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阳离子磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸转染大鼠心肌成纤维细胞的研究
目的：探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体的反义寡核苷酸(AS-ODN)对离体培养的大鼠心肌成纤维细胞 AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法：MTT 法检测 MPC与心肌成纤维细胞的细胞相容性；应用激光扫描共聚焦显微镜(CLAM)检测复合物在细胞内的定位，流式细胞仪(FCM)检测转染效率及荧光强度， Western blot检测AT1受体蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果：MPC浓度＞40μg/mL时才出现明显细胞毒性，激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围，少量分布于细胞核内。流式结果显示转染效率及荧光强度随N/P比增加而明显增大。Western blot结果显示，转染复合物后各组细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白的表达也相应减少。结论：MPC30-DEA70在安全浓度范围内就能够携带AT1R-ASODN以较高的转染率进入离体培养的大鼠心肌成纤维细胞，并成功靶向抑制AT1R及Ⅰ型胶原蛋白的表达。从而可以推断阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载反义寡核苷酸(AS-ODN)，靶向性抑制基因的表达，为新型非病毒性基因载体的研究提供了一定的理论依据。
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内皮细胞血管紧张素Ⅱ信号转导通路的研究进展
血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)不仅发挥着收缩血管和调节血压的功能,还参与炎症、内皮细胞功能障碍、动脉粥样硬化、高血压和充血性心衰的发生与发展.Ang Ⅱ通过AT1受体,激活内皮细胞MAPK、NADPH和ROS、非受体酪氨酸激酶及受体酪氨酸激酶通路产生各种生物学效应,参与内皮细胞功能调节,引发内皮细胞功能障碍和血管的炎症反应.
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血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对心肌细胞肥大的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、AT1受体拮抗剂氯沙坦和AT2受体拮抗剂PD123177对心肌细胞蛋白质合成速率和AT1受体mRNA表达的影响。方法 采用3H-亮氨酸掺入法测定培养的心肌细胞蛋白质合成速率，RT-PCR方法检测心肌细胞AT1受体mRNA表达。结果 在培养的心肌细胞中加入AngⅡ可明显增加心肌细胞3H-亮氨酸的掺入量，并呈剂量依赖性，氯沙坦可显著抑制AngⅡ引起的蛋白质合成增加，而PD123177对其无影响；AngⅡ上调AT1受体基因表达，氯沙坦抑制其上调，PD123177无影响。结论 AngⅡ可通过上调AT1受体引起心肌细胞肥大，氯沙坦下调AT1受体，抑制心肌细胞肥大。
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哌唑嗪联合缬沙坦治疗α1和AT1受体自身抗体阳性的2型糖尿病合并难治性高血压患者的疗效评估
目的 观察哌唑嗪联合缬沙坦治疗α1和AT1受体自身抗体阳性的T2DM合并难治性高血压(R-HT)的疗效.方法 以合成的α1和AT1受体多肽片段为抗原,应用ELISA技术,检测282例人血清抗α1和AT1受体自身抗体:DM合并R-HT者117例(DM+R-HT组),DM合并非R-HT 119 例(DM+NR-HT组),正常对照46名(NC组).其中DM+R-HT组中抗α1和AT1受体自身抗体均阳性者37例为RAAb(+)组,两受体自身抗体均阴性者30例为RAAb(-)组.RAAb(+)组和RRAb(-)组均给予缬沙坦80mg,日一次,口服;哌唑嗪1mg,日三次,口服;尼群地平10mg,日三次,口服;双氯噻嗪12.5mg,日一次,口服;阿司匹林100mg,日一次,口服;观察两组降压疗效. 结果 DM+R-HT组抗α1和AT1受体自身抗体阳性率明显高于DM+NR-HT组和NC组(P均＜0.01).RAAb(+)组降压疗效明显优于RAAb(-)组.临床降压效果评定,RAAb(+)组总有效率为89.2%,RAAb(-)组为60.0%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 对糖尿病合并难治性高血压,通过抗α1和AT1受体自身抗体检测,有针对性地选择降压药物哌唑嗪和缬沙坦,降压疗效好且较安全.
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姜黄素对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅰ型受体表达的影响
目的 观察姜黄素对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅰ型(AT1)受体表达的影响. 方法 选取瘦型及肥胖型Zucker大鼠各16只,随机分为瘦型溶剂(Lean Vehicle)组、肥胖型溶剂(Obese Vehicle)组、瘦型姜黄素(Lean Cureumin)组及肥胖型姜黄素(Obese Curcumin)组.分别给予溶剂或姜黄素(2.0 mmol/L)口服喂养4周后,ELISA测定血清丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平.RT-PCR及Western blot印迹法测定肾脏AT1受体mRNA及蛋白表达. 结果 Obese Vehicle组MDA水平较Lean Vehicle组升高[(3.5±0.8)vs(6.1±0.6)mmol/ml],GSH水平较Lean Vehicle组降低[(7.4±0.7)vs(3.4±0.5)nmol/mg)](P＜0.05).肾脏AT1受体mRNA及蛋白表达亦具有同样的规律(P＜0.05).姜黄素处理后,Obese Curcumin组MDA较Obese Vehicle组降低,GSH较Obese Vehicle组升高(P＜0.05),同时AT1受体mRNA及蛋白表达也降低(P＜0.05). 结论 姜黄素可降低肥胖大鼠氧化应激水平及肾脏AT1受体的表达,促进其血压的降低.
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AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激通路相关分子葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响
目的 探讨AT1受体自身抗体(AT1-AA)对DN大鼠肾脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响. 方法 制备DN大鼠模型,ELISA检测血清AT1-AA,根据ELISA结果随机选择AT1-AA阳性和阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时设立正常对照组(NC,n=6).电镜观察肾脏超微结构变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;RT-PCR测定大鼠肾组织GRP78和CHOP mRNA水平;Western blot分析肾组织中GRP78和CHOP蛋白的表达量. 结果 DN组肾脏细胞凋亡率较NC组升高,其中,AT1-AA阳性大鼠凋亡率高于AT1-AA阴性大鼠[(20.05±1.71)％vs(13.24±4.93)％](P＜0.01).与NC组相比,DN组肾组织GRP78、CHOP蛋白和mRNA水平均上调;进一步比较发现,AT1-AA阳性DN大鼠GRP78,CHOP蛋白及mRNA水平升高较AT1-AA阴性DN大鼠更明显. 结论 AT1-AA可能通过诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并经ERS相关的CHOP凋亡信号通路而促进肾脏细胞凋亡,加重肾脏损害.
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血管紧张素Ⅱ受体1型胞外第二肽段免疫介导大鼠血管结构变化及机制
目的观察血管紧张素Ⅱ受体1型胞外第二肽段免疫大鼠的血管结构变化并初步探讨其机制.方法用人工合成的人血管紧张素Ⅱ受体1型(AT1R)胞外第二肽段(165-191氨基酸)免疫Wistar大鼠并饲养1年,观察1年内免疫大鼠体内抗AT1R抗体的产生及其血压心率的变化.1年后处死大鼠,收集其动脉行光镜和电镜切片检查免疫后血管的病理结构和超微结构改变;用亲和层析的方法纯化抗AT1R抗体,抗体对血管平滑肌细胞增殖的影响用BrdU掺入法和细胞周期分析,对胞原癌基因表达的影响用RT-PCR检测.结果免疫后抗AT1R抗体浓度逐渐增高,到第3个月达高峰,以后抗体逐渐减少.1年后可见免疫动物动脉血管存在病理结构和超微结构改变,但血压和心率不随抗体的变化而改变.亲和纯化的抗AT1R抗体能促进血管平滑肌细胞增殖,同时伴有原癌基因c-jun表达的增加,这些作用均能被AT1R阻断剂洛沙坦抑制.结论人工合成AT1R肽段免疫大鼠可产生抗AT1R抗体,不影响大鼠血压和心率.抗AT1R抗体可促进血管平滑肌细胞增殖并上调c-jun的表达,并导致血管重塑.
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AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响
目的 研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响.方法 以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42t12(10-9～10-7mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7mol/L)作用不同时间(8、16、24h),应用Western blotting和RT-PCR法检测AT1受体蛋白和mRNA表达的改变.采用CGP42112(10- 7mol/L)预先作用24h,观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下Na+-K+ -ATP酶活性的影响；比较CGP42112(10-7mol/L)作用30min与作用24h后洗脱2h,Na+ -K+ -ATP酶活性的差异.结果 CGP42112作用于AT2受体后可明显抑制RPT细胞AT1受体蛋白的表达,且呈现一定的浓度与时间依赖性.CGP42112(10-7mol/L)能够抑制AT1受体mRNA的表达水平.与AngⅡ单独作用比较,CGP42112(10 7mol/L)预处理24h可使AngⅡ(10-11mol/L)增强Na+ -K+- ATP酶活性的效应明显降低.CGP42112(10 7mol/L)作用30min后,Na+ -K+ -ATP酶活性显著降低；但作用24h洗脱后2h,Na+-K+ -ATP酶活性与对照组比较无明显差异.结论 AT2受体能够抑制SHR大鼠RPT细胞AT1受体的表达及其介导的Na+ -K+ -ATP酶活性增强的效应.
关键词： AT2受体 AT1受体 自发性高血压大鼠 肾脏近曲小管上皮细胞 -
心律失常发病机制研究进展
心律失常是心血管疾病常见的临床表现形式,尤其是室性心动过速、心室颤动等恶性心律失常,不但加重原有心脏疾病,还可诱发心源性猝死.目前抗心律失常药物的疗效并不十分理想,总有效率只有30% ～60%.人们对心律失常作用机制的认识仍有限,因此,揭示心律失常发生的深层机制,寻找新的作用靶点是抗心律失常研究领域的重点、难点.近年人们发现心房特异性钾离子通道电流IKur、IKAch等参与了心房颤动,这使心房颤动治疗的研究向前推进一步.钙渗漏、缝隙连接蛋白及钙通道自身抗体在心律失常发生中发挥重要作用.这些发现为开发更有效的抗心律失常药物提供了理论基础.近年研究发现,一类调控基因的小分子RNA(microRNA,miRNA)在心血管疾病的发生、发展中起重要作用,特别是对心律失常及其引起的猝死起关键作用.miR-1、miR-133、miR-590等对心肌缺血、心肌梗死伴随的心律失常表现出明显调控作用.miRNA的生物学特性是同时对多个靶点具有调控作用,这使其具有成为理想抗心律失常靶点的潜力,为心律失常及猝死的防治带来希望.
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氯沙坦对血管紧张素II致培养的牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用
目的观察氯沙坦对血管紧张素II(Ang II)致牛脑微血管内皮细胞(BCMECs)损伤的保护作用.方法用分光光度计测定培养的BCMECs乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量,流式细胞仪测定BCMECs细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达量,硝酸还原酶法和放射免疫分析法分别测定BCMECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET1)的含量.结果 Ang II呈剂量依赖性增加BCMECs LDH漏出、NO和ET1释放及ICAM-1表达,氯沙坦对此均有明显抑制作用.结论氯沙坦抑制Ang II致体外培养BCMECs的损伤.
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氯沙坦对小而密低密度脂蛋白致培养的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用
目的:观察氯沙坦对小而密低密度脂蛋白(sLDL)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法:分离、鉴定sLDL;用连续监测法测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;用丙二醛试剂盒测定各组细胞上清中丙二醛(MDA)浓度;用硝酸还原酶法测定各组细胞分泌的一氧化氮(NO)量;用细胞-酶联免疫吸附法检测细胞膜上细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白表达量;反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测ICAM-1mRNA水平.结果:sLDL使HUVECs LDH漏出增多、MDA生成增多、NO分泌减少、ICAM-1表达增多,氯沙坦对此均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.结论:氯沙坦抑制sLDL致体外培养HUVECs的损伤.
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血管紧张素受体生物学特征的研究概况
肾素-血管紧张素系统中的AngⅡ、AngⅢ、AngⅣ和Ang1-7等血管活性多肽通过与血管紧张素受体结合发挥调控作用。已发现的血管紧张素受体有AT1、AT2、AT3和AT4受体，可能存在的有Ang1-7受体、血管紧张素核受体和c-mas原癌基因产物等。本文就AT1和AT2受体的生物学特征做一综述。
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血管紧张素Ⅱ2型受体对血管和肾脏功能的影响
肾素-血管紧张素系统(RAS)是机体调节血压和肾脏排钠的重要功能系统,其效应分子血管紧张素Ⅱ主要包括两种受体血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2).血管紧张素Ⅱ的主要功能是通过AT1受体介导的.现在越来越多的研究表明AT2受体有拮抗AT1受体的作用主要表现在血管舒张方面.近几年来研究表明AT2受体的微血管舒张作用是通过缓激肽相关或无关的方式产生NO来介导.虽然AT2受体在肾脏的近端小管、远端小管和血管系统都存在表达,AT2受体刺激诱导肾脏的缓激肽(bradykinin)/NO通道,但很少有关AT2受体调节肾功能和钠外排方面有价值的研究.现就近年来对AT2受体在血管舒张和肾功能的影响方面的新研究进展简要综述.
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血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体致血管内皮炎性损伤的研究
目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)自身抗体(AT1-AA)长期作用下大鼠血管内皮是否会发生炎性损伤.方法 以人工合成的人AT1R的细胞外第二环功能表位肽段(AT1R-ECⅡ)为抗原,主动免疫雌性Wistar大鼠9个月,建立AT1-AA阳性的大鼠模型.血细胞涂片法检测大鼠血中血细胞变化情况,以激光共聚焦法检测大鼠血管内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,以免疫组化法检测血管内皮细胞血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的表达.结果 主动免疫的Wistar大鼠(n=9)血清中产生了高滴度的IgG类AT1-AA,从免疫2个月开始直到免疫结束,抗体维持在较恒定的高水平[免疫9个月时光密度值与同期溶剂对照组比较,(1.79±0.26)比(0.43±0.15),P＜0.01].免疫结束时,同溶剂对照组相比,大鼠血中白细胞数目有升高趋势,血小板数量显著下降,而血红蛋白含量未变.大鼠胸主动脉内皮细胞ICAM-1[荧光值(2.97±0.50)比(1.63±0.48),P＜0.05]和VCAM-1[平均光密度值MOD( 0.27 ±0.04)比(0.17±0.04),P＜0.05]表达均显著上调.结论 AT1-AA长期刺激可引起大鼠血管内皮细胞发生炎性损伤.
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抗血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体对在体大鼠心功能的影响
目的 观察抗血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1-R)抗体对在体大鼠心功能的影响.方法 健康Wistar大鼠随机分为5组:对照组、抗AT1-R抗体组、抗AT1-R抗体+AT1受体阻断剂Losartan处理组、血管紧张素Ⅱ组、血管紧张素Ⅱ+Losartart组.通过MS2000生物信号记录分析系统记录左心室收缩压(LVSP)、左心室内压大上升速率和大下降速率(±dP/dtmax).结果 抗AT1-R抗体可显著升高大鼠LVSP、±dP/dtmax(P＜0.05),且这种增强心功能的效应可被Losartan逆转.结论 抗AT1-R抗体可能通过激活AT1受体而发挥正性变力效应.
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原发性高血压与心脏β2、α1及AT1受体自身抗体的关系
目的探讨抗G-蛋白偶联型β2、α1及AT1受体的自身抗体在原发性高血压病程中的分布情况.方法应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术,以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,检测50例高血压心脏病、40例单纯高血压和40例正常人血清中抗G-蛋白偶联家族中β2、α1和AT1受体的自身抗体.结果高血压心脏病患者血清中抗G-蛋白偶联型β2、α1和AT1受体自身抗体的阳性率明显高于单纯高血压和正常组(P＜0.05);高血压心脏病自身抗体阳性的平均几何滴度与单纯性高血压比较无明显差异(P＞0.05),但两组阳性抗体的平均几何滴度均明显高于正常组.高血压心脏病抗β2受体自身抗体阳性患者中,81.0%同时具有α1受体的自身抗体,76.2%同时具有AT1受体的自身抗体,52.4%存在上述3种受体的自身抗体.结论抗G-蛋白偶联型β2、α1及AT1受体的自身抗体参与原发性高血压的病理生理过程,可能与心肌和血管重构有关.
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血管紧张素Ⅱ及其受体AT1在动脉粥样硬化发生发展的作用
血管紧张素Ⅱ通过增加趋化蛋白和多种细胞粘附分子的表达,促进血管内膜单核巨噬细胞的聚集和淋巴细胞的侵润;同时激活NADH/NADPH氧化酶系统产生大量的氧自由基,减少NO,并氧化修饰LDL,使巨噬细胞膜上的ox-LDL受体上调,加速泡沫细胞的形成.AngⅡ直接地或通过其他生长因子间接地促进平滑肌细胞的增殖和迁移.此外AngⅡ对凝血和纤溶系统及多种细胞因子的表达均有影响.AngⅡ通过AT1受体参与了动脉粥样硬化发生的各种机制.
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受体拮抗剂靶向治疗对糖尿病肾病患者降低蛋白尿疗效分析
目的 观察受体拮抗剂靶向治疗与常规治疗对糖尿病肾脏病减少蛋白尿的临床疗效.方法 以合成的β1和AT1受体多肽片段为抗原,应用ELISA技术,检测271例糖尿病肾病患者血清抗β1和AT1受体自身抗体,根据检测结果分为受体自身抗体阳性组171例(阳性组中AT1、β1受体自身抗体均阳性者为靶向治疗组,71例)、受体自身抗体阴性组100例(阴性组中AT1和β1受体自身抗体均阴性者为常规治疗组,57例)和正常对照组40例.治疗组均给予酒石酸美托洛尔(metoprolol tartrate)、缬沙坦、非洛地平、双氯噻嗪、阿司匹林,治疗前后检测尿微量白蛋白和血压,分别观察靶向治疗和常规治疗对降压和减少尿微量白蛋白尿的疗效.结果 271例糖尿病肾病患者中受体自身抗体阳性率为63.1%(171/271),阴性率为36.9%(100/271),阳性率明显高阴性率,同样其阳性率明显高于正常对照组的12.5%(5/40),差异均有统计学意义(P<0.05).靶向治疗组降压及减少蛋白尿疗效明显优于常规治疗组(P<0.01).结论 糖尿病肾脏病患者通过抗β1和AT1受体自身抗体检测,有针对性的酒石酸美托洛尔和缬沙坦受体拮抗剂靶向治疗,可提高降压及减少蛋白尿疗效且较安全.
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AT1受体在脑胆碱能刺激引起的蓝斑TH免疫反应活性变化中的作用
目的:探讨大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(carbachol,CBC)后蓝斑儿茶酚胺能神经元活性和血管紧张素能AT1受体表达的变化以及阻断AT1受体对上述变化的影响.方法:选用SD雄性大鼠,利用免疫组织化学方法,观察侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5μg)和/或losartan(20μg)后40 min,蓝斑的酪氨酸羟化酶(tyrosine hy-droxylase,TH)及AT1受体免疫反应活性的变化.结果:侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5μg)后40 min,蓝斑的TH及AT1受体免疫反应阳性神经元数目明显增多(P＜0.05),免疫染色强度明显增强(P＜0.05).losartan预处理后蓝斑的TH免疫反应活性和AT1受体表达明显下降(P＜0.05).结论:侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱对蓝斑儿茶酚胺能神经元具有兴奋作用,AT1受体表达增强;阻断脑血管紧张素能AT1受体可下调氨甲酰胆碱在蓝斑诱导的上述变化.
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AT1受体在脑内胆碱能刺激引起的钠水排泄反应中的作用
目的和方法:本工作通过整体实验和免疫组化的方法,观察脑血管紧张素能AT1受体在侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应中的作用和下丘脑室旁核TH-IR的变化.结果:用脑血管紧张素能AT1受体阻断剂Losartan(20 μg)预处理,可部分阻断侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应和利尿作用(P<0.05).免疫组化实验显示侧脑室给予氨甲酰胆碱后40 min,下丘脑室旁核(PVH)、室周核(Pe)、弓状核(Arc)和下丘脑前区后部(AHP)的酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应活性明显增强. Losartan预处理后侧脑室再注射氨甲酰胆碱,除PaPo的免疫反应活性未发生明显变化外,上述其余神经核团的TH免疫反应活性明显下降.结论:在脑胆碱能刺激引起的钠水排泄反应中有AT1受体的参与;阻断脑血管紧张素能AT1受体对胆碱能刺激引起Arc 、Pe和AHP的儿茶酚胺能神经元兴奋性有下调作用.提示脑血管紧张素能和儿茶酚胺能神经通路在下丘脑室旁核等脑区共同参与介导了脑内胆碱能刺激引起的促钠排泄反应,同时血管紧张素能神经元还影响儿茶酚胺能神经元的功能活动.
