首页 > 文献资料
-
JWA参与细胞氧化应激机制的研究
目的:建立氧化应激模型探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制.方法:用H2O2处理MCF-7(人乳腺癌细胞株)和WI-38(人胚胎肺纤维细胞株)两种细胞,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,用RT-PCR半定量的方法及Western blot免疫印迹分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP27、HSP70、HSP90的表达.结果:MCF-7细胞培养上清中MDA随H2O2孵育时间增加而升高、GSH随H2O2孵育时间增加而下降;WI-38细胞培养上清中MDA 的含量则先升高后于48h又恢复到对照水平,GSH含量先下降后于24h即升高至对照水平; MCF-7细胞经H2O2处理后JWA mRNA表现为明显的下降,WI-38则变化不明显;经H2O2处理后,JWA蛋白和HSP27在两种细胞的表达都有明显增加,但增加的程度不同.结论:JWA基因参与细胞氧化应激且在不同类型的细胞中作用机制不同;JWA蛋白可能是一种与HSP27作用有关的蛋白.
-
过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系
目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制.方法用0.01、0.1、1 mmol/L的 H2O2处理K562细胞10、30、60、180 min建立氧化损伤模型;用0.1 mmol/L H2O2处理不同时间(6 ～ 48 h)和不同浓度(0.5 ～ 1 000 μmol/L)的H2O2处理48 h分别诱导K562细胞凋亡, 然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平.结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0.01 mmol/L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、 hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似.结论 JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关.
-
苯并(a)芘作用下人胚肺细胞JWA基因的表达及其与DNA损伤修复的关系
目的研究苯并(a)芘诱导人胚肺(ccc-HPF-1)细胞DNA损伤修复中基因JWA和热休克蛋白(hsp70)的表达规律,探讨JWA基因参与细胞DNA损伤修复的作用和可能机制.方法建立ccc-HPF-1细胞DNA损伤模型, 在S9活化状态下分别以10～100 μmol/L 苯并(a)芘处理细胞3 h收获细胞或再恢复24 h,用碱性单细胞凝胶电泳鉴定DNA损伤和修复情况,免疫印迹方法检测JWA和hsp70的表达水平.结果在DNA损伤模型中,苯并(a)芘活跃地调节JWA的表达,50 μmol/L和100 μmol/L 处理组JWA和hsp70明显上调,在恢复期内10～100 μmol/L处理组两者都处于较高的表达水平并且JWA和hsp70的表达规律几乎完全一致.结论 JWA是一个有效的环境应答基因,活跃地参与细胞应答与DNA切除修复有关的信号通路.
-
JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达及意义
为了研究JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达规律,探讨其在白血病细胞分化和凋亡中的意义及可能的作用机制,应用FCM检测HL-60细胞经ATRA(10-6 mol/L)、Ara-C(10 ng/ml)、TPA(10-8 mol/L)作用后2、4、6、8天CD13、CD14、CD15、CD11b改变及细胞周期变化;应用半定量RT-PCR及蛋白印迹技术检测JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达趋势以及相关凋亡因子Bcl-2、HSP27和HSP70的表达.结果表明:经上述药物分别处理HL-60细胞后,不同时段FCM相关指标检测结果证明其分别向粒、单核、巨噬细胞样分化.JWA基因表达呈时间依赖性升高;Bcl-2则呈时间依赖性下降;HSP70在ATRA及TPA组与JWA表达呈正相关,与Bcl-2呈负相关,而各组HSP27并无表达.ATRA处理HL-60细胞后JWA基因表达趋势与原代细胞相反,且不需要ATRA诱导分化作为前提.分别以Ara-C 10 ng/ml和Ara-C 20 ng/ml处理HL-60细胞后,JWA基因的表达呈反向变化,即前者呈时间依赖性增加,而后者则下降.结论:JWA基因在实现ATRA及TPA诱导白血病细胞分化和凋亡中可能具有双重调节作用;JWA基因表达的高低与Ara-C诱导分化作用及细胞毒作用有关;HL-60细胞与原代白血病细胞在诱导分化机制方面可能不尽相同.
-
肿瘤细胞JWA基因启动子甲基化的初步研究
目的:探讨肿瘤细胞中JWA基因启动子甲基化的状态及其对基因转录活性的影响.方法 用报告基因法检测JWA基因启动子甲基化对基因转录活性的影响,用亚硫酸氢盐测序法检测JWA基因启动子CpG岛内的甲基化位点.用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)法检测不同肿瘤细胞株(U937、HL60、K562、NB4)以及在白血病患者外周血单个核细胞中JWA基因启动子甲基化的分布.亚硫氢酸盐测序法检测CpG岛内发生甲基化位点.结果 用甲基化酶处理报告基因后JWA基因启动子的转录活性明显下降.用亚硫氢酸盐测序法检测肿瘤细胞株中JWA基因启动子CpG岛未发现甲基化的CpG位点.用MSP法检测U937、HL60、K562、NB4肿瘤细胞和白血病患者外周血单个核细胞的D N A样本均未发现肿瘤细胞启动子甲基化.结论 JWA基因启动子甲基化可导致肿瘤细胞JWA基因的转录活性下降,但在所检测的肿瘤细胞及白血病细胞中可能无甲基化现象.
-
JWA基因与恶性肿瘤关系的研究进展
肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,也是临床治疗的难题.近年来对肿瘤抑制基因的研究已成为肿瘤转移机制研究的热点.JWA基因是周建伟等1998年发现和克隆的受全反式维甲酸诱导的新的细胞骨架相关基因[1].近年来研究显示该基因具有肿瘤转移抑制作用.本文将在国内外新研究成果的基础上对JWA基因及其编码产物结构、功能、抑制肿瘤细胞迁移的可能机制以及与多种恶性肿瘤的关系做以下综述.
-
体外转染JWA核酶逆转录病毒载体对人骨髓基质细胞黏附功能的影响
目的 探讨JWA核酶基因转染对人骨髓基质细胞(BMSC)黏附功能的影响.方法 设计合成JWA核酶基因并构建于逆转录病毒载体pLXSN上,转染体外培养的人BMSC(BMSC-JWARZ组),应用半定量RT-PCR法(sqRT-PCR)测定细胞内JWA mRNA的表达,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管黏附分子-l(VCAM-1)的表达,并检测共培养条件下BMSC对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞增殖变化.以pLXSN空载体转染的BMSC(BMSC-pLXSN组)及未转染细胞(BMSC组)为对照.结果 BMSC-JWARZ组JWA mRNA表达量[吸光度(A)值]为0.187±0.045,较BMSC-pLXSN组(0.382±0.039)及BMSC组(0.366±0.048)显著降低;BMSC-JWARZ组细胞表面ICAM-1阳性细胞率为(16.11±3.93)%,较B-pLXSN组[(38.24±5.37)%]及BMSC组[(36.27±6.19)%]显著降低;BMSC-JWARZ组细胞表面VCAM-l阳性细胞率为(12.08±3.34)%,较BMSC-pLXSN组[(26.88±5.17)%]及BMSC组[(24.55±3.68)%]显著降低;B-JWARZ组细胞对Jurkat细胞的黏附率为(23.65±5.27)%,较BMSC-pLXSN组[(35.14±8.11)%]及BMSC组[(33.72±6.29)%]显著降低,与BMSC-JWARZ组细胞共培养的Jurkat细胞倍增时间为58.7 h,明显长于与BMSC-pLXSN组(44.1 h)及BMSC组(43.7 h)细胞共培养时.结论 JWA核酶基因转染可抑制人BMSC内JWA基因的表达,抑制骨髓基质细胞黏附功能.
-
JWA rs7038功能性变异与鳞状细胞食管癌发病的相关性
目的：探讨环境应答基因JWA基因多态性对食管鳞癌易感性的影响。方法采用1∶1配对病例对照研究，应用条件LOGISTIC回归模型，探讨JWA 基因rs7038功能性变异对食管鳞癌易感性的影响。结果三种不同遗传模型下JWA基因SNP位rs7038与食管鳞癌发生均无关联。未发现rs7038与吸烟饮酒间未存在交互作用。结论虽然未发现JWA基因rs7038功能性遗传变异与食管鳞癌的相关性，但是不排除该单核苷酸多肽性（ SNP）位点可能与其他SNP位点或环境因素联合作用共同影响肿瘤发生的可能。
-
小鼠腹水JWA单克隆抗体的制备鉴定
建立小鼠腹水中JWA单克隆抗体(Monoelonalantibody,mAb)的制备方法及鉴定,获得高纯度、高效价的JWA单克隆抗体.对预先用弗氏不完全佐剂处理的小鼠腹腔接种JWA单克隆抗体杂交瘤细胞,收集小鼠腹水、离心,采用Protien G亲和柱层析法进行亲和层析纯化JWA单克隆抗体,并采用SDS-PAGE检测方法分析纯化抗体的纯度.分别运用细胞免疫荧光、免疫印迹技术鉴定纯化的抗体特异性.BCA法测定纯化后JWA单抗的浓度为6.79 mg/mL;SDS-PAGE电泳显示纯化的抗体只有IgG的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;纯化后的JWA单抗在免疫荧光实验可以检测到细胞中JWA蛋白在胞浆中呈丝状均匀分布,与前期实验结果一致.免疫印迹实验中1∶800、1∶400均可以得到清晰的目的条带.用Protein G亲和层析法获得了高纯度和较高效价的JWA单克隆抗体,这将为JWA蛋白的基础和应用研究提供技术支持.
-
急性非淋巴细胞性白血病中JWA基因表达的意义
目的:探讨JWA基因表达与不同病期急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的相关意义.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测24例不同病期的ANLL患者骨髓和(或)外周血中JWA基因的表达.结果:JWA基因表达在初发ANLL为13/13(100%阳性),完全缓解时为1/4,复发患者为3/4,由骨髓增生异常综合征(MDS)转化而来为1/3.结论:JWA可能参与原发ANLL的某个发病过程,其与白血病的发生、发展以及预后的关系有待进一步研究.
关键词： JWA基因 急性非淋巴细胞性白血病 细胞分化 -
JWA基因-76G＞C和454C＞A多态性与宫颈癌易感性
目的:探讨JWA基因多态性与江苏人群宫颈癌易感性之间的关系.方法:采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测227例宫颈癌患者和333例年龄、性别相匹配的非肿瘤者JWA-76G＞C、454C＞A和723T＞G多态性的频率和分布.比较不同基因型携带者患宫颈癌的危险性,通过分层分析探讨初潮年龄、初次生育年龄和产次对患宫颈癌的影响.结果:JWA-76GC和454AA基因型均可增加罹患宫颈癌的危险性.携带3-5个危险等位基因者比携带0-2个等位基因者患官颈癌的危险性更大(OR=1.70.95%CI=1.20～2.42).分层分析结果显示,初潮年龄早、生育年龄晚和产次多且携带3-5危险等位基因者能增加患宫颈癌的危险性.本研究未发现JWA基因723T＞G多态性与宫颈癌之间存在显著相关.结论:JWA基因-76G＞C和454C＞A多态性显著增加江苏地区汉族人群患宫颈癌的危险性.
-
JWA基因多态性与消化道肿瘤易感性关系的研究
目的:研究中国江苏人群JWA基因单核苷酸多态性(SNPs)与消化道肿瘤易感性的关系.方法:采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对年龄、性别相匹配的202例消化道肿瘤患者和215例健康人群的外周血淋巴细胞基因组DNA标本检测了JWA启动子-76G/C和外显子3区723T/G SNPs的频率和分布,用DNA直接测序法证实SNPs变异.分析探讨JWA基因多态性和消化道肿瘤易感性的关系.结果:-76G/C多态性在消化道病例中的频率(19.3%)显著高于对照(10.7%).-76G/C变异时罹患消化道肿瘤的危险性是正常时的1.99倍(调整的比值比:1.99;95%可信区间:1.14～3.48).存在上述变异位点的男性患者患消化道肿瘤的危险性增加,而与性别及饮酒的关系不明显.723T/G多态性频率在消化道肿瘤患者和对照人群中的分布无显著差异.结论:在中国江苏汉族人群中,JWA基因5'侧翼区的多态位点-76G/C变异显著增加江苏汉族人群患消化道肿瘤的危险性,外显子3区多态723T/G则无显著性差异.
-
JWA基因对食管鳞癌Ecal09细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
目的 探讨JWA基因对食管鳞癌Ecal09细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 PCR扩增人源JWA基因序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-JWA-GFP.通过脂质体转染将pcDNA3.1-JWA-GFP导入人食管鳞癌Ecal09细胞中(实验组)；转染pcDNA3.1-CT-GFP作为对照组.测定两组细胞的细胞倍增时间、细胞凋亡率以及侵袭细胞率.结果 实验组细胞倍增时间为(27.3±1.4)h,长于对照组的(23.9±1.6)h(P＜0.01)；实验组凋亡细胞比例也较对照组明显增加[(23.8±1.9)％vs.(8.6±0.9)％](P＜0.01).实验组的侵袭细胞率低于对照组[(11.8±1.7)％ vs.(31.5±4.1)％](P＜0.01).结论 JWA基因高表达能抑制Ecal09细胞的增殖和侵袭能力,并能促进其凋亡.
-
半定量RT-PCR检测JWA基因在慢性粒细胞性白血病的表达
目的探讨JWA基因表达与慢性粒细胞性白血病(CML)的相关意义.方法应用半定量RT-PCR技术检测26例CML患者骨髓和/或外周血JWA基因的表达. 结果 JWA基因表达在CML慢性期高达15/18例;而急变期(含加速期) 为2/8例.结论 JWA基因的下调可能与CML急变的某个过程相关,具体机制仍有待进一步研究.
-
全反式维甲酸对骨髓基质细胞黏附功能及JWA基因表达变化的影响
目的探讨全反式维甲酸对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC)黏附功能及JWA基因表达的影响.方法全反式维甲酸(all trans retinoic acid, atRA)作用BMSC后,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)和血管黏附分子-1(vascular adhesion molecule-1, VCAM-1)的表达,检测共培养条件下BMSC细胞对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞生长曲线变化,RT-PCR方法检测BMSC JWA mRNA表达变化.结果 atRA作用后,BMSC表面ICAM-1、VCAM-1蛋白表达增加,BMSC对Jurkat细胞的黏附能力增强,并可促进Jurkat细胞增殖,BMSC内JWA-mRNA表达增强.结论 atRA可增强骨髓基质细胞黏附功能,并上调JWA基因表达.
-
JWA基因启动子-76G→C多态性和膀胱癌易感性关系的配对研究
目的检测JWA启动子单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),探讨其对基因转录活性的影响和与膀胱癌遗传易感性的相关性.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性和DNA测序的方法,检测了155例膀胱癌病例和155例非肿瘤对照人群的JWA基因启动子多态性位点;构建启动子多态性片段氯霉素乙酰转移酶报告基因重组质粒,瞬时转染NIH-3T3细胞,检测启动子多态性片段对基因转录活性的影响.结果检测到一个新SNP-76G→C;C等位基因和GC基因型频率在膀胱癌病例组为10.00%、20.00%,比正常对照组(5.16%、10.32%)高,差异有统计学意义(P＜0.05);与GG基因型相比,GC基因型启动子的转录活性显著降低(P＜0.01).Logistic多元回归分析结果(P＜0.05,OR=2.05)显示这一多态性可能是形成膀胱癌新的独立危险因素.结论 JWA基因启动子-76G→C多态性可能影响JWA基因转录和表达,从而增加膀胱癌易感性.
关键词： JWA基因 膀胱癌 聚合酶链反应-单链构象多态性 单核苷酸多态性 启动子
