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人胰腺癌中miRNA的差异表达及部分功能研究
胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,具有高度侵袭性,它的预后差,患者5年生存率不到5%,因此,对于胰腺癌发病机制及其新的治疗靶点的研究,是众多学者研究的热点.miRNA是由21~25个核苷酸组成的非编码RNA,它作为一种转录后调节分子通过与靶基因的3’-UTR配对,促进mRNA的降解或抑制翻译,从而抑制其靶基因的表达.近年的研究显示,大多数肿瘤都存在miRNA表达谱的改变[1-3],差异表达的miRNA在肿瘤中起到癌基因或肿瘤抑制基因的作用[4-6].胰腺癌同样存在着miRNA表达谱的改变,但关于miRNA与胰腺癌的关系知之尚少,因此研究miRNA在胰腺癌发病机制中的作用具有重要的意义.我们采用miRNA芯片筛查胰腺癌组织与正常胰腺组织中差异表达的miRNA,结果发现了一组在胰腺癌中表达有差异的miRNA,其中上调的miRNA有18个,下调的有14个.根据我们芯片筛查的结果并结合文献报道,我们选择了在胰腺癌中表达显著下调的miR-96、miR-217和表达明显上调的miR-27a进行了功能研究,并分析了它们在胰腺癌的发生、发展过程中可能发挥的作用.
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PIP反义核酸对乙肝病毒PRE转录后调节的影响
目的研究乙肝病毒转录后调节元件(PRE)结合蛋白PIP在PRE转录后调节机制中的作用. 方法用质粒pcDNA3.1(-)构建PIP反义核酸真核表达重组体pAS-PIP;用pAS-PIP转染HepG2细胞,再将依赖于PRE转录后调节的CAT报告质粒转染上述细胞,通过ELISA方法检测CAT的表达水平. 结果成功构建PIP反义核酸真核表达重组体pAS-PIP;基因转染结果显示,与转染空载体组相比,转染pAS-PIP反义核酸组CAT水平下降21.97%. 结论 PIP反义核酸可有效地降低依赖于PRE的CAT的表达,PIP在PRE转录后调节中起着重要的作用.
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microRNA在膀胱尿路上皮癌中的研究进展
microRNA是一类约18~26个核苷酸构成的单链小分子非蛋白编码RNA,通过和位于mRNA的靶点结合而在基因转录后调节中起着重要作用.目前膀胱肿瘤的发病机制尚未完全阐明,多项研究表明microRNA与膀胱肿瘤的发生发展密切相关.
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微小RNA技术与病毒性肝炎研究
病毒性肝炎严重危害人民的健康,尤其乙型和丙型病毒性肝炎,相当比例感染者可发生慢性化,严重可发展为肝硬化、肝癌.免疫损伤是慢性乙型和丙型病毒性肝炎的主要发病机制,但具体机制尚不十分清楚,至今尚未完全阐明.由于微小RNA(microRNA)是普遍存在的转录后调节微小RNA,又由于慢性乙型和丙型肝炎病毒感染后在细胞内长期存在,这就为机体和病毒本身产生microRNAs提供有力条件,这样宿主与病毒microRNAs,病毒与宿主microRNAs之间必然会存在相互的联系,推测对病毒性肝炎的慢性化,肝癌的发生等都会起到一定的作用.
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帕金森病与microRNA研究
帕金森病(Parkinson's disease,PD)又称为震颤麻痹,是一种与年龄相关的常见神经系统退行性疾病[1],由环境和遗传因素引起,65岁以上人群患病率为1%~2%[2-3].PD 临床表现主要为局限于身体一侧的肢体静止性震颤,伴随症状包括运动迟缓、肌强直及姿势步态不稳[4].大部分PD患者为散发性,仅不足10%的患者呈家族性.PD的诊断特征性标志物是存活的多巴胺神经元中出现嗜酸性蛋白质包涵体,又称路易小体[4].目前已发现18个基因位点和11个致病基因与PD有关,但这些基因如何参与PD发病尚不完全清楚[5-6].阐明这些基因突变所导致的神经细胞退行性变的机制,将对延缓PD发病和治疗起着重要的作用[2].PD症状的出现是由于大脑黑质纹状体致密部多巴胺能神经元(dopaminergic neuron,DN)不断丢失,导致多巴胺含量的显著下降.当病变累及脑内其他区域时,很大一部分患者出现痴呆和幻觉,有研究表明microRNA(miRNA)与DN分化及生存可能相关[2,4].新近研究显示,miRNA广泛参与疾病的发生过程,对基因表达转录后调节和神经细胞表型调控起重要作用,目前已发现数个miRNA的分布和功能与PD存在相关性,且部分已在PD动物模型中得到证实[7].我们就miRNA与PD研究新进展作一概述.
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RNA结合蛋白HuR通过其RNA识别模体调节hsa-let-7c表达
微小RNA (microRNAs,miRNA)是一种短链的非编码RNA,它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育.机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控,其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性,而目前我们对其转录后调控的机制还知之甚少.本研究旨在证实RNA结合蛋白HuR是否通过与pri-miRNA中富含AU的序列相结合调节miRNA的表达.利用生物信息学方法对pri-miRNA中的AUUUA模体进行筛查,发现在hsa-let-7c下游富含AUUUA模体,而hsa-miR-21则不具备这一模体.通过转染HuR质粒到HEK293T细胞构建过表达模型,然后用Westem blot和real-time PCR分别检测HuR蛋白和miRNAs表达水平.结果显示,过表达HuR能够促进成熟hsa-let-7c而非hsa-miR-21表达.而过表达缺失RNA识别模体3(RNA recognition motif,RRM3)的突变体HuR则不能促进hsa-let-7c的表达.以上结果提示RRM3是HuR介导成熟hsa-let-7c表达的关键序列,而HuR在调控miRNA生物合成中可能扮演了一种新的角色,即在转录后水平调节miRNA的表达.
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HBV感染基因封闭治疗中的两个研究热点
由于目前抗乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗效果并不令人满意,近年来一些学者提出了基因封闭治疗HBV感染的思路并进行了深入的研究.基因封闭涉及多个方面,其中反义技术和抑制性转录后调节序列结合蛋白是其中的两个主要部分,由于两者的高效性、高特异性和较强的可行性,使之成为现阶段基因封闭治疗研究中的两个热点.
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小分子RNA与结直肠癌关系的研究进展
小分子RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性非编码单链小RNA,通过与靶序列特异性相互作用,在转录后调节基因表达,miRNA可调节约30%的人类蛋白编码基因,参与增殖、分化、凋亡等多种调控[1]。结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的恶性肿瘤之一,我国CRC发病率呈逐年上升趋势,目前居所有肿瘤发病率的第五位(在经济发达的地区,CRC甚至跃居第二,仅次于肺癌),且发病年龄亦有年轻化趋势[2]。越来越多的研究表明,特异性miRNA的异常表达在CRC的发生、发展,侵袭及转移中发挥重要作用。本文就miRNA与CRC的研究进展做一综述。
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CYP2A6酶活性调节机制的研究进展
CYP2A6是一个在药理和毒理学上均占有重要地位的代谢酶,香豆素和尼古丁主要由它介导转换,并与吸烟疾病密切相关;而核不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)是一个在转录后水平上发挥重要调节作用的蛋白,对于某些特异基因,转录后调节影响占有重要的地位.CYP2A6酶活性与hnRNP A1关系的研究是近几年来受到学者关注的,该文试图阐述转录后水平上hnRNP A1对CYP2A6活性的调节影响,更好地掌握CYP2A6活性变化规律,对于指导临床用药及烟瘾戒断治疗有重要的意义.
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缺血性脑卒中后microRNA的调控作用
全球范围内脑卒中造成的死亡在各类疾病造成的死因中位居第三位,缺血性脑卒中是中国常见的脑血管疾病之一.以人群为基础的研究发现,中国缺血性脑卒中发病率占总脑卒中的45.5%~75.9%[1].在缺血性脑卒中后的功能康复过程中,除了运用促进神经再生的药物、传统的运动疗法和各种物理因子疗法外,人们还探索脑机接口、经颅磁刺激、使用生长因子、诱导神经干细胞定向分化等新型的治疗方法.要真正实现脑卒中后脑功能康复,必须清楚认识大脑各部分功能以及细胞之间是如何进行信号的组织与传递的,即“神经网络编码”.近年来一类新的非编码microRNA( miRNA)引起科学家们的关注,miRNA参与细胞的转录后调节,在胚胎发育、细胞增殖、细胞分化、凋亡、代谢等一系列生命过程中扮演重要角色[2].深入探索miRNA针对缺血性脑卒中分子病理学的调控机制,可能有助于我们理解某些康复治疗的作用机制,为寻找有效的神经康复治疗措施提供新思路.
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miRNA调节细胞分化研究进展
miRNAs是一类内源性非编码小RNAs,初发现的内源性的miRNAs是lin-4和let-7,它参与基因表达转录后调节,通过与靶向mRNAs的3'-UTRs(3'端非编码区)或编码区结合,发挥负性调节作用,即参与基因调控和蛋白表达.
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血管生成相关miRNAs与子痫前期
MiRNAs 是一类长度约9~25个核苷酸的非编码单链小分子RNA ,由60~110 nt 的内源性转录前体经过 Drosha酶和Dicer酶加工而成。 MiRNA通过与目标mRNA 分子的3′端非编码区(3′-untranslated region,3′UTR)的完全或不完全配对引起靶mRNA 的降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后表达的调控[1]。 MiRNA对靶基因的转录后调节在血管再生及内皮细胞功能调控中起重要作用,如 miR-126能在内皮细胞中特异性表达并调控血管生成;miR-210在缺氧导致的血管生成中发挥重要作用;miR-17/92簇在体外可以抑制内皮细胞增殖;miR-378能够促进肿瘤血管发生等[2]。深入研究血管生成相关miRNA对子痫前期(preeclampsia, PE)发病机制的影响,将为有效改善 PE 的妊娠结局及预防和治疗PE提供一种新的策略。
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miR-206调节的血清IGF-1水平与2性糖尿病伴发帕金森病的相关性研究
目的 研究血清胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)水平在2型糖尿病(T2D)、帕金森病(PD)及T2D伴发PD (T2D-PD)患者之间的差异并探讨其转录后调控机制.方法 收集T2D患者21例、PD患者20例、T2D-PD患者17例以及正常对照25例,应用ELISA法检测血清IGF-1蛋白含量;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测血清相关microRNAs的表达水平;miRanda分析软件预测miR-206可能靶向IGF-1 mRNA表达的作用位点.结果 T2D-PD患者血清IGF-1水平较PD组下降,但差异不显著,与正常对照组比较差异不显著,而较T2D组显著升高(P<0.001);T2D-PD组血清miR-206相对含量显著低于T2D组(P<0.01),与正常对照组和PD组比较无显著性差异;miRanda软件预测miR-206可以靶向性结合IGF-1 mRNA的3’-非编码区(3’-UTR),mirSVR评分为-1.285,PhastCons评分为0.6561.结论 miR-206介导的IGF-1表达增加可能是糖尿病伴发PD重要的病理生理机制,提示血清IGF-1水平可能成为糖尿病伴发PD早期临床诊断的关键指标之一.