鱼藤素对K562细胞nup98表达的影响

本研究观察鱼藤素对白血病细胞株K562细胞核孔蛋白nup98表达的影响.用MTT比色法检测细胞增殖活性;流式细胞术及RT-PCR法分析鱼藤素作用K562细胞后nup98蛋白及mRNA含量的变化.结果表明:鱼藤素能显著抑制K562细胞的增殖,并与作用时间和鱼藤素浓度呈依赖关系;空白对照组K562细胞nup98蛋白表达的平均荧光强度为34.22±1.63,显著高于阴性对照组(2.83±0.02,P＜0.01),10 nmol/L鱼藤素即能显著抑制nup98蛋白的表达;10 nmol/L鱼藤素对nup98 mRNA表达的抑制作用不显著,20、40、80、160 nmol/L鱼藤素能显著抑制nup98 mRNA的表达,并且呈剂量依赖性.结论:鱼藤素可通过抑制核孔蛋白nup98的表达进一步抑制K562细胞的增殖.nup98可能成为急性白血病治疗的基因靶点.

鱼藤素对淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察鱼藤素对人Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色和Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blot检测细胞内cyclinD1和pRb的蛋白表达.结果 鱼藤素对Daudi细胞具有明显的增殖抑制作用,而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)抑制作用不明显.鱼藤素可以诱导Daudi细胞凋亡,Hoechst 33258染色可见典型凋亡小体.Annexin V/PI双标法显示,鱼藤素诱导细胞发生早期凋亡,并呈剂量依赖性,20、40、80 nmol/L鱼藤素作用24h时,凋亡率分别为15.46%±0.62%、18.48%±2.98%和31.42%±1.43%.鱼藤素作用Daudi细胞后,主要使细胞周期聚积于G0/G1期,G0/G1期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐增高,40nmol/L鱼藤素作用24 h达56.56%;相反,S期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐降低,对G2/M期细胞作用不明显.鱼藤素使cyclin D1及pRb蛋白表达降低,呈剂量依赖关系.结论 鱼藤素抑制Daudi细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡.其抗肿瘤机制可能与下调cyclin D1和pRb蛋白表达有关.

天然药物鱼藤素抗肿瘤作用机制研究进展

天然产物鱼藤素是近年来的研究热点之一.鱼藤素是鱼藤酮类化合物的一种,是从非洲灰毛豆叶尖部分离出的一类物质[1],初作为杀虫剂广泛使用,近几个体内外研究表明,鱼藤素很有希望成为癌症预防和治疗药物,初报道鱼藤素具有潜在的化学预防活性是来自Pezzuto等人对乳腺癌和皮肤癌的形成过程研究发现的,随后的研究揭示了鱼藤素对多种癌细胞形成及发展具有预防和治疗作用[2].

鱼藤素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖和凋亡的影响及对核受体共激活因子-3的调控作用

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3(SRC-3)的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节SRC_3的相互关系.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞内SRC-3基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞SRC-3蛋白的影响和分布情况.结果 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其作用24 h的IC50为(54.55±0.40)nmol/L.此外,鱼藤素具有较强的诱导RPMI-8226细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)%的RPMI-8226细胞发生凋亡;当药物浓度达到100 nmol/L时,总凋亡率达(63.57±1.36)%.在RPMI-8226细胞中SRC-3高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3的mRNA和蛋白表达水平明显下降.结论 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,并诱导其凋亡.而鱼藤素诱导的SRC-3表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.

鱼藤素对U937细胞细胞周期及核孔蛋白Nup98和Nup88的调控作用

目的 研究鱼藤素对人类白血病细胞株U937细胞体外抗肿瘤作用,研究其引起细胞周期与核孔蛋白Nup98和Nup88的改变,探讨其抗癌作用的分子机制.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布,激光共聚焦显微镜检测Nup98和Nup88蛋白表达变化,免疫电镜和流式细胞术观测鱼藤素对Nup98和Nup88的调控,Western blot检测鱼藤素对U937细胞Nup98和Nup88蛋白表达的影响.结果 ①鱼藤素对U937细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制作用呈时间和剂量依赖性.②鱼藤素作用U937细胞后细胞周期发生变化,0、5、10、20、40、80 nmol/L鱼藤素处理U937细胞24 h,主要使细胞阻滞于S期和G2/M期,而G1/G0期细胞呈浓度依赖性降低.G1/G0期细胞比例依次为73.01%、71.15%、68.42%、52.45%、43.99%和22.82%,S期细胞比例依次为17.18%、16.30%、18.09%、27.56%、31.21%和46.85%,G2/M期细胞比例依次为9.75%、12.31%、13.09%、18.99%、24.83%和27.79%.③鱼藤素可以调节U937细胞Nup98和Nup88的表达,低浓度即可使Nup98表达上调,而使Nup88表达下调.结论 鱼藤素能够抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于S期和G2/M期,而G1/G0期细胞呈浓度依赖性降低.其抗肿瘤机制可能通过参与调控U937细胞Nup98和Nup88的表达,使Nup98表达上调,而使Nup98表达下调有关.

鱼藤素作用K562细胞Topo Ⅰ表达的探讨

目的:探讨鱼藤素对DNA拓扑异构酶Topo Ⅰ表达的影响,进一步明确鱼藤素抑制肿瘤细胞增殖的作用机制.方法:流式细胞术及RT-PCR法分析鱼藤素作用K562细胞后Topo Ⅰ蛋白及mRNA含量的变化.结果:流式细胞术分析结果发现Topo Ⅰ蛋白的平均荧光强度随着鱼藤素作用浓度的增高而逐渐减少,与空白对照组比较有显著差异(P＜0.05);RT-PCR半定量检测结果显示,鱼藤素作用K562细胞引起Topo Ⅰ mRNA含量减少,并与其浓度正相关.结论:鱼藤素可通过抑制肿瘤细胞内Topo Ⅰ而发挥作用.

082用LC和ES-MS测定鱼藤素降解产物及其稳定性

鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用

背景:以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验.目的:探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响.方法:不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72 h观测其表型变化,受精后72 h统计其胚胎孵化率.结果与结论:鱼藤素在0.1 μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2 μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3 μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死.结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育.

基因芯片分析鱼藤素对斑马鱼胚胎发育的影响

背景：鱼藤素具有延缓斑马鱼胚胎发育的作用，但其具体作用机制尚未明确。
　　目的：分析鱼藤素处理斑马鱼胚胎的基因与信号传导通路表达差异。
　　方法：斑马鱼胚胎来自于根据Zebrafish book中描述的方法养的殖斑马鱼。用0.6μmol/L鱼藤素处理2-细胞期斑马鱼胚胎，以二甲基亚砜孵化液处理2-细胞期斑马鱼胚胎为对照。4 hpf 时期提取二甲基亚砜组及鱼藤素组总RNA，利用基因芯片技术检测鱼藤素处理斑马鱼胚胎后基因的差异表达，采用实时荧光定量 PCR验证基因芯片结果，结合聚类分析及通路分析来探索鱼藤素的作用机制。
　　结果与结论：芯片结果显示，鱼藤素处理斑马鱼胚胎后差异表达上调3倍以上的基因407个，下调的461个。PCR 验证结果与芯片结果相符。经 KEGG 通路分析，涉及14条通路。鱼藤素可能通过干扰细胞的代谢生长及影响其分化起作用。

鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因下调的作用：整胚原位杂交检测

背景：斑马鱼胚胎发育早期，细胞分裂增殖快速，低浓度的鱼藤素可以延缓斑马鱼胚胎发育。目的：观察鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。
　　方法：收集正常受精后发育至2-cel期(受精后约0.75 h)以及shield期(受精后6 h)斑马鱼胚胎于12孔板，分别用100，200，400 nmol/L鱼藤素在28.5℃的培养箱中避光处理至shield期及受精后24 h。同时用1%的二甲基亚砜溶液作为对照组，于相同条件下培养。后收集对照组及实验组胚胎，制备细胞周期蛋白D1 RNA探针进行整胚原位杂交，于正置荧光显微镜下拍照观察染色情况以检测鱼藤素对胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。
　　结果与结论：鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达有明显的负调控作用。Shield期对照组胚胎细胞周期蛋白D1在外包细胞中泛表达，随着给药浓度的增加，细胞周期蛋白D1的表达显著减少，400 nmol/L鱼藤素处理组几乎不表达。受精后24 h的胚胎中细胞周期蛋白D1在脑部、中枢神经系统、发育未成熟的眼部、体节、躯干、尾部等有表达，100 nmol/L鱼藤素处理组表达明显下调，在增殖性区域几乎不表达。200，400 nmol/L处理组胚胎发育明显延缓，细胞周期蛋白D1主要表达于背侧外胚层细胞。

鱼藤素诱导食管癌Ec-109细胞株凋亡

目的 观察鱼藤素对食管癌Ec-109细胞凋亡的影响及作用机制.方法 运用流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的含量.结果 流式细胞仪检测不同浓度的鱼藤素作用后Ec-109细胞的凋亡率依次上升,且呈时间依赖性和剂量依赖性；随着鱼藤素浓度的增加Ec-109细胞线粒体跨膜电位呈下降趋势；免疫组化结果显示鱼藤素浓度越高,Bcl-2蛋白阳性表达越低而Bax蛋白阳性表达越高.结论 鱼藤素对Ec-109细胞具有明显促进细胞凋亡的作用,与线粒体跨膜电位的改变及Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达有关.

鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用与途径

目的 探讨鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用及其与线粒体凋亡途径的关系.方法 用不同浓度的鱼藤素处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-HTC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;罗丹明123单染法观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞cyt-c、caspase-3蛋白的表达水平;分光光度法检测细胞caspase-3蛋白活性.结果 鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖性;800和1200 nmol/L鱼藤素处理组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;鱼藤素处理后,细胞线粒体膜电位降低,细胞浆内cyt-c和caspase-3蛋白的表达水平及caspase-3活性均明显升高.结论 鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制、诱导凋亡作用,其作用与线粒体膜电位降低、释放细胞色素C,从而激活caspase-3依赖途径有关.

鱼藤素对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察鱼藤素对MCF-7细胞株细胞增殖和凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B (phosphatidvlinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路的影响,旨在研究其抗肿瘤机制.方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测0、1、5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72 h后对MCF-7细胞增殖的影响,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/Akt通路相关分子的蛋白表达.结果:5、10、15和20 μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72 h后能明显抑制MCF-7细胞增殖(P＜0.01),抑制率随着浓度升高和时间延长而增加,各组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);而1μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72 h后对MCF-7细胞的增殖无明显影响(P＞0.05).5、10、15和20 pmol/L鱼藤素作用6 h后能诱导MCF-7细胞凋亡,透射电子显微镜下可观察到典型的凋亡细胞形态,而相同条件下1μmol/L鱼藤素对MCF-7细胞的凋亡诱导作用不明显.5μmol/L鱼藤素作用6 h后,MCF-7细胞内磷酸化Akt(p-Akt)(Thr308)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phosphorylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)(Ser9)、磷酸化磷酸肌醇依赖性激酶1(phosphorylated 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1,p-PDK1)(Ser241)和磷酸化人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因编码的蛋白(phosphorylated phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,p-PTEN)(Ser380)的表达量明显减少,而总Akt蛋白的表达量则无明显变化;1μmol/L鱼藤素作用6 h后,细胞内上述所有蛋白的表达量均无明显变化.结论:鱼藤素可能通过抑制PTEN(Ser380)和PDK1(Ser241)蛋白的磷酸化,进而抑制Akt(Thr308)的磷酸化,间接抑制其下游GSK-3β(Ser9)的磷酸化,终诱导MCF-7细胞凋亡和抑制其增殖.

鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响

目的：研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用CCK8检测不同浓度（0、1、10和25μmol/L）鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-4524、48、72和96 h 后对其增殖的影响；AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡；流式细胞仪检测细胞周期；利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化；DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果：1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为（28.82±0.002）%。随着鱼藤素浓度（10、25μmol/L）增加，作用时间（48、72、96 h）延长，其抑制作用增加，表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度（1、10和25μmol/L）鱼藤素作用于细胞48 h后，早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现，与对照组比较，1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后，S期细胞比例升高，G0/G1期及G2/M期细胞比例下降；10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后，G2/M期细胞比例升高，G0/G1期细胞比例下降（P<0.01）。倒置相差显微镜检查镜下则显示，1、10和25μmol/L 鱼藤素作用MKN-45细胞48 h后，可见典型凋亡样改变。 DAPI及Hoechst染色可见鱼藤素组细胞核皱缩变小、染色质浓聚和典型的凋亡小体。结论：鱼藤素可明显抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡。机制可能与细胞周期阻滞于S期及G2/M期有关。

Akt抑制剂鱼藤素对膀胱癌T-24细胞化疗敏感性的影响

2010年美国癌症学会公布了美国癌症的新统计数据,男性膀胧癌的发病率占全身肿瘤的7%,居第四位,死亡率占全身肿瘤的3%,居第九位;女性膀胱癌的发病率占全身肿瘤的2.4%,死亡率占全身肿瘤的1.58%.而在我国,膀胱癌是泌尿外科常见的肿瘤,占全部恶性肿瘤的3.2%.

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的 研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用.方法 MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cyt c的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达.结果 鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P<0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cyt c蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P<0.01).流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加.结论 鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Pax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cyt c释放有关.

Akt特异性抑制剂鱼藤素对前列腺癌PC-3细胞生长的影响

目的:观察Akt抑制剂鱼藤素对前列腺癌PC-3细胞株的抑制作用并探讨其可能的作用机制. 方法:用MTT法检测鱼藤素对PC-3细胞的增殖抑制率；流式细胞术(FCM)检测鱼藤素对细胞周期的影响；RT-PCR检测细胞中小鼠双微体2 (MDM2)、糖元合成酶激酶3β(GSK3β) mRNA表达的变化；Western印迹法检测MDM2、GSK3β蛋白表达的变化. 结果:MTT法显示,10、100、500、1 000 nmol/L的鱼藤素作用于前列腺癌PC-3细胞24、48、72 h后,对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制率分别为(91.10±3.75)％、(86.39±1.16)％、(79.51±2.63)％；(82.46±3.65)％、(76.84 ±0.97)％、(69.69 ±2.30)％;(81.46 ±0.41)％、(75.56± 1.12)％、(54.07±3.21)％;(66.77 ±2.82)％、(58.22±0.35)％、(39.34±2.40)％,均能显著抑制其增殖(P均＜0.01)；FCM检测显示各浓度的鱼藤素使前列腺癌PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期比例增加[(53.4±2.3)％、(62.4±2.2)％、(63.6±1.1)％、(65.0±0.3)％、(66.5±1.9)％,P均＜0.01],S期细胞比例减少[(26.9±1.7)％、(14.7±2.4)％、(11.1±5.2)％、(5.8±I.1)％、(7.0±0.6)％,P均＜0.01]；RT-PCR和Western印迹法结果显示鱼藤素上调了GSK3βmRNA和蛋白的表达水平,而下调了MDM2 mRNA和蛋白的表达水平. 结论:Akt抑制剂鱼藤素能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能与影响Akt信号通路下游分子GSK3β、MDM2的表达相关.

鱼藤素对小细胞肺癌的体外抗肿瘤效果评价及相关机制分析

目的:研究鱼藤素对小细胞肺癌体外抗肿瘤效果.方法:0、5、10、20、50 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞24 h,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)分析鱼藤素对细胞活力的影响.据CCK8结果,以0、5、10、20 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞,EdU掺入法检测细胞增殖,DAPI染色及流式细胞术测定细胞凋亡.据流式结果,20 μmol/L鱼藤素作用NCI-H446细胞0、0.5、2.0、4.0 h,蛋白质印迹法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达.结果:鱼藤素呈剂量依赖性地抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖、诱导其凋亡,作用不同时间后可上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平.结论:鱼藤素体外抗小细胞肺癌效应可能通过上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导细胞凋亡实现.

鱼藤素对小鼠小胶质细胞 BV-2影响的实验研究

目的：研究放射增敏剂鱼藤素对小鼠小胶质细胞BV-2的影响。方法 BV-2细胞以5×104／mL密度接种到细胞培养板中，加入8个不同浓度鱼藤素干预48 h后测定细胞增殖活力。在加入1×10-6 mol／L鱼藤素后6个时间点上测定细胞增殖活力。1×10-8 mol／L鱼藤素干预48 h，测定上清液中NO水平。结果5×104／mL BV-2细胞以含10％胎牛血清DMEM培养基培养，第48 h达到细胞生长曲线的峰值。在0～1×10-5 mol／L剂量范围内，1×10-6、1×10-5 mol／L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞的增殖活力显著降低；1×10-6 mol／L鱼藤素加入后第24、48、72 h等3个时间点上BV-2细胞增殖活力明显降低。1×10-8 mol／L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞上清液NO水平提高。结论鱼藤素在一定的浓度时激活小胶质细胞，更高浓度时将导致小胶质细胞损伤甚至死亡。

鱼藤素和氟尿嘧啶对胃癌细胞株MGC-803的协同抗肿瘤作用

[目的]观察鱼藤素与氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的作用.[方法]胃癌MGC-803细胞经鱼藤素、氟尿嘧啶单药及两药联合处理48h后,MTT法检测其对细胞生长增殖抑制水平,采用等效图解法分析其作用;流式细胞术检测经鱼藤素处理后MGC-803细胞周期的变化.[结果]鱼藤素可剂量依赖性抑制MGC-803细胞增殖,有G1期阻滞作用,与氟尿嘧啶联用可明显增强细胞杀伤作用.[结论]鱼藤素与氟尿嘧啶联用可产生明显协同作用,机制为两者作用于不同细胞周期,增强了细胞对氟尿嘧啶的敏感性.