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AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响
目的 研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响.方法 以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42t12(10-9～10-7mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7mol/L)作用不同时间(8、16、24h),应用Western blotting和RT-PCR法检测AT1受体蛋白和mRNA表达的改变.采用CGP42112(10- 7mol/L)预先作用24h,观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下Na+-K+ -ATP酶活性的影响；比较CGP42112(10-7mol/L)作用30min与作用24h后洗脱2h,Na+ -K+ -ATP酶活性的差异.结果 CGP42112作用于AT2受体后可明显抑制RPT细胞AT1受体蛋白的表达,且呈现一定的浓度与时间依赖性.CGP42112(10-7mol/L)能够抑制AT1受体mRNA的表达水平.与AngⅡ单独作用比较,CGP42112(10 7mol/L)预处理24h可使AngⅡ(10-11mol/L)增强Na+ -K+- ATP酶活性的效应明显降低.CGP42112(10 7mol/L)作用30min后,Na+ -K+ -ATP酶活性显著降低；但作用24h洗脱后2h,Na+-K+ -ATP酶活性与对照组比较无明显差异.结论 AT2受体能够抑制SHR大鼠RPT细胞AT1受体的表达及其介导的Na+ -K+ -ATP酶活性增强的效应.
关键词： AT2受体 AT1受体 自发性高血压大鼠 肾脏近曲小管上皮细胞 -
血管紧张素受体生物学特征的研究概况
肾素-血管紧张素系统中的AngⅡ、AngⅢ、AngⅣ和Ang1-7等血管活性多肽通过与血管紧张素受体结合发挥调控作用。已发现的血管紧张素受体有AT1、AT2、AT3和AT4受体，可能存在的有Ang1-7受体、血管紧张素核受体和c-mas原癌基因产物等。本文就AT1和AT2受体的生物学特征做一综述。
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血管紧张素Ⅱ2型受体对血管和肾脏功能的影响
肾素-血管紧张素系统(RAS)是机体调节血压和肾脏排钠的重要功能系统,其效应分子血管紧张素Ⅱ主要包括两种受体血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2).血管紧张素Ⅱ的主要功能是通过AT1受体介导的.现在越来越多的研究表明AT2受体有拮抗AT1受体的作用主要表现在血管舒张方面.近几年来研究表明AT2受体的微血管舒张作用是通过缓激肽相关或无关的方式产生NO来介导.虽然AT2受体在肾脏的近端小管、远端小管和血管系统都存在表达,AT2受体刺激诱导肾脏的缓激肽(bradykinin)/NO通道,但很少有关AT2受体调节肾功能和钠外排方面有价值的研究.现就近年来对AT2受体在血管舒张和肾功能的影响方面的新研究进展简要综述.
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siRNA沉默AT2受体通过Ang(1-9)-ACE2-AT2通路抑制心脏微血管内皮细胞NO的生成
目的 研究重组人血管紧张素转化酶2(rhAC E2)作用于心脏微血管内皮细胞后对NO产生的影响,采用siRNA沉默AT2受体研究Ang(1-9)-ACE2-AT2通路在这一过程中的作用.方法 体外培养人心脏微血管内皮细胞(CMVEC),分为对照组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+rhACE2组、AT2受体抑制剂组和阴性对照siRNA组.Griess试剂法测定细胞培养上清液中NO的含量,RT-PCR检测HUVEC中eNOS mRNA的表达,检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性.Western blot检测磷酸化eNOS的表达.观察rhACE2对Ang Ⅱ作用后CMVEC生成NO、eNOS mRNA、eNOS蛋白表达的影响,同时观察加用AT2受体抑制剂PD123319干预后,rhACE2对磷酸化eNOS蛋白表达的影响.观察siRNA干扰CMVEC中AT2受体蛋白后对eNOS活性、NO的影响.结果 Ang Ⅱ组NO的含量[(3.495±0.362)nmol/L]明显低于对照组[(11.513 ±0.392)nmol/L,P＜0.05];Ang Ⅱ+rhACE2组细胞培养液中NO的含量和磷酸化eNOS表达水平均明显高于Ang Ⅱ组(P＜0.05),而eNOS mR-NA和非磷酸化eNOS蛋白表达水平与Ang Ⅱ组相比无统计学差异(P＞0.05).经AT2通路抑制剂PD123319干预后的AT2受体抑制剂组磷酸化eNOS表达水平明显低于Ang Ⅱ+rhACE2 30 min组(P＜0.05).Western blot检测结果显示转染AT2siRNA组转染48 h AT2受体蛋白表达降低(P＜0.05);与AT2受体抑制剂组和阴性对照siRNA组相比,转染AT2 siRNA组的eNOS活性和NO含量均显著降低.结论 rhACE2作用于人心脏微血管内皮细胞后,eNOS活性增强,NO生成增加,Ang(1-9)-ACE2-AT2信号通路参与这一过程.
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浅谈血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的应用
血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统(RAS)中主要活性肽,已发现的血管紧张素Ⅱ受体可分为AT1、AT2、AT4,其中AT1和AT2受体介导了血管紧张素Ⅱ在心血管及其他方面的作用.
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AT2R+与AT2R-人骨髓单个核细胞对于心肌梗死后心肌细胞的保护作用
目的 观察心肌梗死后人骨髓单个核细胞(BMMNCs)中AT2R的表达情况.比较AT2R+BMMNCs与AT2R-BMMNCs在体外对受损心肌细胞的保护能力.方法 术中抽取患者骨髓.流式细胞仪分选出AT2R+BMMNCs.利用8μm孑L径的Transwell迁移检测系统比较AT2R+ BMMNCs和AT2R-BMMNCs的迁移能力;分离SD乳鼠心肌细胞,并分别与AT2R+ BMMNCs和AT2R-BMMNCs共培养,RT-PCR检测AT2R+BMMNCs和AT2R-BMMNCs向心肌细胞转分化的能力(心脏发育相关转录因子Nkx2.5和Gata4表达)的影响.在缺氧、无血清的条件下,AT2R+BMMNCs和AT2R-BMMNCs分别与心肌细胞H9C2共培养,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 流式细胞仪分选结果显示:心肌梗死患者骨髓样本中AT2R表达量较非心肌梗死患者上升约5.85％ (P =0.039 8).体外实验发现,AT2R+ BMMNCs在迁移和向心肌细胞转分化方面的能力均优于AT2R-BMMNCs;与AT2R-BMMNCs相比,AT2R+ BMMNCs对心肌细胞H9C2在缺氧和无血清条件下的抗凋亡作用更强.结论 心肌梗死后患者骨髓中AT2R的表达明显上调.AT2R+ BMMNCs可能对心肌梗死后的心肌细胞具有保护作用.
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血管紧张素Ⅱ-2型受体在心血管疾病炎症反应中的作用
心血管疾病多伴有慢性炎症反应.肾素一血管紧张素系统(RAS)参与心血管炎症的发生和发展,血管紧张素Ⅱ(ANG Ⅱ)的炎症作用主要通过其1型受体(AT1受体)实现.相较于AT1受体,人们对ANGⅡ2型受体(AT2受体)的了解还不是很深入.近年来发现AT2受体也参与许多心血管疾病炎症反应进程,激活AT2受体能从不同层面抑制炎症的发展.该文就AT2受体参与调节心血管系统炎症反应的机制作一综述.
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血管紧张素Ⅱ受体阻断对心肌成纤维细胞信号转导相关基因表达谱的影响
为了研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)受体在成年大鼠心肌成纤维细胞的信号转导机制,分离及培养成年Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞,采用免疫组化染色测定Ang Ⅱ受体的蛋白表达.将细胞随机分为四组进行药物干预48 h:Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+losartan组、Ang Ⅱ+PDl23319组和Ang Ⅱ+losartan+PDl23319组.抽提mRNA制备cDNA探针,与G蛋白耦联受体信号通路发现者基因芯片杂交,筛选表达差异的基因.发现血管紧张素Ⅱ 1型(angiotensin Ⅱ type1,ATl)受体被losartan阻断后,Ang Ⅱ刺激的心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 2型(angiotensin Ⅱ type 2,AT2)受体蛋白高表达;34个基因表达差异在2倍以上,30个下调,4个上调,其大改变不超过20倍;9条信号通路被活化:cAMP/PKA、Ca2+、PKC、PLC、MAPK、PI-3K、NO-cGMP、Rho、NF-кB通路.当AT2受体被PDl23319阻断时,64个基因表达差异在2倍以上,48个下调,16个上调;11条途径基础活化,其中7个基因的改变在30倍以上:Cypl9al(37倍)、Illr2(42倍)、Cflar(53倍)、Bcl21(31倍)、Pik3cg(278倍)、Cdknla(90倍)、Agt(162倍).在AT1受体阻断的基础上再阻断AT2受体,46个基因表达差异在2倍以上,36个下调,10个上调;11条信号途径全部活化.其结果与单独阻断AT2受体信号途径基本一致.RT-PCR选取IL-1β和TNF-α进行验证,结果与芯片各组间的变化趋势基本相符.结果表明,在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断明显不同于AT1受体阻断,在信号转导通路相关基因表达谱上,两者有显著差异.
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心梗后心肌重构过程中AT1A、AT2受体表达的变化
为探讨AT1、 AT2 受体在心肌重构演变过程中的作用, 本实验应用免疫组化、电镜技术和图像分析方法, 观察了大鼠心梗后心肌重构过程中非梗塞区AT1、 AT2受体表达的动态变化。结果显示, 心梗术后3 d, 电镜显示非梗塞区心肌细胞肌原纤维横纹消失, 线粒体肿胀, 成纤维细胞增多, 免疫组化显示AT1A受体在非梗塞区心肌组织表达明显升高(P<0.001), AT2受体表达无明显变化(P>0.05); 心梗术后14 d, 可见心肌细胞肌原纤维横纹, 心肌细胞间胶原纤维明显增多, 同时AT1A受体在心肌的表达比心梗术后3 d 时减弱, 但仍高于对照组(P<0.05), AT2受体表达明显增加(P<0.001)。结果提示: 心梗后非梗塞区心肌AT1A、 AT2受体表达先后上调, 可能参与介导心肌重构过程。
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血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失不影响肾素-血管紧张素系统
基于目前对血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)功能的认识,认为血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和AT2受体有相互拮抗作用.依据上述论点,本研究利用AT2受体基因敲出小鼠,观察了AT2受体缺失后是否造成肾素-血管紧张素系统其它成分代偿性紊乱.结果发现,AT2受体基因缺失小鼠血浆和肾组织中血管紧张素Ⅱ的浓度以及肾组织中肾素、AT1A受体的基因表达均未发生明显改变,表明AT2受体缺失未对肾素-血管紧张素系统产生显著影响,AT2受体的功能已被代偿,但代偿途径尚有待于进一步研究.
关键词： AT2受体 基因缺失 肾素-血管紧张素系统 -
AT2受体对心血管作用的研究进展
血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是多功能的血管活性物质,通过组织局部的特异性受体发挥作用.根据其受体的药理学和生物学特性的不同,目前已知AngⅡ受体有4种亚型, AT1、AT2、 AT3和AT4受体,在人体内主要有两种受体亚型:AT1和AT2受体,其中AT1受体介导了AngⅡ对心血管调控的大部分作用,如收缩血管、升高血压、促进细胞增殖、参与组织修复、心梗或心脏移植后的炎症过程等,而对AT2受体则所知甚少.随着对该亚型受体不断深入的认识,了解到AT2受体所介导的生物学作用多与AT1受体相拮抗[1].本文就AT2受体在心血管中的调节作用作一介绍.
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AT2受体cDNA重组质粒转染入培养的大鼠VSMC
目的:将构建的AT2RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞,为研究AT2R对血管平滑肌细胞生长的影响提供实验基础.方法:扩增、纯化重组质粒后,用脂质体介导法将重组质粒转染入培养的大鼠血管平滑肌细胞,分别用AT2RmRNA原位杂交、AT2R抗体免疫组化的方法从RNA和蛋白水平检测转染效果.结果:原位杂交显示部分细胞浆棕黄色阳性反应,显示转染率为9%,免疫组化结果显示部分血管平滑肌细胞膜上有AT2R蛋白存在.结论:成功将AT2RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞中.转染后AT2R能在大鼠主动脉平滑肌细胞表达的现象为进一步研究AT2 R对成年大鼠血管平滑肌细胞生长、凋亡的影响提供了实验基础.
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血管紧张素Ⅱ2型受体心血管效应的研究进展
血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensin Ⅱ type 2 receptor,AT2受体)是近年的研究热点,其主要发挥拮抗血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)的作用,如调控血压、抑制心肌肥厚及纤维化、抑制血管重建、保护心功能等心血管效应.但尚存在一些研究不支持以上结论,这可能与AT2受体数量及功能在不同个体、组织类型、病理生理状态下存在差别有关.
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血管紧张素Ⅱ受体、p53和Survivin在乳腺癌中的表达及相关性研究
目的:研究AT1受体、AT2受体、凋亡抑制基因p53、Survivin在乳腺癌中的表达情况,并探讨其相关性及临床意义.方法:采用免疫组化方法(SP法),对102例乳腺癌患者石蜡包埋切片中的AT1受体、AT2受体、Survivin及p53蛋白进行检测,采用χ2检验对结果进行分析.结果:乳腺癌组织中AT1受体的阳性表达率为48%(49/102),AT1受体表达与患者年龄、肿瘤大小、ER、PR无相关性,而与腋淋巴结转移呈正相关;乳腺癌组织中AT2受体的阳性表达率为59.8%(61/102),AT2受体表达与患者年龄、肿瘤大小、ER、PR无相关性,而与腋淋巴结转移成呈负相关; AT1受体表达与p53、Survivin表达呈正相关,AT2受体表达与p53、Survivin表达呈负相关,AT1受体表达与AT2受体表达呈负相关.结论:血管紧张素Ⅱ受体参与乳腺癌肿瘤细胞凋亡.
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AT2受体对成年大鼠心肌成纤维细胞ET-1蛋白及其mRNA水平的影响
1材料和方法1.1材料 雄性SD大鼠,体质量230～250 g(西安交通大学医学院实验动物中心提供);血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ),受体特异性阻断剂(PD123319)(美国Sigma公司);氯沙坦(1osartan,Los)(美国Du Pont &Merk Pharmaceuticals公司);RT-PCR试剂(美国Promega公司);内皮素1(endothelinl,ET1)放免试剂盒(解放军总医院科技开发中心放免所);兔抗大鼠AT2多抗(武汉博士德公司).
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压力负荷性大鼠肥厚心肌中AngⅡ受体的表达
目的 观察压力负荷性肥厚心肌中AngⅡ受体两种亚型AT1与AT2的表达变化及captopril干预对其表达的影响.方法 选用腹主动脉缩窄方法制造压力负荷大鼠模型,观察压力负荷性大鼠心肌肥厚程度及心肌中AT1与AT2表达的变化.结果 AC术后大鼠左室心肌肥大指数进行性加重,AC术后captopril干预可抑制心肌肥大发展;心肌中AC组心肌AT1受体的表达随AC的持续时间而不断上升,而AT2的表达仅在AC术后一过性增高,后随着左室负荷的持续而回降到对照水平,AT1/AT2值在AC术后1周时轻度升高,而后进行性降低;血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)AC术后干预在抑制心肌肥大发展的同时,显著抑制了心肌中的AT1表达,使AT1/AT2值显著回降.结论 持续压力负荷增高引起心肌中AT1表达进行性增高,而对AT2的表达仅表现为早期一过性影响.ACEI干预可显著降低持续压力负荷性心肌中的AT1表达,从而有效阻止了AngⅡ通过AT1介导启动的心肌肥厚效应.
