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过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系
目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制.方法用0.01、0.1、1 mmol/L的 H2O2处理K562细胞10、30、60、180 min建立氧化损伤模型;用0.1 mmol/L H2O2处理不同时间(6 ～ 48 h)和不同浓度(0.5 ～ 1 000 μmol/L)的H2O2处理48 h分别诱导K562细胞凋亡, 然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平.结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0.01 mmol/L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、 hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似.结论 JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关.
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热休克对大鼠再灌注性心律失常及心肌动作电位的影响
55只SD大鼠随机分为热休克组(H组,n=29)和对照组(Co组,n=26).H组予以热休克预处理,Co组则否.两组先各取16只大鼠行Langendorff离体心脏灌注.以心电图记录模拟缺血后复灌时心律失常情况,并测定复灌时心脏流出液CK的活性,同时检测两组心脏组织中HSP70的含量和抗氧化酶的活性.接着对其余H组13只和Co组10只大鼠进行离体心脏乳头肌动作电位的测定.结果显示H组再灌注性心律失常明显减轻,心肌CK的释放量显著减少(P＜0.001).同时H组心脏组织HSP70表达量显著增多,抗氧化酶活性也明显增强.H组台氏液灌流时心肌动作电位Vmax显著降低(P＜0.01).以台氏液复灌后,心肌动作电位恢复时间也明显以H组为短.结果提示热休克预处理可以减轻大鼠心肌再灌注性损伤和再灌注性心律失常,此作用与心脏组织中HSP70含量的增加和抗氧化酶活性的增强有关,同时还可能与热休克对心肌快Na+通道的抑制作用有关.
关键词： Langendorff灌流模型 心律失常 热休克蛋白类 动作电位 大鼠 -
混合热休克蛋白/肽疫苗与IL-2联合免疫治疗肉瘤的实验研究
目的 观察混合热休克蛋白,肽(mHSP/P)疫苗、环磷酰胺(Cy)及重组人IL-2(rhIL-2)联合免疫治疗小鼠肉瘤的效果.方法 取小鼠S180细胞肉瘤组织,经层析分离获得混合mHSP/P疫苗,进行常规蛋白质印迹鉴定.S180细胞接种至小鼠皮下后第2天开始实验,将小鼠按mHSP/P、Cy、rhIL-2药物组合、疗程和剂量的不同依次分为B～I组,以及给予生理盐水的A组(对照组).自肿瘤移植后至第45天,观察计算肿瘤体积;以肿瘤移植后3个月仍无瘤生长或肿瘤逐渐缩小至消失为标准,观察各组小鼠的无瘤生存情况,并进行平均生存期比较;以对照组的肿瘤体积为参照,计算第35天各组小鼠肿瘤的生长抑制率.结果 蛋白质印迹分析结果显示所获目的 蛋白为含有HSP110、HSP70、HSP60、Gp96的混合mHSP疫苗.3种药物联合应用的治疗效果明显优于单用mHSP/P疫苗,且多疗程较单一疗程疗效好,其中rhIL-2的佳治疗剂量为5×10~4～1×10~5IU/只,并可使30%的小鼠肿瘤消退而长期生存(治愈),平均生存期延长22～26 d,肿瘤生长抑制率为65%～76%.结论 mHSP疫苗与适量rhIL-2以及小剂量Cy联合应用为临床肉瘤治疗新的免疫治疗方案提供了实验基础.
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糖皮质激素、糖皮质激素受体和热休克蛋白对大鼠严重创伤后早期肝损伤的作用机制
目的探讨严重创伤后糖皮质激素(GC)、糖皮质激素受体(GR)、热休克蛋白(HSP70)在肝脏继发性损伤中的作用机制.方法成年雄性Wistar大鼠88只,随机分成正常对照组、严重创伤组、阻断50%GR伴严重创伤组.采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨骨折模型、动态观察创伤后大鼠血清皮质醇浓度、肝组织GR及HSP70、肝脏病理、血清肝功能生化指标等变化.结果创伤后血浆皮质醇浓度迅速增加,伤后4 h达到峰值,24 h仍维持在高水平;肝组织GR的结合容量伤后即开始下降,12 h降至低,24 h有所回升,HSP70在伤后增加,8 h达到高峰,24 h仍持续在较高水平;但肝脏病理、血清ALT、TB的改变差异无显著性.使用GR阻断剂后,血浆皮质醇浓度较严重创伤组明显增加,肝淤血明显,肝窦内有较多炎性细胞浸润;血清ALT、TB在伤后早期即有明显升高;肝组织HSP70较单纯创伤组明显增多.结论 GR不足可导致创伤后继发性肝功能不全的发生;HSP70参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动;GC、GR及HSP70在严重创伤后肝组织细胞的损伤与抗损伤机制方面起着重要作用.
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桂枝汤及其有效部位对胃肠激素双向调节作用的研究
目的观察桂枝汤及其有效部位对新斯的明性胃肠运动功能亢进大鼠和阿托品性胃肠运动功能受抑大鼠、在酵母性高体温和安痛定性低体温大鼠模型是否具有双向调节作用,并探讨其作用机制.方法应用生物化学和分子生物学等方法,观察桂枝汤及其有效部位B/B1对胃肠运动双向调节作用的同时,研究中枢和胃肠局部组织神经肽等胞外第一信使物含量的变化;研究桂枝汤及其有效部位A或B/B1对胞内信号物质cAMP,IP3,PKC,PKA,CaM,G蛋白,HSP70的活性变化与桂枝汤及其有效部位双向调节胃肠运动和体温变化的关系.结果桂枝汤及其有效部位对酵母性大鼠发热/安痛性大鼠低体温双向调节和新斯的明性胃肠运动亢进/阿托品性胃肠运动受抑小鼠和大鼠胃肠运动功能具有双向调节作用.通过影响中枢下丘脑或胃肠局部组织的神经递质、发热递质、单胺类物质和胃肠激素等胞外信使物质的含量变化达到调节体温和胃肠运动的作用;该胞外信使物质含量的变化与胞内信号物质Gαs,Gαi-1,Gαo,1P3/CaM,cAMP/PKA,PKC的活性变化呈一定的相关性;热休克蛋白在桂枝汤有效部位A调节体温变化的过程中有可能参与胞内信号物质活性的调节.结论桂枝汤及其有效部位A或B/B1对体温和胃肠运动具有双向调节作用;其作用机制是通过影响中枢和外周神经肽等物质,并作用于胞内信号物质达到双向调节作用.
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pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选
目的 构建表达热休克蛋白27( HSP27)的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核载体,建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株.方法 采用RT-PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点的HSP27基因片段,插入真核表达载体pEGFP-C1,鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞,并筛选稳转细胞株.荧光显微镜观察HSP72的定位,RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达.结果 双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP-C1 -HSP27的DNA序列完全正确,并成功转染SW1990细胞,筛选获得稳转细胞株.荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中,转染细胞的HSP27mRNA表达明显增加(1.458±0.160比0.897 ±0.051,P＜0.05),且表达HSP27与EGFP的融合蛋白.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-C1-HSP27,并筛选获得稳转的细胞株.
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肿瘤疫苗与白介素-12联合免疫治疗小鼠肉瘤的研究
目的:探讨混合热休克蛋白(HSP)/肽与白介素-12(IL-12)和环磷酰胺(CTX)联合治疗小鼠肉瘤的作用及机制.方法:以S-180肉瘤为模型,将瘤组织剪碎,裂解,离心,取上清经Sephacryl S-200层析,截取相对分子质量(50～200)×103段,经SDS-PAGE电泳及Western-blot法鉴定.用提取的HSP/肽免疫小鼠后,再用低刺量CTX及IL-12治疗(强化疫苗),观察无瘤生存率、抑瘤生长率、抑制转移率和存活期.用流式细胞仪,ELISPOT及乳酸脱氢酶等方法检测免疫功能的变化.结果:HSP疫苗与IL-12和CTX联合治疗小鼠S-180肉瘤,80.0%肿瘤完全消退,且100.0%抑制了肺部转移,达长期生存,而对照组全部在40 d内死亡.检测表明HSP/肽疫苗形成了免疫预存,从而使IL-12和CTX发挥了抗瘤作用.结论:HSP/肽与IL-12和CTX联合治疗诱发了机体细胞免疫功能,产生强大的抗瘤作用,可能具有临床应用前景.
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辣椒素对结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及机制
目的 探讨辣椒素对结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用及其机制.方法 建立结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)检测移植瘤的细胞凋亡情况,采用免疫组织化学染色法和Western blot检测肿瘤组织中热休克蛋白27(HSP27)、细胞色素C(Cyt-C)和活化caspase-3蛋白的表达.结果 与生理盐水组(0.9％氯化钠注射液,NS组)比较,中剂量辣椒素组(10 mg·kg-1·d-1,C10组)和高剂量辣椒素组(20 mg·kg-1·d-1,C20组)移植瘤生长速度缓慢.TUNEL法检测结果显示,低剂量辣椒素组(5 mg· kg-1·d-1,C5组)和C10组积分吸光度值分别为2532.14±578.11和6364.03±1137.98,均高于NS组(760.12 ±238.05,均P ＜0.05),C20组积分吸光度值(15743.96±1855.95)高于C5组、C10组和NS组(均P＜0.01).免疫组化结果显示,NS组肿瘤组织中HSP27蛋白呈强阳性表达,其表达随着辣椒素剂量的增加而减弱,而活化的caspase-3和Cyt-C呈弱阳性表达,其表达随着辣椒素剂量的增加而增强.Western blot 检测结果显示,C5组和C10组HSP27蛋白的相对表达水平分别为0.73 ±0.05和0.41 ±0.03,均低于NS组(均P＜0.05),C20组HSP27蛋白的相对表达水平(0.22±0.06)均低于NS组、C5组和C10组(均P＜0.01).C5组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为2.57 ±0.34和2.03±0.38,均高于NS组(均P＜0.05).C10组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为4.23±0.45和3.13 ±0.44,均高于NS组(均P＜0.05),C20组活化的caspase-3和Cyt-C蛋白的相对表达水平分别为5.78 ±0.48和4.92 ±0.52,均高于NS组、C5组和C10组(均P＜0.01).结论 辣椒素可抑制结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制HT-29细胞中HSP27蛋白的表达、促进活化的caspase-3、Cyt-C蛋白的表达有关.
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头颈部鳞状细胞癌细胞热疗后HSP70/HSP90的表达规律及其抑制对热疗疗效的影响
目的 探讨口腔鳞状细胞癌(简称鳞癌)CA9-22细胞系热疗后HSP70/HSP90的表达规律及抑制HSP70/HSP90表达对头颈部鳞癌热疗的影响.方法 ①对体外培养的口腔鳞癌CA9-22细胞,恒温水浴42℃热休克2 h,荧光定量PCR检测HSP70/HSP90的基因表达规律,采用Western-blot检测蛋白表达量的变化;②流式细胞术检测热休克前、后2、4、6、8、12、24 h细胞的凋亡情况,观察在热疗前应用槲皮素、格尔德霉素及联合对HSP70/HSP90的抑制后对热疗的增敏效果.结果 ①42℃热疗后CA9-22细胞HSP70/HSP90表达在基因及蛋白水平上均有明显升高,4 h达到高峰,8 h后开始回落,24 h接近正常;②热疗前使用槲皮素及格尔德霉素处理,凋亡细胞比例明显增加,联合处理组增加更为明显.结论 HSP70/HSP90在CA9-22细胞内的表达在热疗后迅速升高,在热疗前联合抑制HSP70/HSP90的活性,可以有效增加热疗敏感性.
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布洛芬对淀粉样β蛋白片段1～40引起的大鼠海马p38 MAP激酶信号传导通路及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联的影响
目的 研究布洛芬对淀粉样β蛋白片段1-40 (Aβ1-40)所致大鼠海马损伤的保护作用及作用机制.方法 大鼠ig给予布洛芬15 mg·kg-1,连续应用3 周,脑室内一次性注射Aβ1-40 (5 μL,1 mmol·L-1),注射后6 h快速取海马CA1区,Western免疫印迹法观察磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶的激酶3/6(MKK3/MKK6)、磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38 MAP 激酶)、磷酸化MAPK活化的蛋白激酶2(MAPKAPK2)、磷酸化热休克蛋白p27(Hsp27)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)9,3,7以及ADP-核糖聚合酶(PARP)的蛋白表达水平的改变.结果 脑室内注射Aβ1-40可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达明显增加,但可使磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达降低,这些改变伴随有caspase级联的激活.此外,也发现Aβ1-40可使海马CA1区完整的PARP蛋白表达明显减少,而劈切PARP(分子量为89 ku)表达明显增加.布洛芬可明显对抗Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP 激酶表达增加,上调磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达水平,同时抑制Aβ1-40引起的caspase级联激活和PARP的劈切.结论 布洛芬通过抑制Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP 激酶表达,明显增加以及上调磷酸化的Hsp27表达水平,对抗Aβ1-40引起的海马的神经细胞损伤.
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热休克蛋白90和糖皮质激素受体比例失衡对哮喘患者T淋巴细胞凋亡的影响
目的探讨热休克蛋白90(HSP90)与糖皮质激素受体(GR)比例失调对T淋巴细胞凋亡的作用,同时观察地塞米松(Dex)对HSP90和GR mRNA表达的影响.方法选择10例哮喘患者和7例正常对照,利用格尔得霉素(GA)特异性阻断HSP90的作用, 造成功能性HSP90与 GR比例降低,用碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪计数凋亡细胞的方法,观察用Dex和GA处理的T细胞凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察Dex和GA处理对哮喘T淋巴细胞HSP 90和GR mRNA 表达的影响.结果 Dex可明显诱导哮喘T淋巴细胞的凋亡(3 3 .8%±3.2% 比 23.2%±1.5%,P<0.01),GA对T淋巴细胞的凋亡无明显影响,却可阻断Dex诱导T淋巴细胞凋亡的作用(24.5%±6.0% 比 33.8%±3.2%, P<0.01);De x对正常人T淋巴细胞的凋亡有诱导作用,但其程度较弱(25.9%±3.5% 比 23.1%±1.5%, P<0.05).Dex可抑制哮喘患者T淋巴细胞HSP90和GR 的表达(分别为1.23±0.16比1.68±0.38 和 0.42±0.06比0.54±0.07, P 均<0.05),GA对 Dex的这一作用有阻断作用,但GA本身对HSP90和GR mRNA的表达无明显影响.结论 HSP90/GR 比例降低可影响Dex诱导的T细胞凋亡;Dex对哮喘患者GR和HSP90mRNA的表达有下调作用,而 Dex的这一作用可被GA所阻断.
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热休克蛋白70基因转染抗心肌细胞凋亡对缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 观察比较热休克蛋白70对心肌细胞急性实验性缺氧/复氧损伤的保护作用及其与热休克心肌细胞保护模型之间作用的异同.方法 进行大鼠乳鼠原代心肌细胞培养,分为4组:空白组(对照),缺氧/再灌组(A/R),热休克蛋白组(A/R+HS)和pCDNA热休克蛋白质粒组(pCDNA HSP70).用脂质体对pCDNA HSP70质粒包裹,并转导入相关心肌细胞内.RT-PCR检测HSP70 mRNA表达、Western印迹检测HSP70蛋白质表达.检测心肌细胞存活率(四甲基偶氮唑蓝比色法)、培养液中乳酸脱氢酶活性、心肌细胞超微结构改变(透射电镜)及凋亡指数观察心肌细胞损伤程度.结果 A/R+HS组和A/R+pCDNA HSP70组细胞存活率显著提高(71.8±10.3)%、(73.4±12.2)%;(LDH)活性明显降低(14.3±2.6)IU/L、(14.6±2.9)IU/L;细胞超微结构明显改善;A/R组的HSP7o mRNA和蛋白质含量比A/R+HS组和A/R+pCDNA HSP70组,明显偏低(1.87±0.23、2.05±0.34倍P＜0.01).二者的细胞凋亡指数也较A/R组明显降低.结论 HSP70基因高表达能对抗缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其作用与抗细胞凋亡有关.
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颞叶癫痫大鼠海马CA1区热休克蛋白27的表达
目的 观察热休克蛋白27( HSP27)在颞叶癫痫模型大鼠海马CA1区中的表达,探讨HSP27与颞叶癫痫形成的关系.方法 健康成年雄性SD大鼠86只,采用随机数字法分为正常对照组(16只)和建模组(70只)；建模组建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型,据建模后30 d内有无癫痫发作分为颞叶癫痫自发发作组(STLE组)和非自发发作组(n-STLE),正常对照组用生理盐水替代盐酸匹罗卡品,其他处理同建模组.采用匀浆裂解离心提取法分别提取三组大鼠海马CA1区的总蛋白.用免疫印迹法分别检测HSP27在STLE组、n-STLE组和正常组的表达；用免疫电镜观察HSP27在各组海马CA1区的表达.结果 免疫印迹法和免疫电镜观察结果相符:在STLE组、n-STLE组和正常组海马CA1区中,HSP27都有表达；免疫印迹相对光密度值分别为0.912±0.011、0.431±0.011和0.428±0.010,免疫电镜金颗粒数分别为50.0±4.2、23.0±2.8和20.0±2.3；STLE组中表达高,与n-STLE组、正常组比较差异有统计学意义(P=0.0001)；n-STLE组和正常组也有表达,但组间比较差异无统计学意义(P=0.63).结论 海马CA1区中HSP27可能参与了颞叶癫痫的形成.
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K141N突变型小分子热休克蛋白22轴突转运障碍及其在CMT2L发病机制中的作用
目的 比较野生型和K141N突变型小分子热休克蛋白22( HSP22)在原代培养小鼠皮质神经元轴突中的转运情况.方法 将构建好的含有人类野生型和K141N突变型HSP22基因的质粒(pCAGGS-HA-wtHSP22和pCAGGS-HA-K141N HSP22)分别与pEGFP-N1共转染小鼠皮质神经元,转染后观察野生型和K141N突变型HSP22蛋白在小鼠皮质神经元轴突内的转运情况,分析野生型和K141N突变型HSP22蛋白在轴突内的转运距离.结果 野生型HSP22蛋白在皮质神经元内被转运到轴突的远端[转运距离(637±117)μm],K141N突变型HSP22蛋白仅被转运到轴突的近端[转运距离(29±12)μm],野生型和K141N突变型HSP22蛋白在轴突中被转运的距离差异具有统计学意义.结论 K141N突变型HSP22蛋白在轴突内的转运障碍可能在CMT2L型的发病中起着重要作用.
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犬全脑缺血后头部选择性浅低温对脑内源性神经保护的影响
目的 研究犬全缺血后浅低温对脑内源性神经保护的影响.方法 15只健康杂种犬随机分为3组:手术对照组(A组,n=4只),缺血再灌注组(B组,n=5只),浅低温治疗组(C组,n=6只).A组动物完成麻醉和手术后心脏不停跳观察8 h.B组和C组动物心脏停跳18 min,心脏复苏成功后,B组动物观察8 h,C组动物接受浅低温[(34 ±0.5)℃]治疗.实验结束时开颅取右顶叶脑皮质供测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量和免疫组织化学法显示小白蛋白(PV)和热休克蛋白70(HSP70)阳性神经元.结果 B组动物脑内GSH、GSH-Px、T-SOD、MN-SOD、Cu-ZnSOD、PV阳性神经元数量显著低于A组(P＜0.05或P＜0.01),而HSP70-LI阳性神经元数量明显高于A组[(15.6±3.7)vs(5.5±2.1),P＜0.05].C组动物脑内GSH、T-SOD、Cu-ZnSOD、PV阳性神经元和HSP70-LI阳性神经元数量明显高于B组PV-Ⅰ神经元密度:(34.7±6.3)vs(23.8±5.3),P＜0.05;HSP70-LI阳性神经元密度:(27.1±4.9)vs(15.6±3.7),P＜0.05.结论 脑内内源性神经保护作用增强可能是浅低温治疗脑缺血的机制之一.
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亚低温对短暂性脑缺血再灌注老龄大鼠海马葡萄糖调节蛋白78表达的影响
目的 探讨亚低温对短暂性脑缺血再灌注老龄大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响.方法 健康雄性老龄SD大鼠144只,体重450～550 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=48):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、全身亚低温组(H组).采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型,脑缺血5 min再灌注.H组于再灌注即刻向大鼠全身喷洒酒精行体表降温,维持直肠温32～34℃3h.分别于再灌注6、12、24、48 h时,采用免疫组织化学方法和Western blot法测定海马GRP78的表达;HE染色法计数海马存活神经元数目.结果 与S组相比,I/R组再灌注各时点海马存活神经元计数降低,再灌注6、12、24 h时海马GRP78表达上调,再灌注48 h时表达下调,H组再灌注各时点海马存活神经元计数降低,海马GRP78表达上调(P＜0.05);与I/R组相比,H组再灌注12、24和48 h时海马存活神经元计数升高,再灌注各时点GRP78表达上调(P＜0.05).结论 亚低温可进一步上调老龄大鼠短暂性脑缺血再灌注时海马GRP78的表达,从而减轻内质网应激反应,减轻脑损伤.
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静脉复合胸段硬膜外阻滞对兔心肌梗死后c-fos和HSP70基因表达的影响
目的研究静脉复合胸段硬膜外阻滞对兔心肌梗死后非梗死区域内c-fos和HSP70基因mRNA的表达.方法28只健康新西兰大白兔,随机分成两组,每组各14只.实验组兔于气管切开插管静脉复合胸段硬膜外阻滞下开胸结扎左冠状动脉前降支,4h后取非梗死区域的心肌一块,用Trizol-异丙醇-氯仿法抽提总RNA;甲醛凝胶电泳确认RNA未降解后用紫外分光光度计测OD值、比率和浓度.取0.7ug总RNA,用一步法RT-PCR测定c-fos基因和HSP70基因相对于内参基因β-actin的表达.对照组不作TEA,其余处理与实验组相同.结果实验组兔非梗死心肌内c-fos和HSP70基因相对于β-actin基因的表达明显低于对照组(P＜0.01).结论静脉复合胸段硬膜外阻滞相对于单纯静脉全麻可降低兔心肌梗死后非梗死区域心肌内c-fos和HSP70基因的表达.
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温热处理对K562细胞系表达热休克蛋白gp96的影响
目的 观察不同温度刺激K562细胞热休克蛋白gp96的基因转录及蛋白表达的影响.方法 将培养获得的K562细胞分别进行40℃、45℃、50℃恒温刺激30 min,采用逆转录-聚合酶链反应技术检测gp96 mRNA的表达和采用western bloting技术检测gp96蛋白的表达.结果 各组gp96mRNA的转录结果为:对照组0.61±0.15,40℃组0.93±0.09,45℃组1.32±0.11,50℃组1.57±0.07,各组之间可见显著性差异(P＜0.05).各组细胞内表达gp96蛋白的量分别为,对照组2.15±0.18,40℃组2.94±0.12,45℃组3.45±0.24,50℃组5.21±0.09.各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 温热刺激可提高K562细胞内gp96 mRNA的转录水平,并且随着温度的不断提高,gp96的表达快速增高.
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热休克蛋白27在胃癌和癌前疾病中的表达及意义
目的 探讨热休克蛋白27( HSP27)在胃癌和癌前疾病中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学SABC法检测120例经病理证实的健康胃黏膜组织、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎和胃癌4种不同胃黏膜病变中HSP27的表达情况,通过图像分析软件对HSP27的平均吸光度值进行测定,并对临床相关资料进行统计学分析.结果 HSP27在健康胃黏膜组织(0.292±0.012)和胃溃疡(0.302±0.011)中较慢性萎缩性胃炎(0.305±0.010)的表达低,慢性萎缩性胃炎与健康胃黏膜组织比较差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌(0.313±0.024)的表达较前三者高,差异有统计学意义(P＜0.05).HSP27的表达与性别、年龄、组织类型和浸润深度无关;而与分化程度、淋巴转移有关(P＜0.05).结论 HSP27与肿瘤的发生有关,检测该指标可为胃癌诊断、判断预后和指导治疗提供理论依据.
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热休克蛋白27在胃癌和癌前疾病中的表达及意义
目的 探讨热休克蛋白27( HSP27)在胃癌和癌前疾病中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学SABC法检测120例经病理证实的健康胃黏膜组织、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎和胃癌4种不同胃黏膜病变中HSP27的表达情况,通过图像分析软件对HSP27的平均吸光度值进行测定,并对临床相关资料进行统计学分析.结果 HSP27在健康胃黏膜组织(0.292±0.012)和胃溃疡(0.302±0.011)中较慢性萎缩性胃炎(0.305±0.010)的表达低,慢性萎缩性胃炎与健康胃黏膜组织比较差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌(0.313±0.024)的表达较前三者高,差异有统计学意义(P＜0.05).HSP27的表达与性别、年龄、组织类型和浸润深度无关;而与分化程度、淋巴转移有关(P＜0.05).结论 HSP27与肿瘤的发生有关,检测该指标可为胃癌诊断、判断预后和指导治疗提供理论依据.
