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辣椒素对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及机制
目的 探讨辣椒素对结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用及其机制.方法 建立结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)检测移植瘤的细胞凋亡情况,采用免疫组织化学染色法和Western blot检测肿瘤组织中热休克蛋白27(HSP27)、细胞色素C(Cyt-C)和活化caspase-3蛋白的表达.结果 与生理盐水组(0.9％氯化钠注射液,NS组)比较,中剂量辣椒素组(10 mg·kg-1·d-1,C10组)和高剂量辣椒素组(20 mg·kg-1·d-1,C20组)移植瘤生长速度缓慢.TUNEL法检测结果显示,低剂量辣椒素组(5 mg· kg-1·d-1,C5组)和C10组积分吸光度值分别为2532.14±578.11和6364.03±1137.98,均高于NS组(760.12 ±238.05,均P ＜0.05),C20组积分吸光度值(15743.96±1855.95)高于C5组、C10组和NS组(均P＜0.01).免疫组化结果显示,NS组肿瘤组织中HSP27蛋白呈强阳性表达,其表达随着辣椒素剂量的增加而减弱,而活化的caspase-3和Cyt-C呈弱阳性表达,其表达随着辣椒素剂量的增加而增强.Western blot 检测结果显示,C5组和C10组HSP27蛋白的相对表达水平分别为0.73 ±0.05和0.41 ±0.03,均低于NS组(均P＜0.05),C20组HSP27蛋白的相对表达水平(0.22±0.06)均低于NS组、C5组和C10组(均P＜0.01).C5组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为2.57 ±0.34和2.03±0.38,均高于NS组(均P＜0.05).C10组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为4.23±0.45和3.13 ±0.44,均高于NS组(均P＜0.05),C20组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为5.78 ±0.48和4.92 ±0.52,均高于NS组、C5组和C10组(均P＜0.01).结论 辣椒素可抑制结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制HT-29细胞中HSP27蛋白的表达、促进活化的caspase-3、Cyt-C蛋白的表达有关.
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PUMA基因对HELA的作用及其机制的初步研究
目的 初步探讨PUMA基因对HELA细胞是否具有促凋亡的活性和其参与HELA细胞凋亡的过程线粒体中cyt-c、AIF位置足否发生迁移.方法 倒置相差显微镜、AO/EB染色检测PUMA基因的促凋亡活性;Western blot检测HELA细胞凋亡后线粒体中cyt-c、AIF位置是否发生迁移.结果 ①倒置相差显微镜和荧光显微镜结果显示转染PUMA基因后HELA细胞出现了一系列凋亡形态学改变,这种变化在转染48h比24h更明显;②Western blot结果显示HELA细胞凋亡后线粒体内膜腔隙蛋白cyt-c、AIF向胞质迁移,迁移的蛋白量在转染48h比24h更明显.结论 ①PUMA基因有促进HELA细胞凋亡的作用;②AIF和cyt-c参与PUMA基因促进HELA细胞凋亡的过程,但此过程有无涉及线粒体膜电位的变化还有待进一步的研究.
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大黄总蒽醌对大鼠睾丸支持细胞增殖及Cyt-C、Caspase3表达的影响
目的:探讨大黄总蒽醌(RTA)含药血清对大鼠睾丸支持细胞(SC)增殖及细胞色素C(Cyt-C)、Caspase3表达的影响.方法:两步酶消化法分离培养大鼠SC细胞,第三代SC细胞随机分为空白对照组和3个RTA含药血清组,分别以胎牛血清和RTA含药血清作用48h后,MTT法观察SC细胞的增殖活力,Westem blotting法检测SC细胞Cyt-C、Caspase3蛋白的表达情况.结果:与空白对照组比较,RTA高剂量组含药血清(4.50g/kg)SC细胞增殖活力明显降低(P＜0.05),Cyt-C、Caspase3蛋白表达明显升高(P＜0.05);RTA中剂量组含药血清(2.25g/kg)可显著抑制SC细胞增殖,上调Caspase3蛋白表达水平(P＜0.05).结论:RTA中、高剂量组含药血清可抑制大鼠SC细胞增殖,其机制可能与调节Cyt-C和Caspase3蛋白表达有关.
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洗心汤对Aβ1-42诱导的海马神经元线粒体功能的影响
目的:观察名方洗心汤对Aβ1-42损伤的海马神经元线粒体的调控作用,探讨名方洗心汤防治阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的可能作用机制.方法:提取Wistar新生鼠海马神经元并培养,分正常对照组,Aβ模型组,低、中、高浓度治疗组;Annexin V/PI法检测细胞凋亡率;JC-1荧光法检测线粒体膜电位;流式细胞仪技术和免疫荧光技术分别检测ROS与Cyt-c的蛋白基因表达.结果:洗心汤含药脑脊液对Aβ1-42诱导所致细胞凋亡具有显著保护作用.结论:名方洗心汤能够修复线粒体功能,从而提高Aβ1-42诱导细胞的存活率.
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线粒体信号通路Cyt-c和Apaf-1表达及艾灸足阳明经穴保护胃黏膜损伤机制的研究
目的:通过观察急性胃黏膜损伤后细胞凋亡线粒体信号转导途径中关键物质细胞色素C(Cyt-c)、凋亡激活因子-1(Apaf-1)表达及艾灸“足三里”、“梁门”穴对胃黏膜细胞凋亡的影响,探讨艾灸预处理保护胃黏膜损伤作用的内在机制.方法:24只wister健康大鼠随机分为3组,8只/组,即捆绑对照组、模型对照组和艾灸穴位组.采用Western-blot方法检测大鼠胃黏膜Cyt-c的表达,免疫组化方法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡指数(AI)、Apaf-1表达.结果:模型对照组AI、Cyt-c和Apaf-1表达上调,与捆绑对照组相比具有非常显著性差异(P＜0.01);艾灸穴位组AI、Cvt-c和Apaf-1表达降低,与模型对照组比较具有显著性或非常显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:无水乙醇灌胃可引发急性胃黏膜损,经线粒体Cyt-c→Apaf-1信号转导途径启动细胞凋亡程序,而艾灸足阳明胃经“足三里”、“梁门”穴预处理可以抑制细胞凋亡,其保护胃黏膜损伤作用的内在机制可能与下调线粒体凋亡通路Cyt-c和Apaf-1表达有关.
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Cyt-C与caspase在细胞凋亡中的作用及相互关系
细胞凋亡,又称细胞程序性死亡,是指细胞在一定的生理或病理性条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程,是一种主动的、程序性的、细胞固有的生物学过程,其特征是一系列细胞形态学的改变,包括染色体浓缩、核碎裂、细胞皱缩、凋亡小体形成等[1,2].近年研究发现,脑缺血再灌注致神经细胞死亡主要由凋亡所致[3,4],细胞色素C(Cyt-C)和天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)家族在细胞凋亡的发生和发展中起着关键作用[5].近年来对两种酶与各种疾病以及两种酶与凋亡的研究逐渐增加,本文将就此作出综述,同时探讨二者在细胞凋亡中的关系.
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鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用与途径
目的 探讨鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用及其与线粒体凋亡途径的关系.方法 用不同浓度的鱼藤素处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-HTC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;罗丹明123单染法观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞cyt-c、caspase-3蛋白的表达水平;分光光度法检测细胞caspase-3蛋白活性.结果 鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖性;800和1200 nmol/L鱼藤素处理组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;鱼藤素处理后,细胞线粒体膜电位降低,细胞浆内cyt-c和caspase-3蛋白的表达水平及caspase-3活性均明显升高.结论 鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制、诱导凋亡作用,其作用与线粒体膜电位降低、释放细胞色素C,从而激活caspase-3依赖途径有关.
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头针对大脑中动脉缺血再灌注模型大鼠Cyt-c、Caspase-3表达的影响
目的:探讨针刺对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响,揭示针刺脑保护机理.方法:选择SD大鼠,用线栓法复制右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,并进行头穴透刺,"百会"透"曲鬓",测定缺血半暗带Cyt-c、Caspase-3表达变化.结果:头穴透刺"百会"透"曲鬓"能下调缺血半暗带脑组织Cyt-c、Caspase-3表达水平.结论:针刺脑保护作用与下调Cyt-c、Caspase-3表达有关.
关键词： 头穴 透刺 大脑中动脉缺血再灌注 Cyt-C Caspase-3 -
褪黑素(MT)对大鼠睾丸细胞色素C、线粒体Ca2+的影响
目的:观察精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸细胞色素C(Cyt-C)、线粒体Ca2+的变化并探讨MT对上述指标的影响.方法:制备精索静脉曲张大鼠模型后检测指标.结果:精索静脉曲张大鼠模型制备成功,模型睾丸组织Cyt-C、线粒体Ca2+均显著低于正常组和治疗组(P<0.05).结论:VC时Cyt-C、线粒体Ca2+含量降低,而MT对其有保护作用.
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细胞色素C在铝致海马神经细胞凋亡中的变化
[目的]研究细胞色素C(cytochrome C,cyt-C)在铝致海马神经细胞凋亡中的变化,为进一步研究铝致神经细胞凋亡的作用机制提供一定的资料.[方法]健康成年雄性SD大鼠40只,用随机数字表法按体重随机分为4组:生理盐水组、2.5 mg/kg Al3+组、5.0 mg/kg Al3+组、10.0 mg/kg Al3+组.腹腔注射AlCl3溶液染毒60 d后,处死,①用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡;②Western-blot法检测海马神经细胞中cyt-C的表达情况,凝胶成像系统和扫描仪采集图像并对结果进行分析.[结果]①与对照组相比,Al3+5.0、10.0 mg/kg组凋亡指数显著升高(P<0.05),Al3+5.0、10.0 mg/kg组比Al3+2.5 mg/kg组凋亡指数显著升高(P<0.05),Al3+10.0 mg/kg组比Al3+5.0 mg/kg组凋亡指数显著升高(P<0.05).②与对照组相比,Al3+5.0、10.0 mg/kg组cyt-C表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).海马神经细胞凋亡指数与cyt-C呈正相关(r=0.616,0.574,P<0.01).[结论]铝诱导大鼠海马神经细胞凋亡可能与cyt-C释放入胞质有关.
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芒针对促进大鼠急性脊髓损伤功能修复的机制研究
目的 观察芒针对急性脊髓损伤炎症反应和神经细胞凋亡的影响,研究PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导途径是否参与芒针的神经保护作用,探讨芒针促脊髓损伤修复的具体作用机制.方法 将150只成年雄性SD大鼠随机分为A组、B组、C组、D组和E组,每组30只.采用改良Allen's法制作大鼠脊髓中度损伤模型,A组为假手术组,不予以损伤脊髓及芒针治疗;B组造模后不予以芒针治疗;C组造模后采用芒针治疗;D组造模前0.5 h鞘内注射LY294002,造模后采用芒针治疗;E组造模前0.5 h鞘内注射PD98059,造模后采用芒针治疗.分别采用BBB评分检测大鼠的自发活动;ELISA检测炎性因子TNF-α 、IL-6、IL-1β、NF-κB的含量;TUNEL检测细胞凋亡的程度;免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性细胞水平;Western印迹分析p-Akt和p-ERK在脊髓组织的表达,RT-PCR分析Cyt-C和Caspase-3在体内的表达.相对的下行Akt和ERK信号通路通过LY294002和PD98059特异性抑制剂处理分析在体内的抑制作用.结果 炎症反应和PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制的神经元凋亡参与了脊髓损伤大鼠模型的损害,芒针介导的神经保护作用与Bax蛋白阳性神经元数目的减少及Bcl-2蛋白阳性神经元数量的增加有关.芒针治疗能改善大鼠的运动功能,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路中p-Akt和p-ERK的激活,通过下调Bax蛋白和Bcl-2表达上调,抑制了线粒体凋亡途径关键因子Cyt-C的表达.TUNEL法检测并抑制激活神经元凋亡的Caspase-3的级联.PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂LY294002和PD98059的应用抑制了p-Akt和p-ERK的表达.结论 芒针促脊髓损伤修复的神经保护作用可能与炎症反应和PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路的激活、通过下调Bax蛋白和Bcl-2表达上调以及抑制线粒体途径诱导的凋亡有关.
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靳三针对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质Cyt-c和Caspase-3表达的影响
目的：探讨靳三针对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质Cyt-c和Caspase-3表达的影响,揭示靳三针对大脑的保护机制。方法 SD雌性大鼠妊娠21 d时剖腹,用止血钳夹闭双侧子宫角血管5 min,剖宫产取出幼鼠经行为学及脑组织切片确认缺氧缺血性脑损伤的为模型大鼠,随机分为模型组、针刺组。模型组不针刺；针刺1组、针刺2组、针刺3组、针刺4组分别于出生后第3、5、7、14天开始针刺,连续7 d；正常对照组自然分娩,不造模不针刺。所有组别大鼠均于出生后21 d断头取脑组织,检测大脑皮质中Cyt-c和Caspase-3的表达。结果4个针刺组的Cyt-c光密度值都有所下降,其中针刺1组、针刺2组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。针刺1组 Caspase-3的表达被明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论出生后第3天开始针刺对宫内窘迫HIBD大鼠脑的保护作用与Cyt-c和Caspase-3表达的下调有关。
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红景天提取物对睡眠剥夺大鼠脑细胞Ca2+和Cty-c量的影响
目的 观察红景天提取物对睡眠剥夺大鼠脑细胞Ca2+和Cty-c量的影响.方法 采用改良多平台水环境法制作大鼠睡眠剥夺模型,通过红景天提取物干预,观察胞浆和线粒体的Ca2及Cyt-c量的变化.结果 1.与睡眠剥夺组相比,红景天治疗3d,5d和7d组胞浆Ca2+量增高幅度明显减小,而线粒体Ca2+量降低幅度明显减小.2.与睡眠剥夺组相比,红景天治疗3d,5d和7d组胞浆Cyt-c量增高幅度明显减小,而线粒体Cyt-c量降低幅度明显减小.结论 睡眠剥夺可导致大鼠脑细胞浆Ca2+和Cyt-c量升高,红景天提取物可明显抑制其升高,保护脑组织.
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α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路的影响
目的 探讨α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 体外培养的人食管癌Eca-109细胞设为阴性对照组和α-细辛醚组,α-细辛醚终浓度分别为25,50, 100 μg·mL-1,培养48 h后使用荧光倒置显微镜观察细胞凋亡形态改变,采用TRIzol法提取细胞总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA的表达,Western blotting检测其蛋白表达,选取β-actin进行相对定量分析.结果 α-细辛醚组细胞形态发生明显凋亡改变;与阴性对照组比较,α-细辛醚组细胞Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA和蛋白的表达量均明显增加(P<0.05).结论 α-细辛醚可通过调节线粒体凋亡途径相关基因Cyt-c、Smac及Caspase3的表达增加诱导Eca-109细胞凋亡.
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脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与Caspase-3的表达及不同中医治法的干预
目的 观察大鼠脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与活化Caspase-3的表达情况及不同中医治法的干预作用.方法 用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型,免疫组化检测血肿周围神经元Cyt-c的释放情况与活化Caspase-3的表达,同时用直尺测量不同时间点血肿的大直径.结果 大鼠脑出血后血肿周围神经元于6 h即有Cyt-c释放;1 d后阳性细胞表达多;3 d后阳性细胞数减少;5 d后阳性细胞继续减少,与假手术组比较差异明显(P＜0.01);血肿周围于6 h出现Caspase-3阳性表达细胞,1 d阳性细胞计数达高峰,3 d出现轻度下降,5 d明显下降,与假手术组比较差异明显(P＜0.01);采取不同中医治法治疗后Cyt-c与Caspase-3均有所下降,与其他各组比较,平肝熄风汤组治疗后下降明显(P＜0.01).结论 脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与活化Caspase-3表达明显上调,采取熄风、泻火、祛痰、化瘀以及风火痰瘀同治等治法均能抑制Cyt-c与Caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,以平肝熄风汤组为明显.
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脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与Caspase-3的表达
目的 观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内细胞色素C(Cyt-c)与活化Caspase-3的表达情况,以探讨脑出血后神经元损伤的机制.方法 用Ⅶ型胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型,免疫组化检测神经元线粒体内Cyt-C的释放与血肿周围活化Caspase-3的表达情况.结果 大鼠脑出血后血肿周围神经元于6h即有Cyt-C释放,出现胞浆染色的阳性细胞;1d阳性细胞表达多;3d阳性细胞数减少;5d阳性细胞继续减少,与假手术组比较差异明显(P＜0.01);血肿周围于6h出现Caspase-3阳性表达细胞,1d阳性细胞计数达高峰,3d出现轻度下降,5d明显下降.与假手术组比较差异明显(P＜0.01).结论 脑出血后血肿周围神经元Cyt-c与活化Caspase-3表达明显上调,Cyt-c与Caspase-3在脑出血后神经细胞凋亡中起重要调控作用.
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PI3K/AKT信号通路与Survivin在上皮性卵巢肿瘤中的表达及相关性
目的：探讨PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及Survivin在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其相关性。方法：应用免疫组织化学SP法及Image-ProPlus图像分析软件检测PI3K、AKT、Survivin蛋白分别在30例正常卵巢组织、30例上皮性卵巢良性肿瘤、30例上皮性卵巢交界性肿瘤及30例上皮性卵巢癌中的表达情况。结果：PI3K、AKT、Survivin在恶性组中的阳性表达率显著高于其它三组，其表达与患者临床病理特征无关，PI3K与Survivin、PI3K与AKT及AKT与Survivin之间的表达呈正相关。结论：PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及凋亡抑制蛋白Survivin与上皮性卵巢癌的发生、发展有关；联合检测PI3K、AKT、Survivin有望成为上皮性卵巢癌临床诊断与鉴别诊断的参考指标。
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细胞色素C和Survivin在结肠腺癌中的表达及临床意义
目的:研究细胞色素C(Cyt-C)和Survivin在结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨Cyt-C和Survivin在结肠腺癌中的表达的相关性.方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术(S-P法)检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Cyt-C和Survivin的表达水平.结果:Survivin和Cyt-C在正常结肠中的表达率分别为20.0%和30.0%.在结肠腺癌中的表达率分别为69.5%和78.O%,Survivin蛋白和Cyt-C在结肠腺癌中的表达增加(P<0.05);Cyt-C在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成正相关(P<0.05);Survivin蛋白在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成负相关(P<0.05);两者与浸润深度,肿瘤的大小,患者的年龄,淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05).结论:Survivin和Cyt-C在结肠癌中表达增加提示Survivin和Cyt-C对结肠癌的发生发展起着重要作用.
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氯化两面针碱通过细胞色素c介导的线粒体凋亡途径诱导人结肠癌HT29细胞凋亡
目的:初步探讨氯化两面针碱(NC)对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响及其机制.方法:将HT29细胞分为溶剂对照组、15 μmol/L NC组、30μmol/L NC组和60 μmol/L NC组,采用CCK-8法检测NC对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,western blotting法检测细胞色素c(Cyt-c)和caspase-3蛋白的表达水平.结果:与对照组相比,各NC实验组的细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,15 μmol/L NC组、30 μmol/L NC组和60 μmol/L NC组细胞凋亡率分别为(35.30±14.30)％、(41.48±17.89)％和(46.51±11.35)％,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,不同浓度NC组Cyt-c和caspase-3蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论:NC能够显著抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,诱导HT29细胞凋亡,其分子机制可能与Cyt-c介导的线粒体凋亡途径有关.
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硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用
目的观察硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用琼脂糖DNA凝胶电泳观察细胞凋亡的发生;用Western blot观察Cyt-c释放.用MTT法检测线粒体功能状态,以罗丹明123标记的荧光探针检测线粒体跨膜电位.结果 100 μmol/L硫芥作用4 h线粒体功能就有降低,线粒体跨膜电位降低,二者间呈直线相关.硫芥中毒早期即可引起淋巴细胞线粒体细胞色素C释放和细胞凋亡(DNA ladder).结论硫芥可引起大鼠脾淋巴细胞线粒体明显损伤,线粒体参与了硫芥的细胞毒性作用过程.
