人工栽培提供良好的技术方案.
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金线莲形态学性状与产量形成关系的多重分析
以13份金线莲种质为研究对象,对其9个性状(株高、地径、叶长、叶宽、植株叶面积、叶片鲜重、叶片数、高径比、植株鲜重)进行相关、通径和主成分分析.不同种源金线莲形态学性状变异系数为2.96％～ 12.59％,相关性研究表明植株鲜重与地径、株高和叶片数呈极显著正相关,与叶片鲜重呈显著正相关.通径分析表明株高对植株鲜重有大的正向直接作用,并通过叶片鲜重和叶片数对植株鲜重有不同程度的间接作用.通过主成分分析,将金线莲形态学性状分为“高产型形态决定因子”和“产量的叶部决定因子”.在实际生产及良种选育过程中,应关注金线莲株高、叶片鲜重和叶片数等性状.
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浊点萃取反萃取-气质联用测定金线莲中5种拟除虫菊酯类农药残留
建立浊点萃取反萃取-气质联用测定金线莲中甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯5种拟除虫菊酯类农药残留量的测定方法.选用聚乙二醇6000作为浊点萃取的提取剂、异辛烷为反萃取剂,气相色谱质谱法进行检测,外标法计算含量,结果表明,5种拟除虫菊酯类农药在15 ～2 000 μg·kg-1呈良好的线性关系,相关系数为0.955 ～0.999,加标回收率85.12％ ～ 101.6％,RSD 3.1％ ～8.4％,检出限0.63～3.10 μg· kg-1,定量限2.10～10.31 μg· kg-1.该方法操作简单、安全,可应用于金线莲中5种拟除虫菊酯类农药残留的检测.
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金线莲茎腐病菌的生物学特性及5种杀菌剂对其抑制作用
采用十字交叉法和血球计数板法分别测定不同培养温度、pH和光照条件对金线莲茎腐病菌菌丝生长状况和产孢量的影响;用菌丝生长速率法测定5种杀菌剂对金线莲茎腐病菌的抑制作用,为金线莲茎腐病的防治提供参考.结果表明该病菌菌丝生长、产孢的适温度都为28℃,适生长的pH为6～7,且光暗交替可促进菌落的生长和产孢.在5种杀菌剂中,戊唑醇乳油的EC50为10.02 mg·L-1,为多菌灵的92.50倍;其次是腈菌唑和福星乳油,EC50分别为91.23,96.68 mg·L-1.戊唑醇乳油对金线莲茎腐病菌的抑制作用强,防治效果较好.
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金线莲产业现状及可持续发展对策
实地考察金线莲生产企业和销售市场并结合自身研究成果,发现金线莲产业发展过程中存在野生资源保护和品种选育进程滞后,质量标准体系研究薄弱,产业层次低,产品创新能力不强,市场认知度不高,品牌竞争力弱等问题.因此,通过加强种质资源保护,构建动态监测体系,推动优良品种选育进展,建立健全良种繁育制度,加强质量标准体系研究,切实提高药材品质,加快产品结构调整,促进产业技术升级,提升品牌竞争力,拓展销售市场等方法,促使金线莲产业健康、可持续的发展.
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福建金线莲提取物对CCl4所致小鼠急慢性肝损伤的保护作用
目的 观察金线莲提取物对小鼠急性和慢性化学性肝损伤的保护作用.方法 分别应用水煎法、醇提法、全草榨汁法提取金线莲中的有效成分;小鼠分别腹腔注射0.1%CCl4的蓖麻油溶液、灌胃50%CCl4的蓖麻油溶液5周,制作急慢性化学性肝损伤模型;分别将金线莲3种提取物以1.0、5.0g·kg-1给小鼠灌胃,以生理氯化钠溶液和益肝灵片(主要成分为水飞蓟素)分别作空白和阳性药对照;通过小鼠血清生化指标(谷丙转氨酶和谷草转氨酶)测定、脏器称重和肝脏病理切片观察,评价金线莲各提取物对小鼠急、慢性化学性肝损伤的保护作用.结果 金线莲提取物可使CCl4所致急、慢性化学性肝损伤小鼠血清中的谷丙转氨酶和谷草转氨酶降低50%以上(P＜0.01),转氨酶值接近正常组;金线莲提取物可抑制肝损伤引起的肝脏和脾脏肿大以及胸腺萎缩;肝组织切片镜检,金线莲提取物能明显减轻中毒小鼠的肝损伤以及早期肝纤维化的形成.结论 金线莲对小鼠急、慢性化学性肝损伤具有保护作用及显著的降酶作用,并能减少早期肝纤维化的发生.
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RP-HPLC测定金线莲超声-微波协同萃取物中3种活性成分的含量
目的 建立金线莲中3个黄酮类成分的提取工艺和含量测定方法.方法 应用超声-微波协同提取珍稀金线莲药材中的黄酮类成分,正交实验对提取工艺进行了优化;RP-HPLC测定其含量,色谱柱为Agilent C18柱(4.6×250 mm,5μm),甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.04)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长368 nm;结果 3个黄酮类成分槲皮素、山萘酚、异鼠李素在该色谱条件下获良好分离,线性范围分别为0.10～1.60,0.10～1.60,0.2～3.2 μg,线性关系良好(r=0.999 5,0999 6,0.999 7),加样回收率分别为98.2%,97.9%,98.4%.测定了不同产地的金线莲药材,槲皮素、山萘酚和异鼠李素含量分别在0.109～0.197 mg/g,0.089～0.126 mg/g和0.281～0.356 mg/g.结论 对不同产地的野生金线莲药材中槲皮素、山萘酚和异鼠李素的含量进行系统研究,该法简捷,准确快速.
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金线莲多糖结构的初步分析
目的：初步分析活性药物金线莲多糖（PSA）化学结构特征。方法采用红外光谱分析法分析多糖官能团和糖苷键构型，气相色谱法测定多糖的单糖组成。结果 PSA由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖6种单糖组成。其中半乳糖和葡萄糖的比例占75%以上。多糖中单糖含有α-和β-吡喃环。结论 PSA复杂的结构构象是其具有多种药效活性的原因之一。
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促进金线莲生长发育的内生真菌筛选研究
目的 筛选促进金线莲生长发育的优良内生真菌.方法 在离体培养条件下,将金线莲试管苗与4株分离自兰科植物的内生真菌在5种供试培养基上共培养,根据菌苗共生特点筛选适宜的双重培养基.在此基础上,将17株分离自兰科植物的真菌与金线莲苗共生培养,以鲜重和增高为指标,筛选可促进金线莲生长发育的内生真菌.结果 17株真菌中有1株显著促进金线莲苗增高(P<0.05),3株极显著促进金线莲苗增高(P<0.01),高促增高可达对照的2.04倍,其中2株为金线莲有益真菌.结论 双重培养基和金线莲有益真菌的筛选为研究内生真菌和金线莲的共生机制及人工栽培金线莲新方法奠定了基础.
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台湾金线莲和菌根真菌互作过程中抗旱相关蛋白质组差异
目的 研究干旱条件下接种菌根真菌的植物与未接菌植物的蛋白质组差异,探索菌根真菌提高植物抗旱能力可能的机制.方法 以未接菌植物作对照,采用双向电泳法首次从真菌、植物和环境3因素上研究在干旱逆境中接种丝核菌属的台湾金线莲与未接菌对照的蛋白质组差异.结果 差异表达蛋白中涉及光合作用的有8个,其中7个与暗反应中CO2的固定相关,并且植物启动了干旱条件下的C4途径以充分利用CO2；涉及糖、脂代谢的有5个蛋白,蛋白质合成相关蛋白有3个,抗性相关蛋白2个.结论 干旱条件下接菌台湾金线莲的光合作用的暗反应尤其是C4途径加强,增加了在气孔关闭情况下固定和利用CO2的能力,糖、脂代谢和蛋白合成及抵抗病虫害的能力均强于未接菌对照；丝核菌属菌株能够帮助台湾金线莲增加抵御干旱的能力.
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单糖标准品的选择和不同试验产地金线莲中多糖含量分析
目的：建立金线莲多糖（Anoectochilus roxburghii polysaccharide ， ARPS）的含量测定方法，比较不同试验产地的金线莲药材中多糖的含量，并研究选择用来换算ARPS含量的合适标准单糖。方法：采用水提醇沉法制备粗ARPS ，用Sevage法脱去其中的蛋白。通过比较不同单糖与样品溶液的紫外吸收谱图来选择合适的单糖标准品，同时由精制ARPS求出换算因子f ，通过苯酚-硫酸法测定不同试验产地的金线莲中多糖的含量。结果：以葡萄糖为标准单糖计算ARPS含量，求得换算因子f=1.06，平均回收率为97.94%，测得不同试验产地的药材中ARPS的含量从2.01%～17.49%不等。结论：该方法简便、稳定、可行，不同试验产地的金线莲药材中多糖的含量差异较大，该结果为金线莲培植与进一步研究提供参考依据。
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荧光光度法测定福建组培金线莲中总黄酮含量
目的 建立测定福建组培金线莲中总黄酮含量的荧光光度法.方法 根据黄酮类化合物与Al3+ 能形成稳定的荧光络合物,采用95% 乙醇超声提取福建组培金线莲中的总黄酮,以槲皮素为对照品,用荧光光度法测定总黄酮含量.结果 在选定的实验条件下,槲皮素浓度与荧光强度具有良好的线性关系,线性范围为0.002 ～ 0.400 μg/mL,检出限为0.000 4μg/mL,线性方程F=200 2.6C+5.529 6,相关系数r=0.999 5,测得福建组培金线莲中总黄酮含量(按干燥品计算)为73.98μg/g,平均回收率为99.95%,相对标准偏差为0.92%(n=5).结论 本法操作简便、快速、准确,适用于福建组培金线莲中总黄酮的含量测定.
