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miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达下调
目的探讨miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达变化,及其对白血病细胞功能的影响.方法用real-time PCR方法检测miR-31-5p在白血病患者及正常人外周血单个核细胞中的表达;用miR-31-5p模拟物转染人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞,通过CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和单核系分化;用荧光报告基因和Western blot方法检测靶基因HuR的表达;用RNAi方法干扰内源性 HuR的表达,并检测THP-1细胞的增殖和单核系分化.结果miR-31-5p在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达显著低于正常对照(P<0.05);在THP-1细胞中过表达miR-31-5p可以抑制细胞增殖,并促进细胞向单核方向分化成熟;HuR为miR-31-5p的靶基因;干扰THP-1内源的HuR表达也会对THP-1的增殖和单核分化产生调控作用.结论miR-31-5p在急性髓系白血病发生中可通过靶向抑制HuR发挥抑癌基因功能.
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RNA结合蛋白HuR调控前列腺癌细胞活力机制的研究
目的 前列腺癌在我国的发病率及病死率逐年上升,但其发病机制尚未明确,本研究从转录后水平初步探讨RNA结合蛋白HuR参与调控前列腺癌细胞活力的机制.方法 免疫荧光检测前列腺增生细胞(BPH)及前列腺癌细胞(PC3)中HuR蛋白的定位,蛋白质印迹法检测HuR及环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)蛋白在细胞内的表达,MTT法检测细胞活力,脂质体转染法转染质粒及干扰片段,qPCR检测干扰效率,RNA-pull down实验验证HuR对COX-2的调控.结果 HuR在BPH细胞主要定位于细胞核,在PC3细胞中主要定位于胞质.PC3细胞中HuR表达水平为1.699±0.011,高于BPH细胞的0.654±0.028,差异有统计学意义,t=58.67,P＜0.001.PC3细胞中过表达HuR后,转染空质粒组细胞活力为1.038±0.117,转染HuR表达质粒后细胞活力为1.838±0.057,差异有统计学意义,t=10.656,P＜0.001.干扰HuR表达后,转染siNC组细胞活力为1.254±0.095,转染siHuR干扰片段组细胞活力为0.66±0.102,t=7.383,P=0.002;BPH组和PC3组COX-2表达水平分别为0.449±0.055和1.066±0.068,t=12.147,P＜0.001;过表达COX-2后PC3细胞活力明显增加,转染空质粒组细胞活力为1.296±0.114,转染COX-2表达质粒后细胞活力为1.954±0.062,t=18.062,P＜0.001.干扰COX-2表达后,PC3细胞活力明显降低,转染siNC组细胞活力为1.233±0.145,转染siCOX-2干扰片段后细胞活力为0.661±0.096,t=5.688,P=0.005.HuR可以结合于COX-2的3′-UTR并上调COX-2蛋白表达,转染空质粒组COX-2蛋白表达水平为0.638±0.067,转染HuR表达质粒组为1.703±0.022,t=26.26,P＜0.001.结论 HuR参与调控前列腺癌细胞活力可能是通过上调COX-2表达而实现.
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ARHI基因与HuR蛋白在胰腺癌PANC-1细胞中的表达
目的 观察ARHI基因转染胰腺癌PANC-1细胞后对HuR蛋白的影响.方法 采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒pLNCX2-ARHI-EGFP和空载体pLNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC-1细胞,细胞分为3组:实验组(pLNCX2-ARHI-EGFP)、 空载体转染组(pLNCX2-EGFP)和PANC-1细胞空白对照组,用G418筛选稳定转染的细胞株;采用PCR和Western blot方法检测ARHI基因表达,采用Western blot方法检测HuR蛋白表达.结果 稳定转染ARHI基因组可检测到ARHI基因mRNA和蛋白的表达.根据图像灰度计算蛋白条带相对表达量,稳定转染ARHI基因组HuR蛋白表达(0.2226±0.0644)较空载体对照转染组(0.4063±0.0925,P=0.029)和PANC-1细胞空白对照组(0.4178±0.1319,P=0.022)显著降低.结论 ARHI基因可以导致胰腺癌细胞株中HuR蛋白表达降低.
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RNA结合蛋白HuR与肿瘤关系的研究进展
RNA结合蛋白HuR又称作HuA。近年来研究发现，肿瘤的发生、发展与HuR密切相关，HuR过表达可提高肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。笔者根据国内外已发表的HuR相关文献，主要从HuR的生物学特性及与肿瘤（乳腺癌、胃癌、大肠癌、宫颈癌等）关系的相关进展等方面进行归纳总结，为抗肿瘤策略提供一些参考。
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HuR与环氧化酶-2在卵巢上皮性癌表达及相关性研究
目的 探讨HuR和环氧化酶(COX-2)与卵巢上皮性癌临床病理参数的关系及二者的相关性.方法 收集原发卵巢上皮性癌组织68例(卵巢上皮性癌组),交界性卵巢肿瘤10例(交界性卵巢肿瘤组),正常卵巢组织5例(正常卵巢组织组)行免疫组织化学染色SP法检测HuR与COX-2的表达及与临床病理参数的关系.结果 (1)HuR在卵巢上皮性癌胞核中阳性表达率为76.47%(52/68)明显高于交界性卵巢肿瘤胞核30.00%(3/10)和正常卵巢组织(正常卵巢组织无表达)(x2=18.873,P＜0.05);HuR在交界性卵巢肿瘤的表达与正常卵巢组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)HuR在卵巢上皮性癌和交界性卵巢肿瘤胞质中的阳性表达率分别为45.60%(31/68)、10.00%(1/10),正常卵巢组织无表达;胞质HuR在恶性卵巢肿瘤组织的表达与交界性卵巢肿瘤和正常卵巢组织比较差异有统计学意义(x2=7.999,P=0.018);胞质HuR在交界性卵巢肿瘤的表达与正常卵巢组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)临床分期Ⅲ、Ⅳ期胞质HuR的阳性表达率为56.09%(23/41),显著高于Ⅰ、Ⅱ期的29.63%(8/27),差异有统计学意义(x2=4.598,P=0.032).在组织学分级高分化、中分化、低分化胞质HuR的阳性表达率分别为10.00%(1/10)、46.67%(14/30)、57.14%(16/28),差异有统计学意义(x2=6.627,P=0.036).(4)COX-2在卵巢上皮性癌(67.64%)和交界性卵巢肿瘤(60.00%)的表达明显高于正常卵巢组织(0),在卵巢上皮性癌的表达与交界性卵巢肿瘤比较差异无统计学意义(P＞0.05);COX-2高表达与临床分期和淋巴结转移有关;(5)胞质HuR与COX-2在肿瘤中的表达呈正相关(x2=0.317,P=0.008).结论 HuR与COX-2在卵巢上皮性癌的表达明显增高,且胞质HuR的表达与COX-2的表达呈正相关,提示胞质HuR与COX-2的过表达可能与卵巢癌的发生发展密切相关.
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HuR和COX-2蛋白表达与宫颈癌手术预后的关系
目的 探讨和评价HuR和COX-2蛋白表达与宫颈癌手术预后的关系.方法 采用免疫组化方法 检测101例原发性宫颈癌组织中HuR及COX-2蛋白的表达;采用Kaplan-Meier 法分析二者表达与宫颈癌预后的关系.结果 101例宫颈癌组织中HuR蛋白的阳性表达率为47.50%(48/101),HuR蛋白的阳性表达率在不同的临床分期、癌灶大小及有无淋巴结转移的宫颈癌组织中比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),而在不同年龄、不同病理类型及组织学分级的宫颈癌组织中差异无统计学意义(P＞0.05).HuR蛋白阴性患者的5年累积生存率均高于HuR蛋白阳性患者,差异有统计学意义(P＜0.05).101例宫颈癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率为59.40%(60/101),COX-2蛋白的阳性表达率在不同的临床分期、组织学分级、淋巴结转移及不同病理类型的宫颈癌组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05),但在不同年龄、不同癌灶大小的宫颈癌组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).COX-2蛋白阴性患者的5年累积生存率高于COX-2蛋白阳性患者,差异有统计学意义(P＜0.05).HuR蛋白的表达与COX-2蛋白的表达呈正相关(r=0.383,P=0.000).结论 宫颈癌手术预后与HuR蛋白、COX-2蛋白阳性有关,HuR蛋白和COX-2蛋白可作为宫颈癌患者预测预后的指标之一.
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HuR蛋白对SH-SY5Y细胞活力的影响
目的 观察HuR蛋白对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y活力的影响.方法 培养SH-SY5Y细胞,通过脂质体介导的方法将构建的HuR siRNA表达质粒转入SH-SY5Y细胞,Western Blot检测HuR蛋白的表达;CCK-8、LDH检测细胞活力.结果 HuR基因沉默后,细胞活力下降.结论 HuR蛋白在SH-SY5Y细胞的发生和发展中发挥重要作用.
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乳腺癌细胞中HuR调控PDFC的分子机制研究
目的:探讨乳腺癌细胞中HuR调控PDGFC的分子机制.方法:通过软件预测分析,乳腺癌细胞中PDGFC 3'UTR的HuR结合位点;在RNA免疫共沉淀实验中,加入PDGFC刺激后检测HuR与PDGFC mRNA的相互作用;通过构建PDGFC 3'UTR五个截短体,荧光素酶报告基因实验检测HuR调控PDGFC的结合位点.结果:软件预测分析发现,PDGFC 3'UTR可能存在五个HuR结合位点;RNA免疫共沉淀实验中,当加入PDGFC刺激后,HuR与PDGFCmRNA出现免疫共沉淀,证明HuR和PDGFC之间的直接相互作用;PDGFCmRNA3'UTR报告基因系统检测显示,第2个和第4个位点可与HuR结合调控PDGFC.结论:本研究揭示了乳腺癌细胞中HuR通过与PDGFC mRNA 3'UTR结合调控PDGFC的分子机制,为乳腺癌的临床诊断和治疗提供了新的思路.
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RNA结合蛋白HuR在肿瘤耐药及药物敏感性中的作用
人抗原R(human antigen R,HuR)属于果蝇胚胎致死异常视觉(embryonic lethal abnormal vision,ELAV)家族的RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP),1996年克隆成功,随后发现其在神经发育和细胞分化中具有重要作用.近年发现,HuR通过增强肿瘤相关RNA的稳定性而参与了肿瘤发生、发展、转移和血管生成,具有类似原癌基因的功能;但也有研究显示HuR具有双重作用,既能促进肿瘤细胞对化疗药物多柔比星、吉西他滨的敏感性,又与肿瘤细胞对顺铂、紫杉醇类药物耐药相关.本文结合笔者所在课题组前期对HuR的研究基础,就HuR在肿瘤多药耐药及药物敏感性中的作用简要作一综述.
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RNA结合蛋白HuR在肿瘤中的作用
RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)是近年来发现的具有多种生物学作用的分子家族,其中,HuR属于胚胎致死异常视觉家族的RBPs,表达广泛.仞发现HuR与神经分化相关,通过与靶mRNA 3'UTR的ARE结合,在转录后水平调控RNA的稳定性和蛋白表达.近年发现,HuR与细胞增殖、肿瘤相关的炎症和血管生成密切相关,提示HuR可能参与了肿瘤发生、发展和转移过程.因此,以HuR为靶点的抗肿瘤策略可能为将来的肿瘤治疗带来希望.
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RNA结合蛋白HuR通过其RNA识别模体调节hsa-let-7c表达
微小RNA (microRNAs,miRNA)是一种短链的非编码RNA,它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育.机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控,其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性,而目前我们对其转录后调控的机制还知之甚少.本研究旨在证实RNA结合蛋白HuR是否通过与pri-miRNA中富含AU的序列相结合调节miRNA的表达.利用生物信息学方法对pri-miRNA中的AUUUA模体进行筛查,发现在hsa-let-7c下游富含AUUUA模体,而hsa-miR-21则不具备这一模体.通过转染HuR质粒到HEK293T细胞构建过表达模型,然后用Westem blot和real-time PCR分别检测HuR蛋白和miRNAs表达水平.结果显示,过表达HuR能够促进成熟hsa-let-7c而非hsa-miR-21表达.而过表达缺失RNA识别模体3(RNA recognition motif,RRM3)的突变体HuR则不能促进hsa-let-7c的表达.以上结果提示RRM3是HuR介导成熟hsa-let-7c表达的关键序列,而HuR在调控miRNA生物合成中可能扮演了一种新的角色,即在转录后水平调节miRNA的表达.
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HuR和p120在结直肠癌中的表达及意义
目的：检测HuR和p120在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法（IHC）检测HuR和p120在45例结直肠癌组织中的表达。结果结直肠癌组织中HuR表达高于正常结直肠组织（P<0.05），而p120表达则低于正常结直肠组织（P<0.05）。45例结直肠癌组织中，HuR、p120阳性表达率均与肿瘤的组织学分级、浸润程度及临床TNM分期有关（P<0.05）；而与年龄、性别、肿块大小无关（P均>0.05）；p120在有、无淋巴结转移组中表达差异有统计学意义（P<0.05），而HuR 蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）；HuR 和p120表达呈负相关（r=-0.343，P<0.05）。结论结直肠癌中HuR高表达可能参与了肿瘤发生与增殖，而p120低表达可能与肿瘤浸润及淋巴结转移有关。
关键词： 结直肠癌免疫组织化学 HuR p120 -
HuR和HIF-1α在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义
目的 探讨乳腺浸润性导管癌(IDC)中HuR和HIF-1 α蛋白的表达及意义.方法 采用免疫组化(PV-8000二步法)检测52例乳腺IDC组织标本和15例正常对照乳腺组织标本中HuR、HIF-1α蛋白的表达情况.结果 HuR和HIF-1 α蛋白在乳腺IDC组织中阳性表达率均明显高于正常对照乳腺组织(均P＜0.01);两者表达均与乳腺IDC的临床分期和组织学分级有关(均P＜0.05),而与年龄、肿瘤大小无关(均P＞0.05);HIF-1 α蛋白在有、无淋巴结转移组中表达有统计学差异(P＜0.05),而HuR蛋白表达无统计学差异(P ＞0.05);HuR和HIF-1 α蛋白表达呈正相关(P＜0.05).结论 乳腺IDC中HuR和HIF-1 α蛋白表达均增高,并与临床分期和组织学分级相关.
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HuR RNA结合蛋白的功能及其与肿瘤关系的研究进展
HuR是RNA结合蛋白中胚胎致死异常视觉(ELAV)家族的一员,又称为类胚胎致死异常视觉1,在许多细胞中普遍表达.ELAV家族初在果蝇中被发现,类胚胎致死异常视觉2、3和4主要与神经发育有关.1996年,Wei-J等利用PCR技术识别并克隆了一种HuR基因.他们首先设计了PCR引物,该引物的序列来源于临近HuD RNA识别模序Ⅲ的保守区.以HeLa细胞中的mRNA进行RT-PCR分析,结果扩增出140个核苷酸的RT产物.将此产物克隆、测序,发现其高度同源但又有别于HuD、HuC和Hel-N1序列,随命名为HuR(HuA).HuR能够与c-fos和IL-3 mRNA的AU富含元件(ARE)结合.现将HuD RNA结合蛋白的功能及其与肿瘤关系的研究进展综述如下.
关键词： HuR AU富含元件 胚胎致死异常视觉基因 环氧合酶-2 -
MiR-519通过调节HuR表达抑制胃癌细胞活力
目的:探讨miR-519参与调节胃癌细胞活力的机制.方法:qPCR检测胃癌细胞中miR-519表达,Western印迹法检测胃癌细胞中HuR蛋白表达,MTT法研究肿瘤细胞的活力,脂质体转染法分别转染HuR真核表达质粒及干扰片段、转染miR-519.结果:胃癌细胞株中HuR蛋白表达高于对照组细胞,过表达HuR可增加细胞活力(P＜0.001),干扰HuR表达后,细胞活力降低(P=0.001);胃癌组织中miR-519表达低于对照组(P=0.001),过表达miR-519可抑制HuR蛋白表达并降低胃癌细胞活力.结论:MiR-519可能通过下调HuR蛋白表达而降低胃癌细胞活力.
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HuR诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用探析
目的 观察HuR对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)成软骨分化的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选取4周龄SD大鼠提取骨髓,制备BMSC,取第3代BMSC,分为HuR组和NC组,分别用pAdEasy-HuR-GFP病毒液(HuR组)和pAdFasy-GFP病毒液(NC组)干预,诱导14d后进行固定、石蜡包埋、切片.行甲苯胺蓝进行染色,免疫组化、qPCR和检测XIAP、HuR、Col2a1的表达差异. 结果 甲苯胺蓝染色结果显示过表达HuR组的蛋白聚糖阳性信号比NC组多,且软骨球直径更大.免疫组化结果显示,XIAP、HuR、Col2a1随着含药血清浓度的提高逐渐上调,XIAP上调趋势比较明显,HuR和Col2a1上调不是很明显.qPCR检测到软骨HuR、XIAP明显升高,col2a1上调不明显.结论 过表达HuR有利于BMSC分化成软骨,其机制可能与HuR过表达后调控XIAP转录增加有关.
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龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞移植对膝骨关节炎大鼠软骨修复作用的比较研究
[目的]比较龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对膝骨关节炎(KOA)大鼠损伤软骨细胞的修复作用.[方法]选用36只4～6周龄大鼠,采用胶原酶注射法复制KOA模型(双膝).将造模大鼠分为模型组(生理盐水灌胃)、中药灌胃组(龙鳖胶囊剂量为7.5 g·kg-1·d-1)、BMSC移植组(每次尾静脉注射BMSC 1×106,每周2次),每组12只.干预时间为6周.给药结束后处死大鼠,取双膝软骨组织,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察双膝软骨组织的病理变化,分别采用免疫组化法和实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测大鼠双膝软骨组织Col2a1、XIAP、HuR蛋白和mRNA的表达.[结果]HE染色检测结果显示,模型组软骨组织表面粗糙,软骨裂隙较多,软骨细胞聚集分布且胞质皱缩,排列紊乱.中药灌胃组和BMSC移植组较模型组细胞表面略显平整,软骨细胞增多,细胞分布较为均匀,软骨裂隙减少.免疫组化和qPCR结果显示,中药灌胃组和BMSC移植组Col2a1、XIAP、HuR蛋白和mRNA的表达水平均明显高于模型组(P<0.05或P<0.001),但2个治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]龙鳖胶囊与BMSC移植均可促进KOA大鼠Col2a1胶原分泌,改善软骨修复,其机制可能均与上调凋亡相关蛋白HuR、XIAP的表达有关.
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小鼠HuR真核表达载体构建及对Lewis肺癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 构建小鼠同源的人抗原R (HuR)基因真核表达载体,观察HuR过表达对Lewis肺癌(LLC)细胞增殖和侵袭的影响.方法 从LLC细胞中抽提总RNA,RT-PCR扩增HuR cDNA,基因工程方法将PCR片断克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点.重组质粒经EcoRI和SmaI双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamineTM2000转染LLC细胞.Western blotting检测HuR在细胞中的表达.MTT和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力.结果 经酶切、测序鉴定,小鼠HuR基因正确插入到pEGFP-N1的多克隆位点,获得pEGFP-HuR;Western blotting显示转染组与未转染组比较,HuR蛋白表达、LLC细胞增殖能力和侵袭能力均显著增强.结论 HuR过表达可提高肿瘤细胞的增殖和侵袭能力.
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RNA结合蛋白HuR与前列腺癌的关系
前列腺癌是威胁男性健康的常见泌尿系肿瘤之一,大多数患者在发现时已处于晚期,其治疗效果并不理想.近年来,人类RNA结合蛋白HuR在肿瘤的发生发展、血管生成、转移、耐药等方面得到了广泛的研究,并取得诸多研究进展.HuR与前列腺癌之间也有着密切的联系,进一步研究HuR与前列腺癌的关系对前列腺癌的防治具有至关重要的意义.本文就HuR与前列腺癌的关系作一简要综述.
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HuR在肿瘤对化疗药物的敏感性及耐药性中的研究进展
人类胚胎致死异常视觉蛋白HuR属于RNA结合蛋白Hu家族中的一员.在过去的十几年中,HuR因其转录后调控机制调节癌症相关靶mRNA的表达,在肿瘤的发生发展、血管生成、侵袭、转移以及肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及耐药性等方面得到了广泛的研究.近年来,越来越多的研究发现,HuR的沉默可以促进肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.本文就HuR在肿瘤对化疗药物的敏感性及耐药性中的研究进展作一简要综述,希望能为临床靶向药物的研究提供方向.
