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粉防己碱对小鼠、家兔和豚鼠肠平滑肌的药效学研究
目的:研究钙拮抗剂粉防已碱(tetridrine,Tet)对小鼠、家兔和豚鼠肠平滑肌的影响.方法:采用小鼠胃肠推进运动,家兔和豚鼠离体肠平滑肌标本.结果:Tet(10～15mg·kg-1ig)对小鼠肠平滑肌运动无明显抑制作用(P＞0.05),Tet可抑制家兔离体回肠自发性收缩,Tet(10umol·L-1)抑制氨甲酰胆碱诱导的豚鼠结肠带细胞(内钙)依赖收缩,但不影响细胞(外钙)依赖细胞收缩.Tet浓度依赖性地使KCI的量效曲线右移,大反应降低,pD′2为4.01.结论:Tet主要抑制肠平滑肌电压依赖性钙通道(PDC),阻止Ca2+通过PDC.
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外源性乙酰胆碱和一氧化氮对大鼠胃电节律作用的实验研究
目的:观察应用不同的胆碱能神经和氮能神经激动剂或抑制剂后胃电节律的变化,探讨外源性乙酰胆碱和一氧化氮对大鼠胃电节律的影响.方法:20只大鼠随机分为2组:正常对照组(12只)和药物作用组(8只),记录硝普钠、阿托品、氯化氨甲酰胆碱(CCH)、左型精氨酸甲酯(L-NAME)以及新斯的明等药物对胃电节律影响.结果:硝普钠和大剂量阿托品、CCH、L-NAME均可引起明显的胃电节律失常,异常节律指数(ARI)和慢波频率变异系数(CV)明显升高;CCH和硝普钠合用时胃电节律失常较单用硝普钠或新斯的明时好转.结论:一氧化氮和乙酰胆碱之间在调节胃电节律时存在着精细的平衡,当失去平衡尤其是一氧化氮增加而乙酰胆碱减少时,则胃电节律失常明显增加.
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分离大鼠大脑皮质神经元长时程单细胞内Ca2+的测定
采用酶解结合机械分离方法,急性分离生后6～7 d的SD大鼠的大脑皮质神经元;用Fura -2作为钙离子指示剂,用M40 钙离子测量系统(PTI)长时程测量单个细胞内钙离子浓度的变化.以激发光波长340 nm和380 nm时510 nm处的荧光发射强度比率(340/380)显示胞内C a2+ 浓度的动态变化.用高K+ (60 mmoL/L)、低K+(1 mmol/L)、氨甲酰胆碱(Carbachol, 108～107 mmol/L)作为刺激物,观察胞内Ca2+浓度的变化.结果发现,高K+ 引起去极化刺激,导致Ca2+浓度迅速增加,在去除刺激后自动恢复正常;低K+和 Carbachol能诱发自发钙震荡;且63个细胞中37个有自发Ca2+浓度震荡现象,震荡的频率和幅度不尽相同.结果提示,急性分离的单个神经元可用于Ca2+浓度测定,神经元在无突触联系存在的情况下可诱发或自发钙震荡.
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扁桃斑鸠菊叶子提取物的泻下作用
扁桃斑鸠菊Vernonia amygdalina Del.在尼日利亚作为药用植物，用于治疗发烧、胃肠疾病，其新鲜叶子用作堕胎药及泻下剂。有报道从其叶子中分离得到的一种倍半萜内酯(vernolepin)具有抗血小板活性。另有报道称其叶的提取部分有抗血栓作用，并能降低兔的血糖。 作者研究了扁桃斑鸠菊的泻下作用。干燥植物叶粉末在甲醇中浸泡24 h，回收溶剂得到浸膏。实验所用动物为Wis-tar大鼠和Swiss小鼠。 作者分别研究了经口给予该浸膏对小鼠肠蠕动、大鼠胃排空、致泻作用以及大鼠离体胃底部肌肉带收缩性的影响。 实验结果表明，经口给予浸膏后肠蠕动加速、胃排空加快，但其作用不如毒蕈碱激动剂氯化氨甲酰胆碱(carbach01)作用强。扁桃斑鸠菊中含有皂苷、糖苷及丹宁等化学成分，它们可以认为是引起泻下的活性物质。 该浸膏还以剂量依赖方式使大鼠胃底部肌肉带收缩，这种作用可被阿托品抑制，所以该浸膏可认为是毒簟碱激动剂。 (常海涛摘译史玉俊校)〔Awe S O, Makinde J M, Olajide O A. Fitoterapia 1999,70:161〕
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氨甲酰胆碱增加大鼠心室肌细胞收缩机制的初步研究
目的:本文研究非选择性M受体激动剂氨甲酰胆碱(Cch)对心肌细胞收缩的作用,并同时观察L-型钙流,探讨其机制.方法:以分离大鼠的单个心室肌细胞为对象,采用膜片钳和单细胞收缩测量技术,在35℃恒温,细胞外钙离子浓度1.8 mmol/L,0.2 Hz,1.0 Hz刺激下测量细胞收缩幅度和ICa(L)、INa/Ca.结果:①大鼠心肌细胞收缩与刺激频率呈负相关;②选择△L0.2 Hz/△L1.0 Hz≥1.25(n=6)的细胞给予1.0 Hz的刺激,100 μmol/L Cch增加大鼠心室肌细胞收缩28%.③ Cch作用能被非选择性M受体阻滞剂阿托品阻滞,选择性M1受体激动剂MCN-A-343 100 μmol/L对细胞收缩无影响.④ 100 μmol/L Cch对ICa(L)无影响,但增加从+ 10 mV复极到-40 mV所产生的晚期尾电流,提示INa/Ca加大.结论:Cch能加强大鼠心室肌细胞收缩,它的作用由M2受体介导,其机制可能是通过加强INa/Ca,增加肌质网(SR)内的钙内容和钙释放,导致细胞收缩加强,而非通过L-型钙流.
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AT1受体在脑胆碱能刺激引起的蓝斑TH免疫反应活性变化中的作用
目的:探讨大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(carbachol,CBC)后蓝斑儿茶酚胺能神经元活性和血管紧张素能AT1受体表达的变化以及阻断AT1受体对上述变化的影响.方法:选用SD雄性大鼠,利用免疫组织化学方法,观察侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5μg)和/或losartan(20μg)后40 min,蓝斑的酪氨酸羟化酶(tyrosine hy-droxylase,TH)及AT1受体免疫反应活性的变化.结果:侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5μg)后40 min,蓝斑的TH及AT1受体免疫反应阳性神经元数目明显增多(P＜0.05),免疫染色强度明显增强(P＜0.05).losartan预处理后蓝斑的TH免疫反应活性和AT1受体表达明显下降(P＜0.05).结论:侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱对蓝斑儿茶酚胺能神经元具有兴奋作用,AT1受体表达增强;阻断脑血管紧张素能AT1受体可下调氨甲酰胆碱在蓝斑诱导的上述变化.
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脑胆碱能刺激引起的促钠排泄反应和蓝斑ChAT-IR的变化
目的:观察大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(CBC)后蓝斑胆碱能神经元活性变化及其与促钠排泄反应的关系.方法:选用SD雄性大鼠通过整体实验和免疫组化方法,观察侧脑室给予氨甲酰胆碱(0.5μg)和/或阿托品(30μg)后肾排钠量的变化及蓝斑胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性的变化.结果:侧脑室给予氨甲酰胆碱后40 min,肾排钠量显著增加,蓝斑的ChAT-IR明显增强(P＜0.05);阿托品预处理后可明显抑制上述反应.结论:蓝斑的胆碱能神经元参与侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应.
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脑胆碱能刺激引起的促钠排泄反应和肾的ChAT-IR的变化
目的:观察肾胆碱能系统在大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(CBC)诱导的促钠排泄反应中的作用.方法:通过整体实验和免疫组化的方法观察大鼠侧脑室注射CBC 0.5 μg后,肾排纳量的变化和肾的但碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性的变化;阿托品(30 μg)阻断脑胆碱能M受体后,对上述效应的影响.结果:侧脑室给予CBC后40 min,肾排钠量显著增加,肾近曲小管ChAT-IR显著增强(P＜0.05);阿托品阻断后,上述反应显著减弱(P＜0.05).结论:肾小管上皮细胞的胆碱能系统可能参与脑胆碱能刺激引起的肾促钠排泄反应.
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桑白皮醇提取物对白三烯拮抗活性的研究(1)
目的考察桑白皮醇提取物(MA)对白三烯、组胺、氨甲酰胆碱及抗原的对抗作用.方法采用离体气管条实验研究MA对白三烯D4、组胺、氨甲酰胆碱及抗原的对抗作用.结果 MA对LTD4引起的气管平滑肌痉挛收缩具有竞争性拮抗作用,并且该作用不为普萘洛尔、格列苯脲所阻断,与选择性白三烯受体拮抗剂普仑司特(Pranlukast)相似.对组胺、氨甲酰胆碱引起的气管平滑肌痉挛也具有一定的对抗作用,显示出与普仑司特不同的作用特点.同时对抗原引起的气管平滑肌痉挛也具有明显的对抗作用.结论桑白皮醇提取物MA具有白三烯拮抗活性,提示桑白皮平喘作用可能与此有关,同时其作用与选择性白三烯受体拮抗剂普仑司特相比有一定的差别,提示可能还有其他的作用机制存在.
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氨甲酰胆碱通过M2胆碱能受体对大鼠心肌细胞发挥正性肌力作用
为研究氨甲酰胆碱(carbachol,CCh)对大鼠心肌细胞的正性肌力作用机制,利用电压钳方法观察CCh对急性分离的单个大鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa,L)和钠/钙交换电流(INa/Ca)的影响.细胞负载Fura-2/AM后,用离子成像系统测定场刺激下单个大鼠心肌细胞的钙瞬变和细胞缩短.结果表明,100 μmol/L CCh使正向INa/Ca从(1.18±0.57)pA/pF增加到(1.65±0.52)pA/pF(P＜O.01),反向INa/Ca从(1.11±0.49)pA/pF增加到(1.53±0.52)pA/pF(P＜0.01),但不影响ICa,L.阿托品(非选择性M胆碱受体拮抗剂)和methoctramine(选择性M2胆碱受体拮抗剂)可阻断这种增加作用.100 μmol/L CCh使钙瞬变从对照组的203.8±50.0增加到234.8±64.3,使细胞缩短从对照组的(3.00±0.67)μm增加到(3.55±1.21)μm.KB-R7943(选择性反向INa/Ca抑制剂)不影响钙瞬变和细胞缩短的基础水平,却完全阻断CCh引起的钙瞬变和细胞缩短的增加.尼卡地平(ICa,L抑制剂)抑制钙瞬变和细胞缩短.CCh在尼卡地平存在下仍可增加钙瞬变和细胞缩短值,提示其正性肌力作用是通过刺激钠/钙交换实现的.CCh不改变钙敏感性.阿托品和methoctramine阻断CCh的这种激动作用,说明CCh的正性肌力作用是通过M2受体实现的.以上结果提示,CCh对大鼠心肌细胞有正性肌力作用,这种作用是通过激动反向钠/钙交换实现,由M2受体介导.
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氨甲酰胆碱通过M2毒蕈碱受体增加豚鼠心肌细胞钠钙交换电流
本文旨在研究氨甲酰胆碱(carbachol,CCh)对豚鼠心肌的正性变力性机制.用Axon200A膜片钳放大器观察CCh对电压钳制下的豚鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa)和钠钙交换电流(INa/Ca)的效应.结果表明,CCh(100μmol/L)分别使正向INa/Ca从对照组的(1.2±0.1)pA/pF增加到(2.0±0.3)pA/pF,使反向INa/Ca从对照组的(1.3±0.5)pA/pF增加到(2.1±0.8)pA/pF(P＜0.01).CCh对ICa无影响.CCh对INa/Cc的激动作用可被阿托品和methoctramine所阻断.以上结果提示,CCh对豚鼠心脏的正性变力作用是通过激动了钠钙交换,而且是M2毒蕈碱受体所介导的.
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镇静小鼠的非侵入式气道反应性测定法及药物作用
目的:建立并验证镇静小鼠气道反应性的非侵入式测定法,探讨小鼠气道高反应性与气道炎症的关系.方法:观察致敏及药物对小鼠引喘阈浓度的影响,及支气管-肺泡灌洗液(BALF)中白细胞渗出量的变化.结果:与未致敏小鼠相比,致敏小鼠吸入OA 6h的MCh引喘阈浓度显著降低,BALF中白细胞渗出量显著增高,地塞米松(7.5mg/kg)和氨茶碱(37.5 mg/kg)可降低致敏小鼠吸入OA引起的气道反应性增高和BALF中白细胞渗出的增加.结论:本模型可有效地检测小鼠气道反应性,抗原引起的小鼠气道高反应性与气道炎症有关.
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艾叶油的呼吸系统药理研究-Ⅱ,抗过敏作用
目的:本文研究艾叶油的抗过敏作用.方法:采用致敏豚鼠气管Schultz-Dale反应,组胺或氨甲酰胆碱引起的豚鼠气管收缩,大鼠被动皮肤过敏,5-羟色胺引起的大鼠皮肤毛细血管通透性增强,豚鼠肺组织释放过敏性慢反应物质(SRS-A),SRS-A收缩豚鼠回肠等试验.结果:艾叶油抑制致敏豚鼠气管Schultz-Dale反应(IC50:98.6mg/L);100mg/L明显降低组胺或氨甲酰胆碱引起的豚鼠气管收缩pD2值;明显抑制大鼠被动皮肤过敏(ID50:0.22g/kg)和5-羟色胺引起的大鼠皮肤毛细血管通透性增强反应(ID50:0.52g/kg);抑制豚鼠肺组织释放SRS-A(IC50:49.7mg/L);拮抗SRS-A对豚鼠回肠的收缩(IC50:34.9mg/L).结论:艾叶油具有抗过敏作用,对呼吸道过敏反应有保护作用,是其治疗支气管哮喘和慢性气管炎作用机制之一.
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非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用及药理学特征
目的:观察淋巴细胞非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用.方法:利用MTT比色法检测AChRs激动剂氨甲酰胆碱对刀豆蛋白A诱导的离体小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响.结果:氨甲酰胆碱在不同的浓度呈现不同的作用,在10-11～10-9 mol·L-1和10-5～10-4 mol·L-1时显著促进淋巴细胞的增殖,阿托品(10-7 mol·L-1)可以阻断该效应.而氨甲酰胆碱(10-7～10-6 mol·L-1)可显著抑制淋巴细胞的增殖,美加明(10-7 mol·L-1)可以阻断其作用.提示氨甲酰胆碱在10-11～10-9 mol·L-1和10-5～10-4 mol·L-1可通过激活mAChRs促进淋巴细胞的增殖,而在10-7～10-6 mol·L-1通过激活nAChRs抑制淋巴细胞的增殖.结论:氨甲酰胆碱通过激活非神经性mAChRs 和nAChRs对淋巴细胞增殖反应产生促进增殖和抑制增殖的双向调节作用.
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氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达的调节作用
目的:比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达调节作用的异同点.方法:氨甲酰胆碱和毛果芸香碱分别孵育培养的牛主动脉内皮细胞10 h后,提取细胞总RNA,RT-PCR方法测定M受体5个亚型mRNA的表达.结果:M1～M5受体mRNA在牛主动脉内皮细胞上均有表达,氨甲酰胆碱和毛果芸香碱孵育后表达量均增加,但二者之间无差异.结论:氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对M受体5个亚型的基因表达均发生了相同的影响,两者对M受体可能的作用尚不能解释其对血管张力的影响.
关键词： 毒蕈碱样乙酰胆碱受体 血管内皮细胞 氨甲酰胆碱 毛果芸香碱 基因表达 -
内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对胞内钙信号的调节
目的:研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标(ETA)对不同类型血管内皮细胞[Ca2+]i水平的影响;以[Ca2+]i水平作为鉴定ETA功能的指标之一,观察其在传代过程中的改变,为研究ETA的分子结构及其信号转导途径提供实验依据.方法:采用激光共聚焦技术,以荧光指示剂Fluo-3为探针,观察乙酰胆碱(ACh)和氨甲酰胆碱(carbachol,Car)对内皮细胞[Ca2+]i水平的影响.结果:ACh和Car在10-5～10-2 mol*L-1可使3～10代牛主动脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高,ACh在 10-8～10-2 mol*L-1可使8代人冠脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高.结论:内皮细胞在10代培养过程中外源性激动剂ACh和Car均可诱导胞内[Ca2+]i水平升高,ETA的功能与[Ca2+]i水平升高有关.
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激活血管内皮细胞非神经性M受体对不同亚型G蛋白基因表达的影响
目的研究G蛋白各亚型在内皮细胞上的表达分布,以及氨甲酰胆碱和毛果芸香碱的调节作用.方法培养大鼠主动脉内皮细胞,用氨甲酰胆碱和毛果芸香碱10-4mol·L-1分别孵育,6 h后提取细胞总RNA,RT-PCR方法测定G蛋白不同亚型Mrna的表达.结果 G蛋白4个亚家族中的Gq/11 、Gs、Gi在内皮细胞有表达,而G12/13未见表达,氨甲酰胆碱和毛果芸香碱分别作用6 h后,Gs、Gi家族、Gq/11家族中的G11蛋白基因表达均未发生变化,只有Gq/11家族中的Gq蛋白在氨甲酰胆碱10-4 mol·L-1作用下,基因表达上调了72.7%,而相同浓度的毛果芸香碱却不影响Gq蛋白的基因表达.结论氨甲酰胆碱激活NNMR后,G蛋白4个亚家族中只有Gq/11家族中的Gq蛋白基因表达发生了变化,可以推测Gq蛋白在NNMR的信号转导中发挥了主要的作用.
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冠脉内应用氨甲酰胆碱对心室复极的影响
目的探讨氨甲酰胆碱对完整动物心脏心室复极的影响.方法在4只绵羊冠状动脉回旋支内分别注入1.0 mol·L-1和 2.5 mol·L-1的氨甲酰胆碱,注射时间3min.记录回旋支支配区域心外膜心电图,测量心室的激动-恢复间期(ARI)以代表心室复极时间.静脉给予一氧化氮合成抑制剂(L-精氨酸20 mg·kg-1)后,再次冠脉内给予2.5 mol·L-1的氨甲酰胆碱.结果回旋支内灌注1.0 mol·L-1和 2.5 mol·L-1的氨甲酰胆碱导致其支配区域心外膜心电图心室激动-恢复间期分别延长(38±17) ms 和 (58±14) ms(P<0.05).氨甲酰胆碱所致的心室激动-恢复间期延长被L-精氨酸所阻断.结论冠脉内注射氨甲酰胆碱延长心室激动-恢复间期或心室复极时间,内源性一氧化氮很可能介导氨甲酰胆碱心室复极的影响.
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激活乙酰胆碱作用靶标对血管内皮细胞基因表达的影响
目的研究激活乙酰胆碱作用靶标(ETA)对血管内皮细胞基因表达的影响.方法采用人类cDNA表达谱芯片,比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对人冠脉内皮细胞基因表达的影响及其生物学功能.结果既激活ETA又激活M受体的氨甲酰胆碱,以及仅激活M受体的毛果芸香碱,在100 μmol·L-1浓度下与内皮细胞共孵育10 h,以含有14 000条人类unigene的BiostarH-14112S cDNA表达谱芯片检测内皮细胞基因表达的变化,发现差异基因共801条.两药共同诱导的差异基因491条,上调205条,下调286条.两药诱导差异基因存在很大差别,其中氨甲酰胆碱诱导上调基因119条,下调基因191条,这些差异基因均不受毛果芸香碱的影响.进一步分析氨甲酰胆碱特异性诱导差异基因的功能,发现有受体与G蛋白、离子通道、血栓、动脉粥样硬化相关基因等七大类.结论氨甲酰胆碱特异性诱导的差异基因与ETA及其效应器系统以及激活ETA产生抗动脉粥样硬化和抗血栓的分子机制相关.
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麻黄碱与总皂苷对豚鼠气管平滑肌松弛的协同作用
目的探讨麻黄碱与总皂苷在平喘作用方面有无协同作用.方法将麻黄碱与总皂苷分成麻黄碱+总皂苷组、总皂苷组和麻黄碱组进行离体豚鼠气管平滑肌松弛作用强度比较.结果麻黄碱+总皂苷组直接松弛豚鼠离体气管平滑肌的作用强度是麻黄碱组的3.5倍(P<0.05),总皂苷组无作用(P>0.05).麻黄碱+总皂苷组对氨甲酰胆碱(carbamylcholine,CCH)引起气管平滑肌收缩反应的解痉强度与麻黄碱组相同,但两者都比总皂苷组强(P<0.05).麻黄碱+总皂苷、麻黄碱和总皂苷组预先处理气管平滑肌均呈浓度依赖抑制CCH收缩反应,三者之间的作用强度无差异.结论总皂苷对麻黄碱在直接松弛气管平滑肌和抑制CCH引起的气管平滑肌收缩方面具有明显的协同作用,但在解痉方面的协同作用不明显.
